The study of the area of distribution of west nile virus in the territory of the European part of Russia; the results of seroepidemiological research. report 1: Astrakhan region, Krasnodar region, Stavropol region, Saratov region

Full Text

Введение Вирус Западного Нила (семейство Flaviviridae, род Flavivirus) впервые в СССР был выделен в 1963 г. из личинок и нимф клещей Hyalomma marginatum, собранных в Астраханской области [1] . Первые 11 случаев лихорадки Западного Нила (ЛЗН) были верифицированы серологически в 1967 г. [2], еще 10 случаев - в период с 1991 по 1996 г. также в Астраханской области [3]. В 1999 г. крупная эпидемическая вспышка ЛЗН наблюдалась в южном регионе России в Волгоградской, Астраханской областях и Краснодарском крае [4]. В 2000 г. случаи заболевания были зарегистрированы в Ростовской области, в 2010 г. - в Саратовской, Белгородской, Липецкой и Самарской областях (интернет-информация Роспотребнадзора), а также в Тульской области [5]. В общей сложности в 1999-2015 гг. в РФ было верифицировано примерно 2400 случаев этого заболевания. Представленные данные свидетельствуют о необходимости дальнейшего изучения расширяющегося ареала ЛЗН на территории европейской части страны. Для решения этого вопроса важное значение имеют данные сероэпидемиологических исследований, направленных на выявление и сравнение результатов, полученных на одних и тех же территориях в предыдущие годы и в настоящее время. Настоящая статья посвящена результатам работы по обследованию в 2011-2015 гг. сывороток крови населения Южного, Северо-Кавказского федеральных округов и Саратовской области (Приволжский округ). Ниже приводится краткий обзор предшествующих исследований, выполненных на этих территориях. Астраханская область В 1964-1965 гг. при обследовании методом РТГА антитела у населения области были обнаружены в среднем в 3,3% случаев: в возрастной группе 11-30 лет в 3,3%, в группе 31-81 год в 15,1% [6]. В 19671970 гг. у жителей южных, дельтовых районов в 16,3%, в г. Астрахани и прилегающих территориях в 4,1%. В северных, пойменных районах выявлялись лишь единичные находки [3, 7]. В 1989 г. специфические антитела к вирусу ЗН (ВЗН) были обнаружены у 48,2% жителей области. В 1998 и 1999 гг. общий показатель гуморального иммунитета, по данным обследования сывороток в реакции нейтрализации, ИФА-IgG и РТГА, составил 37,9%. У мужчин в 1998 г. - 39,7%, у женщин - 32,8, в 1999 г. - 54,4 и 39,6% соответственно. В 1998 г. иммунная прослойка была практически одинаковой у горожан (31,7%) и сельских жителей (30,4%); в 1999 г. - у 60,3% горожан и у 44,2% населения сельских районов (в среднем за 1998-1999 гг. - у 51,9%). Частота обнаружения IgG к ВЗН в 2001 г. в Приволжском, Наримановском и Камызякском районах составила соответственно 25,5 и 18,2% (в среднем 19,4%) [8]. Республика Калмыкия Среди 339 сывороток крови жителей гг. Элиста и Целинный, обследованных в 1988 г., в РТГА с антигеном ВЗН оказалось 8 положительных [9]. Ростовская область В 2000-2004 гг. в результате обследования методом ИФА 2364 сывороток крови доноров и животноводов IgG антитела к ВЗН были обнаружены у жителей 23 из 28 районов, в среднем в 3,4% случаев, в том числе в Зимовниковском районе в 10,4%, в г. Ростове-на-Дону в 2,7%, на прилегаю- оригинальные исследования щих к нему территориях в 3-8% [10]. Эндемичные по ЛЗН территории области были приурочены к территориям