Obstetrics and GynecologyObstetrics and GynecologyАкушерство и гинекология0300-90922412-5679Bionika Media24819510.18565/aig.2018.3.84-95ArticlesСтатьиResearch ArticleImmunohistochemical features of eutopic and ectopic endometrium in patients with recurrent ovarian endometrioid cystsИммуногистохимические особенности эутопического и эктопического эндометрия у пациенток с рецидивирующим течением эндометриоидных кист яичниковPshenichnyukEkaterina YurievnaПшеничнюкЕкатерина Юрьевна

PhD-student, Department of Surgical Gynecology

аспирант отделения оперативной гинекологии

best-kauty@mail.ruAsaturovaAlexandra VyacheslavovnaАсатуроваАлександра Вячеславовна

PhD, senior scientific researcher of pathology department

к.м.н., старший научный сотрудник патологоанатомического отделения

a_asaturova@oparina4.ruAdamyanLeila VladimirovnaАдамянЛейла Владимировна

MD, professor, academician of RAS; deputy director on science, head of department of operative gynecology

д.м.н., профессор, академик РАН, зам. директора по науке, руководитель отделения оперативной гинекологии; зав.кафедрой репродуктивной медицины и хирургии ФПДО

ZaitsevNikon VladimirovichЗайцевНикон Владимирович

pathologist of pathology department

врач-патологоанатом патологоанатомического отделения

National Medical Research Center of Obstetrics, Gynecology, and Perinatology named after Academician V.I. Kulakov, Ministry of Health of RussiaФГБУ НМИЦ АГП им. академика В.И. Кулакова Минздрава РоссииМГМСУNational Medical Research Center of Obstetrics, Gynecology, and Perinatology named after Academician V.I. Kulakov, Ministry of Health of RussiaФГБУ НМИЦ АГП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России150320183NO3 (2018)№3 (2018)849518022023Copyright ©; 2018, Bionika MediaCopyright ©; 2018, ООО «Бионика Медиа»2018Bionika MediaООО «Бионика Медиа»https://journals.eco-vector.com/0300-9092/article/view/248195

Objective. To investigate the expression of proliferation and apoptosis markers (Ki-67, Bcl-2), inf lammatory factors (NF-kß p65, COX-2), adhesion factors (ß-catenin), estrogen receptor-a (ER-a) and progesterone receptor-a (PR-a) in the eutopic endometrium and ovarian endometrioid cyst (OEC) sac in patients with recurrent OEC, by using an immunohistochemical assay. Subjects and methods. The investigation enrolled 60 reproductive-aged patients with OEC treated in the Department of Operative Gynecology, V.I. Kulakov Medical Research Center of Obstetrics, Gynecology, and Perinatology, Ministry of Health of Russia, in 2015-2016. According to the course of the disease during a 1.5-year follow-up after surgical treatment, the patients were divided into two groups: 1) 41 patients without recurrent OEC (a comparison group); 2) 19 patients with recurrent OEC (a study group). The investigation used histological and immunohistochemical examinations. The histological examination of the endometrium and OEC sacs was performed using a standard procedure. The immunohistochemical examination of the eutopic endometrium and OEC sac was done using the Tissue-Tek Quick-Ray kit that allows one to make paraffin blocks containing a large number of tissue samples (tissue matrices). The investigation used antibodies against Ki-67 (clone 30-9, VENTANA), Bcl-2 (clone 124, VENTANA), NF-kß p65 (clone p65, Spring Bioscience Corp.), COX-2 (clone СХ-294, Agilent), ß-catenin (clone 14, VENTANA), ER-a (clone SP1, VENTAN), and PR-a (clone 1E2, VENTANA). The specimens were prepared according to the standard protocol using a Ventana Ultra immunohistostainer. Positive and negative controls were used to correctly make immunohistochemical assays. Statistical analysis was carried out using the applied statistical analysis software (Statistica 10.0, Microsoft Excel). Results. The immunohistochemical examination showed that the ectopic endometrium (OEC sac) was characterized by a change in the expression of ER-a, PR-a, Ki-67, Bcl-2, NF-kß p65, COX-2, and ß-catenin, which are the factors involved in the pathogenesis of endometriosis. The patients with recurrent OEC had an increased PR-a expression in the epithelial component of the OEC sac (p = 0.0277), a reduced Ki-67 expression in it (p = 0.044), a reduced NF-kß p65 and COX-2 expression in the stromal component of the OEC sac (p = 0.0082; p = 0.00245, respectively) and an increased ß-catenin expression in it (p = 0.017). The immunohistochemical examination revealed that the patients with recurrent OEC showed increases in the expression of PR-a in the epithelial component of the eutopic endometrium in the secretory phase (p = 0.0253) and in that of NF-kß p65 in the stromal component of the eutopic endometrium in the proliferative phase (p = 0.0278). Conclusion. The immunohistochemical examination of the expression of PR-a, Ki-67, NF-kß p65, COX-2, and ß-catenin in the OEC sac and that of PR-a and NF-kß p65 in the eutopic endometrium can assist in identifying patients at high risk for recurrent OEC immediately after surgical treatment. Further investigations of these factors will be able to study the molecular mechanisms underlying the pathogenesis of recurrent OEC, which will affect these mechanisms to eliminate the fundamental causes of recurrent endometriosis.

