To the technique of painting Nissl`evsky bodies

Abstract

In view of the growing interest presented by Nissl's bodies for researchers studying the physiological and pathological structure of nerve cells, I consider it useful to publish the coloring method I have developed. In addition to the simplicity of the technique and the demonstrativeness of the preparations obtained, the proposed method has the advantage of great constancy: to this I can add that the studies of the fresh nervous cells (my studies have not yet been published) reveal the complete identity of the pictures obtained in the volume and in other cases.

Full Text

Къ методикѣ окраски Nissl`евскихъ тѣлъ ¹).

Въ виду возрастающаго интереса, представляемаго Nissl`eвскими тѣлами для изслѣдователей, занимающихся изученіемъ физіологической и патологической структуры нервныхъ клѣтокъ, я считаю нелишнимъ опубликовать выработанный мною методъ окраски. Помимо несложности техники и демонстративности получаемыхъ препаратовъ, предлагаемый способъ имѣетъ преимущество большого постоянства: къ этому я могу прибавить, что изслѣдованія свѣжихъ нервныхъ клѣтокъ (мои изслѣдованія еще не опубликованы) обнаруживаютъ полное тождество картинъ, получаемыхъ въ томъ и другомъ случаѣ.

Въ качествѣ фиксажа рѣшительнаго предпочтенія заслуживаетъ жидкость van Gehuchten’а:

Алкоголя абс. 60 хлороформа 30 уксусной кисл. 10.

Кусочки спинного мозга толщиной не болѣе 1 сент. ^[2]) выдерживаются въ свѣжеприготовленномъ фиксажѣ нѣсколько часовъ; продолжительность этого времени колеблется въ зависимости отъ величины фиксируемыхъ объектовъ отъ 5 до 10 часовъ; по истеченіи этого срока они переносятся въ алкоголь; спинномозговыя нервныя клѣтки закрѣпляются настолько совершенно, что фиксированные кусочки можно перенести прямо въ 96° алкоголь. Уксусная кислота фиксажа должна быть отмыта какъ можно тщательнѣе; для этой цѣли алкоголь мѣняется нѣсколько разъ (4—5) въ теченіи двухъ сутокъ.

Послѣ этого кусочки кладутся въ хлороформъ (на 1 сутки), въ насыщенный растворъ парафина въ хлороформѣ (на 1 сутки) и заключаются въ расплавленный парафинъ.

Срѣзы, обработанные послѣдовательно скипидаромъ (въ двухъ порціяхъ) и алкоголемъ, погружаются въ красящую жидкость, которой служитъ щелочной растворъ толуидиновой сини, и оставляются въ ней на 24 часа; растворъ толуидиновой сини берется очень разведенный. Составъ краски слѣдующій:

1% воднаго раствора толуидиновой сини 1 куб. с. дестиллированной воды 119 — двууглекислой соды 1 граммъ.

Присутствіе щелочи есть conditio sine qua non удовлетворительной окраски; нейтральный растворъ толуидиновой сини краситъ гораздо слабѣе и окраска легко исчезаетъ при дѣйствіи спирта; кислый же растворъ даетъ весьма слабую диффузную окраску; поэтому въ тѣхъ случаяхъ, когда уксусная кислота недостаточно отмыта, красящая способность приведеннаго выше раствора толуидиновой сини можетъ ослабѣть въ значительной степени. Но значеніе щелочи нельзя однако сводить лишь къ нейтрализаціи уксусной кислоты; такъ, путемъ частыхъ смѣнъ алкоголя въ теченіе нѣсколькихъ сутокъ можно достигнуть полной отмывки кислоты, въ чемъ легко убѣдиться съ помощью лакмусовой бумажки; не смотря на это, щелочной растворъ толуидиновой сини краситъ по- прежнему гораздо интенсивнѣе и прочнѣе, чѣмъ нейтральный. Прибавленіе щелочи въ количествѣ большемъ, чѣмъ указано, имѣетъ свое неудобство; не представляя существеннаго преимущества въ смыслѣ интенсивности окраски, избытокъ щелочи въ высшей степени замедляетъ слѣдующій послѣ окраски процессъ— вытравленіе.

Послѣ 24 часового пребыванія въ красящемъ растворѣ срѣзы переносятся въ 96° алкоголь для полученія избирательной окраски Nissl’eвскихъ тѣлъ; смотря по толщинѣ срѣзовъ, время необходимое для вытравленія равняется отъ 2 до 15 минутъ; къ концу этой процедуры бѣлое вещество спинного мозга является почти неокрашеннымъ, сѣрое же вещество пріобрѣтаетъ легкій фіолетовый оттѣнокъ; нѣсколько пробъ будетъ достаточно, чтобы научиться распознавать этотъ моментъ. Слѣдующій простой пріемъ можетъ оказать здѣсь большія услуги. Послѣ того, какъ краска перестала переходить голубоватыми струйками изъ срѣза въ алкоголь, срѣзъ переносится въ öl. Origani для просвѣтленія и разсматривается въ этомъ послѣднемъ подъ микроскопомъ; если дифференцировка окраски не достигла еще желаемой степени, срѣзъ снова кладется въ алкоголь для дальнѣйшаго извлеченія краски; процедура эта можетъ быть повторена нѣсколько разъ. Рекомендуемый пріемъ полезенъ особенно потому, что не всѣ типы спинномозговыхъ клѣтокъ окрашиваются одинаково интенсивно и прочно; напримѣръ, въ то время, какъ клѣтки пирамидальной формы, такъ близко напоминающія пирамидальныя клѣтки мозговой коры, получили подъ вліяніемъ алкоголя достаточную дифференцировку окраски, двигательныя клѣтки переднихъ роговъ оказываются еще окрашенными диффузно; время, необходимое для вытравленія, зависитъ здѣсь, такимъ образомъ, отъ того, желаютъ ли изслѣдовать первый типъ клѣтокъ или второй.

По полученіи желаемой дифференцировки, срѣзы просвѣтляются въ oleum Origani и заключаются въ дамарлакъ. Препараты держатся неопредѣленно долгое время.

При окраскѣ очень тонкихъ срѣзовъ, послѣдніе наклеиваются съ помощью фотоксилина; дальнѣйшая обработка ихъ производится въ томъ же порядкѣ, который былъ только-что описанъ.

¹ Сообщено въ засѣданіи Общества невропатологовъ и психіатровъ 1897 г.

^[2]) Мои изслѣдованія произведены на спинномъ мозгу.