Таганрогского залива Азовского моря, дельте и пойме Дона, пойм Маныча и Северного Донца, Веселовскому водохранилищу. Волгоградская область В 1999 г. после эпидемии ЛЗН специфические IgG антитела были выявлены в 10,9% среди 330 обследованных сывороток крови доноров жителей гг. Волгограда и Волжского. В Средне- ахтубенском, Городнищенском, Светлоярском и Октябрьском районах, где в 1999 г. были зарегистрированы единичные случаи этого заболевания, положительные результаты встречались в среднем в 5,5%, в Суровикинском районе - в 5,9%. В Михайловском районе, расположенном на территории в 180 км от гиперэндемичной территории Волгограда, антитела к ВЗН у населения не выявлялись [11]. Средние показатели обнаружения IgG антител к ВЗН у животноводов и доноров в южных районах области возросли с 8,2% в 1999 г. до 24,8% в 2003 г. В августе-сентябре 2012 г. во время второй значительной вспышки ЛЗН Л.С. Карань и соавт. обнаружили специфические IgG антитела в сыворотках крови 70 доноров из 432 обследованных [12]. Краснодарский край В 1984-1993 гг. сотрудниками Причерноморской ПЧС (г. Новороссийск) были обследованы 1933 сыворотки крови жителей Краснодарского края и 390 сывороток жителей Адыгейской республики. В Краснодарском крае антигемагглюти- нины к ВЗН были обнаружены у лиц, проживающих в Новороссийске (2,8%), Славянском (2,3%), Анапском (2,3%), Темрюкском (1,4%) районах и в г. Сочи (1,2%). Все сыворотки из Геленджикского и Крымского районов оказались отрицательными. В Адыгейской республике антитела выявлялись в 1,5% случаев [14]. По данным О.М. Пиликовой и соавт., опубликованным в 2007 г., частота выявления IgG антител к ВЗН у населения разных районов края варьировала от 0,5 до 12,5% [15]. В 2006 и 2007 гг. в Темрюкском районе IgG антитела к ВЗН были обнаружены соответственно у 7 (7,5%) из 93 и 7 (11,7%) из 60 обследованных местных жителей [16]. Ставропольский край В 1991 г. антигемагглютинины к ВЗН были обнаружены у жителей Ставрополя и Невинномыс- ска в 0,7% случаев [9]. Методом ИФА специфические IgG антитела были выявлены у 1,1% обследованных лиц [17]. Чеченская Республика Среди 288 сывороток, собранных в 1991 г., в РТГА положительной оказалась одна проба (0,3%). Кабардино-Балкарская Республика Результаты тестирования в РТГА 142 сывороток жителей г. Нальчик оказались отрицательными [9]. Саратовская область У доноров, обследованных в 1990-1991 гг. методом ИФА-IgG антитела к ВЗН встречались в 8,1% случаев [18]. В последующей публикации содержалась информация о выявлении IgG антител у жителей 8 районов, расположенных в степной зоне, и 4 районов, относящихся к полупустынной зоне [19]. Материалы и методы Сыворотки крови В процессе работы были обследованы в общей сложности 2404 сыворотки крови доноров, собранные в 2010-2013 гг. в Астраханской области (657 проб), Ставропольском (56) и Краснодарском краях (243), Саратовской области (1448). Вирусы Для постановки реакции нейтрализации и приготовления специфических вирусных антигенов использовали вирусы лихорадки Западного Нила (штамм 986, выделенный из крови больного ЛЗН в Астраханской области, относящийся к !