Цель исследования. Изучить экспрессию факторов пролиферации и апоптоза (ki-67, bcl-2), воспалительных факторов (NF-kß p65, COX-2), факторов адгезии (b-катенин), эстрогеновых (ER-a) и прогестероновых (PR-a) рецепторов в эутопическом эндометрии и капсуле эндометриоидных кист яичников (ЭКЯ) у пациенток с рецидивирующим течением ЭКЯ. Материал и методы. В исследование включены 60 пациенток репродуктивного возраста с ЭКЯ, находившихся на лечении в отделении оперативной гинекологии ФГБУ НМИЦ АГПим. В.И. Кулакова Минздрава России в 2015-2016 гг. В зависимости от течения заболевания за период наблюдения 1,5 года после оперативного лечения пациентки разделены на две группы: 1-я группа - 41 пациентка без рецидива ЭКЯ (группа сравнения); 2-я группа - 19 пациенток с рецидивом ЭКЯ (основная группа). В работе использовали гистологический и иммуногистохимический методы исследования. Иммуногистохимическое исследование эутопического эндометрия и капсулы ЭКЯ проводили при помощи набора Tissue-Tek Quick-Ray. В исследовании использовались антитела к ki-67 (clone 30-9, VENTANA), Bcl-2 (clone 124, VENTANA), NF-kß p65 (clone p65, Spring Bioscience Corp.), COX-2 (clone СХ-294, Agilent), b-катенину (clone 14, VENTANA), ER-a (clone SP1, VENTANA) и PR-a (clone 1E2, VENTANA). Результаты. Эктопический эндометрий (капсула ЭКЯ) характеризуется изменением экспрессии ER-a, PR-a, ki-67, bcl-2, NF-kb p65, СОХ-2 и b-катенина, которые являются факторами, участвующими в патогенезе эндометриоза. У пациенток с рецидивирующим течением ЭКЯ повышена экспрессия PR-a в эпителиальном компоненте капсулы ЭКЯ (р=0,0277), понижена экспрессия ki-67 в эпителиальном компоненте капсулы ЭКЯ (р=0,044), понижена экспрессия NF-kb p65 и СОХ-2 в стромальном компоненте капсулы ЭКЯ (р=0,0082, р=0,00245соответственно) и повышена экспрессия b-катенина в стромальном компоненте капсулы ЭКЯ (р=0,017). У пациенток с рецидивирующим течением ЭКЯ повышена экспрессия PR-a в секреторную фазу в эпителиальном компоненте эутопического эндометрия (р=0,0253) и экспрессия NF-kb p65 в пролиферативную фазу в стромальном компоненте эутопического эндометрия (р=0,0278). Заключение. Иммуногистохимическое исследование экспрессии PR-a, ki-67, NF-kb p65, СОХ-2 и b-катенина в капсуле ЭКЯ и экспрессии PR-a и NF-kb p65 в эутопическом эндометрии может помочь сразу после оперативного лечения выявлять пациенток с высоким риском рецидивирования ЭКЯ. Дальнейшие исследования этих факторов позволят изучить молекулярные механизмы, лежащие в основе патогенеза рецидивирования ЭКЯ, что позволит воздействовать на эти механизмы для устранения фундаментальных причин рецидива эндометриоза.

