CYTOMEGALOVIRUS DETECTION FREQUENCY IN INFANTS BORN OWING TO USE OF AUXILIARY REPRODUCTIVE TECHNOLOGIES

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

Aim. To determine the frequency of detecting cytomegaloviral infection (CMVI) in infants born as a result of extracorporal fertilization (ECF). Materials and methods. Medical documentation and examination of 46 infants under 1 year, who were born by means of ECF, were analyzed. To detect CMV DNA and determine its quantitative content, PCR in a real-time mode (test-system “AmpliSens® SMV-screen/monitor-FL” (Russia)) was used. Saliva and urine served as the study material. Results. CMV DNA, determined in the saliva and urine, indicated the following: in 78,3 % (36/46) of infants, no viral DNA was revealed in any of media. In 21,7 % (10/46) of infants, salivary CMV DNA was detected, in 17,4 % (8/46) - urinary. Viral load median of CMV DNA in the saliva was 5,5l g copies of DNA/ml (confidence interval, CI - 4,9; 6,1), in the urine - 4,6 lg copies of DNA/ml (CI - 4,0; 5,2) with no reliable difference for the studied media. Finally, the share of CMV-positive infants, born by means of ECF within the first year of life was 21,7 %. Conclusions. Infants, born owing to ECF, in 65,2 % of cases are premature; CMVI frequency, verified by PCR-positive salivary and urinary tests among them is 21,0 %.