а генотипу) и Усуту (штамм SAAr 1776). Метод ИФА для выявления специфических иммуноглобулинов G (ИФА-IgG) В лунках полистироловых планшетов сорбировали поликлональные мышиные IgG к ВЗН в карбонатно-бикарбонатном буфере (ККБ) [21]. Затем вносили в следующей последовательности: блокирующий раствор 1% бычьего сывороточного альбумина, специфичный вирусный антиген (или нормальный контрольный антиген), обследуемые сыворотки и мышиные антитела к иммуноглобулинам IgG человека, меченные пероксидазой хрена (ГНЦ РФ «Институт иммунологии Федерального медико-биологического агентства», Москва). На каждом из этапов постановки ИФА-IgG реакционные компоненты инкубировали 1 ч при температуре 37 оС, затем смесь тщательно промывали 0,01 М фосфатно-буферным раствором pH 7,4 с добавлением 0,15 М NaCl и 0,05% твина- 20. Субстрат-индикаторной системой служил раствор тетраметилбензидина с 0,006% перекиси водорода (H2O2). Реакцию останавливали 1N раствором серной кислоты. Результаты реакции учитывали по величине оптической плотности (ОП) при длине волны 450 нм. В каждом опыте использовали специфический антиген и нормальный контрольный антиген, а также контрольные IgG-позитивные сыворотки. Реакцию считали положительной, если отношение экстинкции опытных и контрольных образцов составляло не ORIGINAL INVESTIGATIONS Таблица 1 Возрастная структура гуморального иммунитета к ВЗН у населения Астраханской области (2010-2012 гг.) Результаты обследования населения Астраханской области на антитела к ВЗН в ИФА-IgG и реакции нейтрализации (2010-2012 гг.) Территории Число сывороток % по- ложитель- ных обследованных положительных Дельта Волги г. Астрахань 290 33 11,4 Районы: Володарский 151 38 25,2 Икрянинский 10 5 50 Камызякский 139 35 25,2 Красноярский 13 1 7,7 Лиманский 11 4 36,4 Наримановский 20 5 25 Приволжский 11 4 36,4 Трусовский 1 1 100 В с е г о... 646 126 19,5 Северные районы поймы Волги Ахтубинский 1 0 Енотаевский 4 1 25 Харабалинский 2 0 Черноярский 2 0 В с е г о... 9 1 11,1 Район неизвестен 2 2 100 В целом по области 657 129 19,6 менее 3 (при ОП450 не ниже 0,3 для опытных образцов и не выше 0,1 в контроле). Реакция нейтрализации Показатели обнаружения антител к ВЗН у мужчин и женщин. Астраханская область (2010-2012 гг.) Реакцию нейтрализации выполняли микрометодом [20] в 96-луночных планшетах (фирма Costar) в перевиваемой культуре клеток VeroE6. Для заражения клеточной культуры использовали смесь десятикратных разведений обследуемых сывороток и суспензию мозга инфицированных мышей, содержащую 100 ЦПД50 ВЗН. При постановке опытов включали следующие контроли: определение токсичности сывороток для клеток VeroE6, титрование исходной вируссодержащей суспен- Пол Число сывороток % положительных обследованных положительных Мужчины 411 83 20,2 Женщины 244 44 18,0 Неизвестен 2 2 100 Таблица 2 В с е г о... 657 129 19,6 Возрастные груп- Число сывороток % положипы, годы обследованных положительных тельных 18-29 225 33 14,7 30-39 163 39 32,9 40-49 149 34 22,8 50 и старше 118 21 17,8 Неизвестно 2 2 100 В с е г о... 657 129 19,6 Таблица 4 Титрование сывороток крови доноров из Астраханской области (2011 г.) на антитела к ВЗН в ИФА-IgG и реакции нейтрализации Номер сыворотки Титры антител в ИФА-IgG в РН Таблица 3 479 1:200 1:40 481 1:400 1:80 486 1:200 1:1280 487 1:200 1:160 492 1:400 1:80 500 1:400 1:40 506 1:400 1:20 517 1:200 1:20 519 1:400 1:640 541 1:400 1:320 545 1:400 1:80 547 1:200 1:40 551 1:800 1:320 560 1:400 1:40 562 1:200 1:20 571 1:1600 1:160 580 1:200 1:320 582 1:800 1:80 583 1:800 1:320 588 1:400 1:160 593 1:800 1:160 601 1:200 1:80 610 1:400 1:640 611 1:1600 1:80 614 1:100 1:20 631 1:1600 1:160 633 1:400 1:320 634 1:200 1:80 663 1:400 