Ver metadados

Эффект неполного нокаутирования гена пластидной крахмалфосфорилазы NtPHO1-L1 на метаболизм углеводов и каротиноидов в листьях Nicotiana tabacum L.

Dublin Core Metadados PKP Metadados do documento
1. Título Título do documento Эффект неполного нокаутирования гена пластидной крахмалфосфорилазы NtPHO1-L1 на метаболизм углеводов и каротиноидов в листьях Nicotiana tabacum L.
2. Autor principal Autor, estabelecimento, país А. Нежданова; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia
2. Autor principal Autor, estabelecimento, país А. Кулакова; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia
2. Autor principal Autor, estabelecimento, país М. Слугина; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia
2. Autor principal Autor, estabelecimento, país А. Камионская; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia
2. Autor principal Autor, estabelecimento, país Е. Кочиева; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia
2. Autor principal Autor, estabelecimento, país А. Щенникова; Институт биоинженерии им. К.Г. Скрябина Федерального исследовательского центра “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук; Rússia
3. Assunto Disciplinas
3. Assunto Palavras-chave Nicotiana tabacum; CRISPR-Cas9; крахмалфосфорилаза; метаболизм крахмала; экспрессия генов
4. Descrição Resumo

Метаболизм крахмала регулируется сложной каталитической сетью, одним из ключевых ферментов которой является пластидная крахмалфосфорилаза PHO1. В нашем исследовании с использованием системы CRISPR-Cas9 были получены растения табака (Nicotiana tabacum L.) с неполным нокаутом гена NtPHO1-L1 за счет делеционных вариантов каталитического домена белка NtPHO1-L1, приводящих к формированию нефункциональных форм фермента. Редактированные линии отличались от растений дикого типа повышенным накоплением крахмала и пониженным содержанием сахаров, хлорофиллов и каротиноидов в ткани листа. Показано, что в сравнении с контролем редактированные растения характеризовались дифференциальной экспрессией генов метаболизма крахмала (NtPHO1-L1, NtGWD, NtBAM1, NtBAM9, NtAI) и каротиноидов (NtPSY2, NtPDS, NtZDS, NtCRTISO, NtVDE), а также генов, кодирующих MADS-доменные транскрипционные факторы (NtFUL1, NtSEP1, NtSEP2, NtSEP3), которые предположительно участвуют в регуляции транскрипции исследуемых генов метаболизма. Предположено, что неполный нокаут NtPHO1-L1 приводит к изменению функциональной активности крахмалфосфорилазы табака. Это, в свою очередь, может влиять на скоординированную работу ферментов катаболизма крахмала, а также синтеза хлорофиллов и каротиноидов, возможно, за счет дифференциальной экспрессии MADS-box генов. Наши результаты подчеркивают критическую регуляторную роль пластидной крахмалфосфорилазы в метаболизме транзиторного крахмала, а также в стимулирующем влиянии на фотосинтез растения.

5. Editor Organizador, cidade The Russian Academy of Sciences
6. Contributor Patrocinadores
7. Data (DD-MM-AAAA) 11.11.2024
8. Tipo Tipo ou gênero da pesquisa Artigo avaliado por pares
8. Tipo Tipo Artigo científico
9. Formato Formato do arquivo
10. Identificador Identificador universal, URI https://journals.eco-vector.com/0015-3303/article/view/648250
10. Identificador Digital Object Identifier (DOI) 10.31857/S0015330324050091
10. Identificador eLIBRARY Document Number (EDN) MMAQSH
11. Fonte Revista/Conferêcia, tomo, número (ano) Fiziologiâ rastenij; Volume 71, Nº 5 (2024): Генетическая инженерия растений – достижения и перспективы
12. Língua Russian=ru, English=en ru
13. Relação Arquivos suplementares Fig. 1. Results of editing the NtPHO1-L1 plastid starch phosphorylase gene: (a) alignment of the target (editable) coding sequence of the NtPHO1-L1 gene (clones 1-10 of the edited Nt1 line in comparison with the unedited sequence of genes LOC107810306 and LOC107814807); (b) alignment of variants of the edited protein sequence NtPHO1-L1 in comparison with an unedited version (LOC107810306 and LOC107814807); (c) a comparative analysis of the secondary structure of the unedited enzyme NtPHO1‒L1 and protein with the KRY→N substitution introduced as a result of editing. A fragment of the sequence where the substitution occurred is shown (marked with an arrow). The simulation was carried out in the Phyre2 program based on the well-known c5lrbB_ matrix (alpha-1,4 glucan phosphorylase); 86% of both sequences were modeled with 100% confidence. (656KB)
Fig. 2. Nicotiana tabacum transgenic lines (Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15) with mosaic knockout gene of plastid starch phosphorylase NtPHO1-L1 in comparison with nontransgenic control (WT): (a) ‒ photos of plants WT, Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 at the stage blooms (scale 10 cm); (b) ‒ comparison of the main characteristics of the control (WT, average for 20 plants) and edited T1 lines from Nt1 (average for 20 plants Nt1-1–Nt1-20; further, the graph shows individual values for each of the analyzed plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15). *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (467KB)
3. The content of starch, sucrose, glucose, fructose (mg/g of crude weight), the sum of carotenoids and chlorophylls a and b (mcg/g of crude weight) in the leaf tissue of plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 in comparison with nontransgenic control WT. *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (310KB)
Fig. 4. Expression of starch metabolism genes (NtPHO1-L1, NtGWD, NtBAM1, NtBAM9, NtAI) and carotenoid biosynthesis (NtPSY2, NtPDS, NtCRTISO, NtZDS, NtVDE) in leaf tissue of plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 in comparison with nontransgenic control of WT. *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (391KB)
Fig. 5. Expression of genes of MADS-domain TF (NtFUL1, NtSEP1, NtSEP2, NtSEP3) in leaf tissue of plants Nt1-11, Nt1-13 and Nt1-15 in comparison with nontransgenic control of WT. *P < 0.05 is a statistically significant difference between T1 and Nt1 vs. WT. (183KB)
Supplement (18KB)
14. Cobertura Abrangência espacial e temporal, metodologia de pesquisa
15. Direitos Autorais Direitos Autorais e Licenças Declaração de direitos autorais © Russian Academy of Sciences, 2024