Full Text

Введение Широкая распространенность бесплодия, выявляющаяся сегодня у одной из шести супружеских пар, формирует большой спрос во всем мире на вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ), включая метод экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Уже более пяти миллионов детей родились в результате вспомогательных репродуктивных технологий, и несомненный интерес вызывает их здоровье, так как бесплодие может определять повышенный риск появления болезней потомства [6]. Исследования проводятся во многих странах с начала 90-х гг. XX в. Перинатальная смертность у родившихся после ЭКО в два раза превышает таковую в популяции и в группе после самопроизвольно наступившей беременности. R. Klemetti (2010) установлен высокий риск таких осложнений, как преждевременные роды (менее 37 недель беременности, OR = 1,72) и низкая масса при рождении (менее 2500 г, OR = 1,6). Течение неонатального периода осложняется церебральными нарушениями (30,1-32,4 %) и инфекционно-воспалительными заболеваниями (27-35,1 %) [5]. E. Turkgeldiа (2016) описывает риск обнаружения врожденных аномалий в 30-40 % случаев [9]. Особого внимания заслуживает работа L. Kettner (2015), представляющая собой обзор исследований баз данных Medline/PubMed, EMBASE, библиотеки Cochrane, bibliotek.dk, SveMed+ и CINAHL с 1996 по 2013 г. (874 исследования). Результаты показывают, что дети, зачатые с помощью вспомогательных репродуктивных технологий, подвергаются повышенному риску возникновения инфекционных заболеваний (OR = 0,37-5,7), по сравнению с родившимися после самопроизвольно наступившей беременности [6]. Одной из основных инфекций у этих детей в раннем возрасте является цитомегаловирусная (ЦМВИ). Согласно литературным данным, частота ЦМВ-инфицирования, определенная по ПЦР-позитивным пробам слюны и мочи, у новорожденных составляет 0,2-2,0 % [8], у недоношенных детей эта доля значительно выше - 16,0-18,0 % [4]. Лабораторная диагностика ЦМВИ основана на выявлении в исследуемых пробах клеток, пораженных цитомегаловирусом, самого вируса или его ДНК, его антигенов, а также специфических антител к вирусу [1]. Обнаружить вирусную ДНК непосредственно в исследуемых образцах позволяет метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), сочетающий в себе высокую чувствительность и специфичность. Достоинством метода является возможность раннего обнаружения возбудителя в организме пациента, еще до начала формирования иммунного ответа. В исследованиях современных зарубежных авторов сообщается о возможности использования метода ПЦР в качестве скринингового для выявления ЦМВИ у новорожденных; в качестве сред исследования предлагаются слюна и моча [3, 10]. Цель исследования - определить частоту выявления цитомегаловирусной инфекции у детей, родившихся в результате экстракорпорального оплодотворения. Материалы и методы исследования Исследование выполнено в 2016 г. на базе кафедры детских инфекционных болезней ФГБОУ ВО ПГМУ им. академика Е.А. Вагнера Минздрава РФ. Проведен анализ медицинской документации и осмотр 46 детей (25 мальчиков и 21 девочка) в возрасте до 1 года, родившихся с помощью ЭКО. Возрастной состав исследуемой когорты был следующим: 3-6 мес. - 26,0 % (12/46), 6-9 мес. - 52,2 % (24/46), 9-12 мес. - 21,8 % (10/46). Выявление ДНК ЦМВ и определение его количественного содержания проводили методом ПЦР в режиме реального времени с использованием тест-систем «АмплиСенс® CMV-скрин/монитор-FL» (Россия), валидированным относительно международного стандарта ВОЗ - 1st WHO International Standard for human cytomegalovirus for nucleic acid amplification techniques NIBSC code 09/162, version 3.0, 30/11/2010 (Великобритания). Коэффициент пересчета определяемой концентрации ДНК ЦМВ из копии/мл в МЕ/мл для данного набора реагентов равен 0,6:1,67 копии ДНК ЦМВ/мл = МЕ ДНК ЦМВ/мл. Диагностический порог чувствительности метода составляет 400 коп/мол. В качестве материала для исследования служили слюна и моча. Тестом на вирусную нагрузку (ВН) служила концентрация вирусной ДНК, в точности соответствующая концентрации самого вируса. За единицу измерения принято число копий вирусной ДНК в 1 мл биологической жидкости (слюны, мочи). Для удобства оценки значений ВН интегральная шкала количественной оценки ПЦР (N, коп/мл, где N - число копий вируса) была заменена на логарифмическую (N, lg коп/мл) с ранжированием по степеням [2]: 1. ВН ≥ 6,0 lg - высокая вирусная нагрузка. 2. 4,0 lg ≤ ВН < 6,0 lg - средняя вирусная нагрузка. 3. ВН < 4,0 lg - низкая вирусная нагрузка. Порог чувствительности метода в пересчете на логарифмическую шкалу составляет 2,6 lg (400 копий ДНК/мл). Статистическую обработку данных осуществляли с помощью программы Microsoft Eсxel. Вычисление средних показателей проводилось путем определения среднего арифметического и стандартного отклонения от него (δ). Сравнение частот производили с использованием критерия хи-квадрат (c2) на основании таблиц сопряженности. Результаты и их обсуждение Среди 46 детей группы исследования 12 человек (26,0 %) были от многоплодной беременности (6 двоен). Средний возраст матерей составил 34,0 ± 4,8 г., с длительным бесплодием (5-10 лет) - 47,5 % (19/40). У 90 % (36/40) роды были первыми; в 75,0 % случаев (30/40) - преждевременными (ранее 37 недель). Глубоко недоношенными родились 17,4 % (8/46) обследованных: в сроке 28-33 недели - 6 детей (1 двойня), менее 28 недель - 2 детей. Доля срочных родов оказалась в 1,9 раза меньше: 34,8 % (16/46) против 65,2 % (30/46), р = 0,007. Среднее значение массы тела новорожденных в группе исследования составило 2820,0 ± 929,0 г, роста - 46,9 ± 4,8 см. Низкую массу тела (менее 2500,0 г) имели 26,5 % (12/46). Частота эмбриофетодисплазий, выявленных при ультразвуковом исследовании (УЗИ) в раннем неонатальном периоде, составила 30,4 % (14/46) за счет малых аномалий развития сердца и мочеполовой системы. Клинико-эпидемиологический анализ первичной медицинской документации выявил широкую распространенность антенатальных факторов высокого риска возникновения внутриутробной инфекции: угроза прерывания беременности - 53,4 % (23/40), хроническая фетоплацентарная недостаточность - 50,0 % (20/40), однократные и повторные респираторные инфекции во время беременности - 60,0 % (24/40); обострение хронических экстрагенитальных и урогенитальных инфекций - 67,5 % (27/40). Из 40 матерей соматически здоровыми оказались только трое, в остальных случаях была зарегистрирована гематологическая 54,0 % (20/37), эндокринная 48,6,0 % (18/37), нефрологическая 18,9 % (7/37) и сосудистая 13,5 % (5/37) патология и их сочетание. Определение ДНК ЦМВ в слюне и моче показало: у 78,3 % (36/46) детей ни в одной из сред ДНК вируса не определялась. Эти дети считались здоровыми [7]. У 21,7 % (10/46) детей ДНК ЦМВ была обнаружена в слюне, у 17,4 % (8/46) - также в моче. Медиана вирусной нагрузки ДНК ЦМВ в слюне составила 5,5 lg копий ДНК/мл (доверительный интервал (ДИ) - 4,9; 6,1), в моче - 4,6 lg копий ДНК/мл (ДИ - 4,0; 5,2) что соответствует средней степени вирусной нагрузки. Таким образом, доля ЦМВ-позитивных детей, рожденных с помощью ЭКО, на 1-м году жизни составила 21,7 %. Клинически активная ЦМВИ имела место у 60,0 % (6/10) ЦМВИ-позитивных детей, у остальных течение заболевания на момент обследования было бессимптомным - латентным. Клинические формы активной инфекции у детей первого года жизни были следующими: состояние после генерализованной формы ЦМВИ внутриутробного происхождения с поражением ЦНС и респираторного тракта (1 случай, возраст 3 месяца), первично хронический гепатит с синдромом цитолиза и холестаза - 2 случая; гематологическая форма (анемия, нейтропения, тромбоцитопения) - 3 случая. По данным литературы известно, что клинические проявления постнатальной ЦМВИ находятся в обратной зависимости от гестационного возраста и массы тела при рождении [4]. И действительно, средний гестационный возраст 10 ЦМВ-позитивных детей, рожденных с помощью ЭКО, составил 34,0 ± 4,0 недели; четверо из них родились от многоплодной беременности (две двойни) недоношенными со средней массой тела 2265,0 ± 838,0 г. Выводы 1. Дети, родившиеся с помощью ЭКО, в 65,2 % случаев являются недоношенными с низкими массо-ростовыми показателями, соответствующими сроку гестации. 2. Частота ЦМВИ, верифицированная ПЦР-позитивными пробами слюны и мочи у детей, родившихся с помощью ЭКО, на первом году жизни составляет 21,0 %, во всех случаях при низком гестационном возрасте. 3. Широкая распространенность и многофакторность перинатального риска активации внутриутробного инфицирования герпес-вирусами у детей, родившихся с помощью ЭКО, требует проведения неинвазивного скринингового ПЦР-исследования слюны и мочи для верификации ДНК ЦМВ и определения высоты вирусной нагрузки.
×