ki-67bcl-2NF-kß p65COX-2ER-aPR-aeutopic endometriumectopic endometriumovarian endometrioid cystsrecurrencepredictors of recurrenceimmunohistochemical examinationKi-67Bcl-2NF-kß p65COX-2ß-cateninER-aPR-aэутопический эндометрийэктопический эндометрийэндометриоидные кисты яичниковрецидивированиепредикторы рецидивированияиммуногистохимическое исследованиеb-катенинАдамян Л.В., Андреева Е.Н., Аполихина И.А., Беженарь В.Ф. ,Геворкян М.А., Гус А.И., Демидов В.Н., Калинина Е.А., Леваков С.А., Марченко Л.А., Попов А.А., Сонова М.М., Хашукоева А.З., Чернуха Г.Е., Ягоцкая Е.Л. Эндометриоз: диагностика, лечение и реабилитация. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных. М.: Российское общество акушеров-гинекологов; 2013.Тихончук Е.Ю., Асатурова А.В., Адамян Л.В. Молекулярно-биологические изменения эндометрия у женщин с наружным генитальным эндометриозом. Акушерство и гинекология. 2016; 11: 42-8. http://dx.doi.org/10.18565/ aig.2016.11.42-8Тихончук Е.Ю., Непша О.С., Адамян Л.В., Кузнецова М.В. Омиксные технологии в исследовании патогенеза эндометриоза. Проблемы репродукции. 2016; 22(5): 110-22.Han A.R., Lee T.H., Kim S., Lee H.Y. Risk factors and biomarkers for the recurrence of ovarian endometrioma: about the immunoreactivity of progesterone receptor isoform B. and nuclear factor kappa B. Gynecol. Endocrinol. 2017; 33(1): 70-4. doi: 10.1080/09513590.2016.1205580.de Ziegler D., Borghese B., Chapron C. Endometriosis and infertility: pathophysiology and management. Lancet. 2010; 376(9742): 730-8. doi: 10.1016/S0140-6736(10)60490-4.Barcelos I.D., Vieira R.C., Ferreira E.M., Martins W.P., Ferriani R.A., Navarro P.A. Comparative analysis of the spindle and chromosome configurations of in vitro-matured oocytes from patients with endometriosis and from control subjects: a pilot study. Fertil. Steril. 2009; 92(5): 1749-52. doi: 10.1016/j. fertnstert.2009.05.006.Practice Committee of the American Society for Reproductive Medicine. Endometriosis and infertility: a committee opinion. Fertil. Steril. 2012; 98(3): 591-8.Koninckx P.R., Ussia A., Keckstein J., Adamian L., Zupi E., Wattiez A., Gomel V. Evidence based medicine: pandora’s box of medical and surgical treatment of endometriosis. J. Minim. Invasive Gynecol. 2017; Nov. 24. pii: S1553-4650(17)31287-6. doi: 10.1016/j.jmig.2017.11.012.Koninckx P.R., Ussia A., Adamyan L., Keckstein J., Wattiez A. Primary dysmenorrhea. J. Obstet. Gynaecol. Can. 2017; 39(7): 578-9. doi: 10.1016/j.jogc.2017.03.093.Corona R., Binda M.M., Adamyan L., Gomel V., Koninckx P.R. N2O strongly prevents adhesion formation and postoperative pain in open surgery through a drug-like effect. Gynecol. Surg. 2017; 14(1): 21. doi: 10.1186/ s10397-017-1024-2.Maul L.V., Morrision J.E., Schollmeyer T., Alkatout I., Mettler L. Surgical therapy of ovarian endometrioma: recurrence and pregnancy rates. JSLS. 2014; 18(3). pii: e2014.00223. doi: 10.4293/JSLS.2014.00223.Пшеничнюк Е.