Activity an enzyme 5`-nucleotidase in patients with chronic hepatitis C

Full Text

Физиология гемостаза тесно связана с функцией печени. Нарушение ее функции нередко сопровождается расстройствами гемостаза в виде тромбообразования или геморрагий [1-5]. До сих пор нет единого мнения о патогенезе этих состояний при заболеваниях печени, однако не исключается в таких случаях развитие синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдрома) [5]. Одним из факторов, способствующих возникновению синдрома ДВС, является повышение тромбопластинемии, маркером которой служит фермент 5`-нуклеотидаза [2, 6, 7]. Поступая в общий кровоток 5`-нуклеотидаза стимулирует превращение протромбина в тромбин и фибриногена в фибрин [2]. Фермент 5`-нуклеотидаза прочно связан с плазматическими клеточными мембранами. Широкое тканевое распределение способствует его вовлечению в различные физиологические и патологические функции [8]. Физиология 5`-нуклеотидазы связана с высокой экспрессией в эндотелии и образованием внеклеточного аденозина, который через специфические рецепторы опосредует цитозащиту, включая разнообразные механизмы, такие как вазодилатация, подавление воспаления, ингибирование тромбоза и антиадренергический эффект [9]. Тканевый фактор локализуется на базолатеральной поверхности эпителиальных клеток, ограничивающих внутренние полости (слизистая оболочка кишечника и дыхательных путей) в местах повышенного риска возникновения геморрагий, например, в астроцитах мозга и миоцитах сердца и на наружной клеточной мембране гепатоцитов человека. Он отчетливо выявляется в адвентициальных клетках и перицитах, окружающих большинство кровеносных сосудов, а также в моноцитах/макрофагах, эндотелиоцитах и тромбоцитах [6, 10]. Синтез тканевого фактора и образование микровезикул могут быть индуцированы эндотоксинами или другими инфекционными агентами, иммунными комплексами, фибронектином, С-реактивным белком, фактором некроза опухоли, гипоксией, инфекцией, замедлением тока крови и др. [11-13]. В то же время экспрессия его может подавляться повышенным уровнем циклического аденозинмонофосфата и некоторыми цитокинами [8, 13, 14]. Поэтому поступление тканевого фактора в кровь и рост активности фермента 5`-нуклеотидазы у больных хроническим гепатитом С (ХГС) в различные периоды болезни будет зависеть от комплекса различных разнонаправленно действующих агентов, их сбалансированности и изменяться в соответствии с развитием патологического процесса во времени. Не вызывает сомнения, что знание этих процессов позволяет выработать адекватную лечебную тактику возникающих нарушений при патологии печени. Цель исследования: определить активность фермента 5`-нуклеотидазы в зависимости от фаз синдрома ДВС и длительности инфицирования у больных ХГС. Материалы и методы Под наблюдением находилось 166 (92 мужчины, 74 женщины) больных ХГС. Исследование выполнено на базе Республиканской клинической инфекционной больницы им. А.Ф. Агафонова г. Казани. Отбор пациентов проводился методом случайной выборки. Обследованы 166 пациентов с ХГС, в том числе 21 с циррозом печени (ЦП) в исходе заболевания. Клинический диагноз устанавливался на основании комплексной оценки, включающей изучение анамнеза, клинической картины, определения биохимических параметров, ультразвуковой характеристики печени, а также выявление методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) рибонуклеиновой кислоты (РНК) вируса. Число тромбоцитов (Tr) определяли на гематологическом анализаторе ВС-3000 Plus (Mindray Co. LTD, Китай). Активность фермента 5`-нуклеотидазы определяли на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории КГМУ по методу Campbell (1962) в модификации Д.М. Зубаирова и И.А. Андрушко (1987), путем гидролиза аденозин-5`-монофосфата при избирательном ингибировании данного фермента ионами никеля на спектрофотометре СФ-103 (Россия) [15]. Определение 5`-нуклеотидазной активности для оценки уровня тканевого тромбопластина в кровотоке было аргументировано оценкой тромбопластической активности и исследованиями распределения в субклеточных фракциях различных тканей человека 5`-нуклеотидазы, между которыми обнаружена отчетливая положительная корреляция [15, 16]. Полученные данные активности фермента 5`-нуклеотидазы обработаны с помощью программы STATISTICA 10. Для определения нормальности распределения каждой переменной выборочной совокупности использовали критерий Шапиро-Уилка. В нашем случае все рассматриваемые показатели не укладывались в понятие нормального распределения выборочной совокупности, связи с этим для описания выборочного распределения количественных признаков указывали число (n) объектов исследования, медиану (Ме), нижний (25%) и верхний (75%) квартили (Q1 и Q3) в формате Ме [Q1-Q3]. Для оценки статистической значимости различий между сравниваемыми группами применяли непараметрический статистический