References

  1. Кочкина С.С., Ситникова Е.П. Цитомегаловирусная инфекция у детей. Детские инфекции 2016; 1: 39-44.
  2. Леготина Н.С., Львова И.И., Дерюшева А.В. Способ оценки эффективности терапии хронической цитомегаловирусной инфекции у детей: Пат. № 2566074 Российская Федерация, МПК G01N33/53; опубл. 20.10.2015, БИ № 29.
  3. Boppana S.B., Ross S.A., Shimamura M. Saliva polymerase-chain-reaction assay for cytomegalovirus screening in newborns. N Engl J Med 2011; 364 (22): 2111-2118.
  4. Gunkel J., Wolfs T.F.W., Nijman J. Urine is superior to saliva when screening for postnatal CMV infections in preterm infants. J Clin Virol 2014; 61 (1): 61-64.
  5. Klemetti R. Perinatal health of IVF and ICSI children. Eur J of Obstet Reprod Biol 2010; 150 (2): 222-222.
  6. Kettner L., Henriksen T., Bay B. Assisted reproductive technology and somatic morbidity in childhood: a systematic review. Fertil Steril 2015; 103 (3): 707-719.
  7. Lazzarotto T. The best practices for screening, monitoring, and diagnosis of cytomegalovirus disease. Clin Microbiol Newsletter 2010; 32 (2): 9-15.
  8. Nijman J., van Loon A.M., de Vries L.S. Urine viral load and correlation with disease severity in infants with congenital or postnatal cytomegalovirus infection. J Clin Virol 2012; 54 (2): 121-124.
  9. Turkgeldia E., Yagmura H., Seyhanb A. Short and long term outcomes of children conceived with assisted reproductive technology. Eur J of Obstet Reprod Biol 2016; 207: 129-136.
  10. Yamamoto A.Y., Mussi-Pinhata M.M., Marin L.J. Is saliva as reliable as urine for detection of cytomegalovirus DNA for neonatal screening of congenital CMV infection? J Clin Virol 2006; 36 (3): 228-230.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2017 Permyakova A.V., Lvova I.I., Makhmudova S.E.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 70264 от 13.07.2017 г. 
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ЭЛ № ФС 77 - 75489 от 05.04.2019 г.


This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies