Эффект неполного нокаутирования гена пластидной крахмалфосфорилазы NtPHO1-L1 на метаболизм углеводов и каротиноидов в листьях Nicotiana tabacum L.
Dublin Core | Metadados PKP | Metadados do documento | |
1. | Título | Título do documento | Эффект неполного нокаутирования гена пластидной крахмалфосфорилазы NtPHO1-L1 на метаболизм углеводов и каротиноидов в листьях Nicotiana tabacum L. |
2. | Autor principal | Autor, estabelecimento, país | А. Нежданова; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia |
2. | Autor principal | Autor, estabelecimento, país | А. Кулакова; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia |
2. | Autor principal | Autor, estabelecimento, país | М. Слугина; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia |
2. | Autor principal | Autor, estabelecimento, país | А. Камионская; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia |
2. | Autor principal | Autor, estabelecimento, país | Е. Кочиева; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia |
2. | Autor principal | Autor, estabelecimento, país | А. Щенникова; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia |
3. | Assunto | Disciplinas | |
3. | Assunto | Palavras-chave | Nicotiana tabacum; CRISPR-Cas9; крахмалфосфорилаза; метаболизм крахмала; экспрессия генов |
4. | Descrição | Resumo | Метаболизм крахмала регулируется сложной каталитической сетью, одним из ключевых ферментов которой является пластидная крахмалфосфорилаза PHO1. В нашем исследовании с использованием системы CRISPR-Cas9 были получены растения табака (Nicotiana tabacum L.) с неполным нокаутом гена NtPHO1-L1 за счет делеционных вариантов каталитического домена белка NtPHO1-L1, приводящих к формированию нефункциональных форм фермента. Редактированные линии отличались от растений дикого типа повышенным накоплением крахмала и пониженным содержанием сахаров, хлорофиллов и каротиноидов в ткани листа. Показано, что в сравнении с контролем редактированные растения характеризовались дифференциальной экспрессией генов метаболизма крахмала (NtPHO1-L1, NtGWD, NtBAM1, NtBAM9, NtAI) и каротиноидов (NtPSY2, NtPDS, NtZDS, NtCRTISO, NtVDE), а также генов, кодирующих MADS-доменные транскрипционные факторы (NtFUL1, NtSEP1, NtSEP2, NtSEP3), которые предположительно участвуют в регуляции транскрипции исследуемых генов метаболизма. Предположено, что неполный нокаут NtPHO1-L1 приводит к изменению функциональной активности крахмалфосфорилазы табака. Это, в свою очередь, может влиять на скоординированную работу ферментов катаболизма крахмала, а также синтеза хлорофиллов и каротиноидов, возможно, за счет дифференциальной экспрессии MADS-box генов. Наши результаты подчеркивают критическую регуляторную роль пластидной крахмалфосфорилазы в метаболизме транзиторного крахмала, а также в стимулирующем влиянии на фотосинтез растения. |
5. | Editor | Organizador, cidade | The Russian Academy of Sciences |
6. | Contributor | Patrocinadores | |
7. | Data | (DD-MM-AAAA) | 11.11.2024 |
8. | Tipo | Tipo ou gênero da pesquisa | Artigo avaliado por pares |
8. | Tipo | Tipo | Artigo científico |
9. | Formato | Formato do arquivo | |
10. | Identificador | Identificador universal, URI | https://journals.eco-vector.com/0015-3303/article/view/648250 |
10. | Identificador | Digital Object Identifier (DOI) | 10.31857/S0015330324050091 |
10. | Identificador | eLIBRARY Document Number (EDN) | MMAQSH |
11. | Fonte | Revista/Conferêcia, tomo, número (ano) | Fiziologiâ rastenij; Volume 71, Nº 5 (2024): Генетическая инженерия растений – достижения и перспективы |
12. | Língua | Russian=ru, English=en | ru |
13. | Relação | Arquivos suplementares |
Fig. 1. Results of editing the NtPHO1-L1 plastid starch phosphorylase gene: (a) alignment of the target (editable) coding sequence of the NtPHO1-L1 gene (clones 1-10 of the edited Nt1 line in comparison with the unedited sequence of genes LOC107810306 and LOC107814807); (b) alignment of variants of the edited protein sequence NtPHO1-L1 in comparison with an unedited version (LOC107810306 and LOC107814807); (c) a comparative analysis of the secondary structure of the unedited enzyme NtPHO1‒L1 and protein with the KRY→N substitution introduced as a result of editing. A fragment of the sequence where the substitution occurred is shown (marked with an arrow). The simulation was carried out in the Phyre2 program based on the well-known c5lrbB_ matrix (alpha-1,4 glucan phosphorylase); 86% of both sequences were modeled with 100% confidence. (656KB) Fig. 2. Nicotiana tabacum transgenic lines (Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15) with mosaic knockout gene of plastid starch phosphorylase NtPHO1-L1 in comparison with nontransgenic control (WT): (a) ‒ photos of plants WT, Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 at the stage blooms (scale 10 cm); (b) ‒ comparison of the main characteristics of the control (WT, average for 20 plants) and edited T1 lines from Nt1 (average for 20 plants Nt1-1–Nt1-20; further, the graph shows individual values for each of the analyzed plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15). *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (467KB) 3. The content of starch, sucrose, glucose, fructose (mg/g of crude weight), the sum of carotenoids and chlorophylls a and b (mcg/g of crude weight) in the leaf tissue of plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 in comparison with nontransgenic control WT. *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (310KB) Fig. 4. Expression of starch metabolism genes (NtPHO1-L1, NtGWD, NtBAM1, NtBAM9, NtAI) and carotenoid biosynthesis (NtPSY2, NtPDS, NtCRTISO, NtZDS, NtVDE) in leaf tissue of plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 in comparison with nontransgenic control of WT. *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (391KB) Fig. 5. Expression of genes of MADS-domain TF (NtFUL1, NtSEP1, NtSEP2, NtSEP3) in leaf tissue of plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 in comparison with nontransgenic control of WT. *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (183KB) Supplement (18KB) |
14. | Cobertura | Abrangência espacial e temporal, metodologia de pesquisa | |
15. | Direitos Autorais | Direitos Autorais e Licenças |
Declaração de direitos autorais © Russian Academy of Sciences, 2024 |