метод - критерий Манна-Уитни. Для изучения связи между явлениями использовали непараметрический метод-коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Различия показателей считали статистически значимыми при p≤0,05. Результаты и обсуждение По мере прогрессирования инфекционного процесса и активности воспаления в ткани печени при ХГС развивается тромбоцитопения, которая является серьезным осложнением ХГС и нередко первым признаком данного заболевания [3, 5]. При хронических заболеваниях печени, в том числе вирусных, изменения уровня Tr встречаются достаточно часто, что позволяет считать этот гематологический феномен одним из важных внепеченочных проявлений болезни [3]. Поскольку тромбоцитарный гемостаз один из обязательных проявлений синдрома ДВС, был выбран патогенетический подход - анализировать изменения активности фермента 5`-нуклеотидазы (повышение уровня которой может быть причиной синдрома ДВС), с учетом хорошо известных степеней данного синдрома [2, 6, 17, 18]. Пациентов условно разделили по фазам, исходя из числа Tr, на 3 группы: I группа - фаза гиперкоагуляции с числом Tr >350×109/л (n=20); II группа - переходная фаза (ПФ) между гипер- и гипокоагуляцией, которую удачно называют фазой разнонаправленных сдвигов, число Tr от 350×109/л до 200×109/л (n=59), и III группа - фаза гипокоагуляции, число Tr <200×109/л (n=66), куда вошли в том числе и больные с циррозом печени класса А по Чайлд-Пью (n=21) [19]. Важно, что все пациенты в основном госпитальные, т.е. были с обострением заболевания. В результате такого подхода число Tr у пациентов в фазу гиперкоагуляции было статистически значимо выше данных здоровых лиц на 22%; в ПФ снижено на 12%; в фазу гипокоагуляции - на 39,5% и на 69% - при ЦП (см. таблицу). Выявлена обратная корреляционная связь активности фермента 5`- нуклеотидазы от уровня Tr у пациентов в фазе разнонаправленных сдвигов (r=-0,496646, р<0,05) и в состоянии гипокоагуляции (r=-0,591818, р<0,01). Результаты наших исследований показали, что уровень активности 5`-нуклеотидазы был достоверно выше (р=0,000) во всех рассматриваемых группах в сравнении с данными здоровых лиц (см. таблицу). Наибольшая активность зарегистрирована у пациентов с более низким числом Tr относительно других изучаемых групп (см. таблицу). Показатели активности маркерного фермента 5`-нуклеотидазы в фазах гипокоагуляции и ЦП были статистически значимо выше относительно ПФ и гиперкоагуляции соответственно на 29, 32 и 5, 8%. Инфекционный процесс ХГС растянут во времени и для него характерна скупость клинических проявлений. В связи с этим сложно давать в целом (для 10-15 лет) характеристику изменения гемостаза. Картина становится определенной только на стадии развития ЦП, когда анатомические изменения в печени более выражены. С длительностью пребывания вируса гепатита С в организме инфицированного прослеживался и рост уровня активности 5`-нуклеотидазы. Показатели 5`-нуклеотидазы достоверно были выше у пациентов на сроках болезни 11-15 лет и 16-25 лет по сравнению с периодом до 5 лет соответственно на 29,1%, р=0,032; 63,2%, р=0,000. Достоверная разница наблюдалась между интервалами 6-10 и 16-25 лет на 43,5%, р=0,005. У больных ХГС уровень фермента 5’-нуклеотидазы достигал высоких концентраций в сыворотке крови, что может свидетельствовать о чрезмерном повреждении сосудистой стенки и длительно существующей тромбопластинемии, которая является серьезным осложнением гепатита и нередко первым признаком данного заболевания [5, 10, 20, 21]. В условиях поступления в кровоток в большом количестве фрагментов мембранных структур (липопротеиновых комплексов, состоявших из фосфолипидов и апопротеина III) возникает опасность активации процесса свертывания крови как по внешнему, так и по внутреннему пути, а сцепленные с ними ферменты оказываются индикаторами присутствия в крови как самого фактора III (тканевого тромбопластина), так и его гемокоагуляционной активности [16]. Заключение Повышенная активность фермента, маркера тромбопластина в сыворотке крови, особенно в состоянии гипокоагуляции свидетельствует об интенсивности протекающих в организме деструктивных процессов, разрушающих клетку, ткани и возросшую вероятность микротромбирования сосудов внутренних органов. Изменение уровня тканевого тромбопластина тесно связано с развитием патологического процесса во времени, следовательно, и с фазами ДВС-синдрома. Таким образом, для больных ХГС характерно повышение активности фермента 5`-нуклеотидазы, особенно выраженное в фазу гипокоагуляции. Активность фермента 5`-нуклеотидазы зависит от сроков инфицирования вирусом гепатита С. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

About the authors

N V Galeeva

Kazan State Medical University

Email: Nelli_04@mail.ru
Kazan, Russia

I Kh Valeeva

Kazan State Medical University

Kazan, Russia

References

Supplementary files