Ю., Кузнецова М.В., Бурменская О.В., Кочеткова Т.О., Непша О.С., Трофимов Д.Ю., Адамян Л.В. Ассоциация между частотами встречаемости однонуклеотидных полиморфизмов в генах ZNF366 и VEZT и риском развития различных форм наружного генитального эндометриоза: данные по российской популяции. Акушерство и гинекология. 2017; 6: 64-72. http://dx.doi.org/10.18565/aig.2017.6.64-72Кузнецова М.В., Пшеничнюк Е.Ю., Бурменская О.В., Асатурова А.В., Трофимов Д.Ю., Адамян Л.В. Исследование экспрессии генов в эутопическом эндометрии женщин с эндометриоидными кистами яичников. Акушерство и гинекология. 2017; 8: 93-102. http://dx.doi.org/10.18565/ aig.2017.8.93-102Ouchi N., Akira S., Mine K., Ichikawa M., Takeshita T. Recurrence of ovarian endometrioma after laparoscopic excision: risk factors and prevention. J. Obstet. Gynaecol. Res. 2014; 40(1): 230-6. doi: 10.1111/jog.12164.Koga K., Takamura M., Fujii T., Osuga Y. Prevention of the recurrence of symptom and lesions after conservative surgery for endometriosis. Fertil. Steril. 2015; 104(4): 793-801. doi: 10.1016/j.fertnstert.2015.08.026.Somigliana E., Vercellini P., Vigano P., Benaglia L., Busnelli A., Fedele L. Postoperative medical therapy after surgical treatment of endometriosis: from adjuvant therapy to tertiary prevention. J. Minim. Invasive Gynecol. 2014; 21(3): 328-34. doi: 10.1016/j.jmig.2013.10.007.Vercellini P., Somigliana E., Vigano P., De Matteis S., Barbara G., Fedele L. Postoperative endometriosis recurrence: a plea for prevention based on pathogenetic, epidemiological and clinical evidence. Reprod. Biomed. Online. 2010; 21(2): 259-65. doi: 10.1016/j.rbmo.2010.04.018.Shen F., Wang Y., Lu Y., Yuan L., Liu X., Guo S.W. Immunoreactivity of progesterone receptor isoform B. and nuclear factor kappa-B as biomarkers for recurrence of ovarian endometriomas. Am. J. Obstet. Gynecol. 2008; 199(5): 486. e10. doi: 10.1016/j.ajog.2008.04.040.Ota H., Igarashi S. Expression of major histocompatibility complex class II antigen in endometriotic tissue in patients with endometriosis and adenomyosis. Fertil. Steril. 1993; 60(5): 834-8.Kobayashi H., Uekuri C., Shigetomi H. Towards an understanding of the molecular mechanism of endometriosis: unbalancing epithelial-stromal genetic conflict. Gynecol. Endocrinol. 2014; 30(1): 7-15. doi: 10.3109/ 09513590.2013.831832.Hayashi A., Tanabe A., Kawabe S., Hayashi M., Yuguchi H., Yamashita Y. et al. Dienogest increases the progesterone receptor isoform B/A ratio in patients with ovarian endometriosis. J. Ovarian Res. 2012; 5(1): 31. doi: 10.1186/1757-2215Bergqvist A., Fernö M. Estrogen and progesterone receptors in endometriotic tissue and endometrium: comparison according to localization and recurrence. Fertil. Steril. 1993; 60(1): 63-8.Yu X., Ren H., Liu T., Yong M., Zhong H. Expression and significance of ERß and TrkB in endometriosis. Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2016; 43(1): 75-81.Béliard A., Noël A., Foidart J.M. Reduction of apoptosis and proliferation in endometriosis. Fertil. Steril. 2004; 82(1): 80-5.Yalcin S.E., Ocal I., Yalcin Y., Selim H.S., Caltekin M.D., Aydogmus H., Kelekci S. Evaluation of the Ki-67proliferation index and urocortin expression in women with ovarian endometriomas. Eurasian J. Med. 2017; 49(2): 107-12. doi: 10.5152/eurasianjmed.2017.17070.Быков А.Г., Адамян Л.В., Наговицына М.Н., Щеголев А.И. Иммуногистохимическая характеристика пролиферативной активности клеток при эндометриозе яичников. В. кн.: Материалы XI Международного когресса по репродуктивной медицине. Москва, 17-20 января 2017 года. М.; 2017: 95-6.BrätiläE., Brätilä C.P., Comandaçu D.E., Bauçic V., Vlädescu C.T., Mehedinfa C. et al. The assessment of immunohistochemical profile of endometriosis implants, a practical method to appreciate the aggressiveness and recurrence risk of endometriosis. Rom. J. Morphol. Embryol. 2015; 56(4): 1301-7.Jones R.K., Searle R.F., Bulmer J.N. Apoptosis and bcl-2 expression in normal human endometrium, endometriosis and adenomyosis. Hum. Reprod. 1998; 13(12): 3496-502.Щеголев А.И., Быков А.Г., Файзуллина Н.М., Адамян Л.В. Иммуногистохимические особенности экспрессии O6-метинилгуанин-ДНК-метилтрансферазы при эндометриозе яичников. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2017; 164(9): 372-6.Bozdag G. Recurrence of endometriosis: risk factors, mechanisms and biomarkers. Womens Health (London). 2015; 11(5): 693-9. doi: 10.2217/ whe.15.56.Reis F.M., Petraglia F., Taylor R.N. Endometriosis: hormone regulation and clinical consequences of chemotaxis and apoptosis. Hum. Reprod. Update. 2013; 19(4): 406-18. doi: 10.1093/humupd/dmt010.Fanfani F., Fagotti A., Ferrandina G., Bifulco G., Legge F., Lorusso D. et al. Increased cyclooxygenase-2 expression is associated with better clinical outcome in patients submitted to complete ablation for severe endometriosis. Hum. Reprod. 2005; 20(10): 2964-8.Yuan L., Shen F., Lu Y., Liu X., Guo S.W. Cyclooxygenase-2 overexpression in ovarian endometriomas is associated with higher risk of recurrence. Fertil. Steril. 2009; 91(4, Suppl.): 1303-6. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.070.Banu S.K., Lee J., Speights V.O. Jr., Starzinski-Powitz A., Arosh J.A. Cyclooxygenase-2 regulates survival, migration, and invasion of human endometriotic cells through multiple mechanisms. Endocrinology. 2008; 149(3): 1180-9.Fagotti A., Ferrandina G., Fanfani F., Legge F., Lauriola L., Gessi M. et al. Analysis of cyclooxygenase-2 (COX-2) expression in different sites of endometriosis and correlation with clinico-pathological parameters. Hum. Reprod. 2004; 19(2): 393-7.Xiong W., Zhang L., Xiong Y., Liu H., Liu Y. Hypoxia promotes invasion of endometrial stromal cells via hypoxia-inducible factor 1a upregulation-mediated ß-catenin activation in endometriosis. Reprod. Sci. 2016; 23(4): 53141. doi: 10.1177/1933719115607999.