1:320 669 1:100 1:40 673 1:800 1:160 674 1:800 1:320 Таблица 5 Показатели обнаружения антител к ВЗН у мужчин и женщин. Краснодарский край (2012 г.) Пол Число сывороток Процент положительных обследованных положительных Мужчины 73 3 4,1 Женщины 83 3 3,6 Неизвестно 87 5 5,7 В с е г о 243 11 4,5 Таблица 6 Титрование сывороток крови жителей Краснодарского края (2012 г.) на антитела к ВЗН в ИФА-IgG и реакции нейтрализации Номер сыворотки Титры антитела в ИФА-IgG в РН 28 1:1600 1:160 71 1:100 1:20 98 1:800 1:160 135 1:100 отр 162 1:3200 1:320 183 1:3200 1:1280 188 1:400 1:20 195 1:200 отр 206 1:200 1:40 221 1:1600 отр 223 1:400 1:80 оригинальные исследования зии, контроль рабочей дозы вируса, контроль нейтрализации вируса с контрольной иммунной сывороткой. Результаты учитывали в течение 14 сут, просматривая лунки планшета в инвертируемом микроскопе. За титр антител принимали наибольшее разведение сыворотки, при котором наблюдалась защита культуры от 100 ЦПД вируса. Положительные сыворотки из числа обследованных в ИФА-IgG и реакции нейтрализации на антитела к ВЗН для подтверждения специфичности результатов тестировали на антитела к антигеннородственному флавивирусу Усуту, циркуляция которого недавно была установлена в странах Южной, Центральной и Восточной Европы. Результаты Астраханская область В 657 сыворотках крови доноров, полученных из 12 сельских районов Астраханской области и Астрахани, антитела к ВЗН были обнаружены в 129 (19,6%) сыворотках. Их них в реакции нейтрализации из 588 обследованных сывороток положительными оказались 88 (13,4%) сывороток, в ИФА-IgG - 129 (из 657). Совпадение результатов реакции нейтрализации и ИФА-IgG составило 80,7%. Антитела к ВЗН обнаружены у жителей г. Астрахани, Володарского, Икрянинскго, Камызяк- ского, Красноярского, Лиманского, Наримановского, Приволжского, Трусовского и Енотаевского районов (табл. 1). Число обследованных проб из северных районов области (Ахтубинского, Харабалинского и Черноярского районов) было крайне незначительным. Частота обнаружения антител у мужчин и женщин оказалась практически одинаковой, соответственно 20,2 и 18% (табл. 2). В возрастных группах 30-39 и 40-49 лет - 32,9 и 22,8% (табл. 3). В качестве примера, иллюстрирующего активность IgG и нейтрализующих антител в сыворотках крови доноров из Астраханской области, приводятся результаты обследования положительных проб в ИФА и РН (табл. 4). В большинстве случаев титры IgG значительно превышали титры нейтрализующих антител. Краснодарский край Таблица 7 Результаты обследования населения Ставропольского края на IgG и нейтрализующие антитела к ВЗН (2013 г.) Пол Число сывороток Процент обследованных положительных положительных Женщины 15 1 6,7 Мужчины 29 1 3,4 Неизвестно 12 1 8,3 В с е г о... 56 3 5,4 Таблица 8 Результаты обследования населения Саратовской области на антитела к ВЗН в ИФА-IgG и реакции нейтрализации (2011-2012 гг.) Районы Число сывороток Процент положительных обследованных положительных Аткарский 179 2 1,1 Базарно-Карабулакский 122 5 4,5 Балтайский 100 1 1 Вольский 138 0 0 Воскресенский 126 2 1,6 Екатериновский 61 0 0 Калининский 108 1 0,9 Лысогорский 24 0 0 Новобурасский 78 0 0 Петровский 97 0 0 Романовский 117 1 0,9 Ртищевский 93 0 0 Саратовский 126 1 0,8 Хвалынский 89 0 0 В с е г о по области... 1448 13 0,9 Таблица 9 Возрастная структура гуморального иммунитета населения Саратовской области к ВЗН (2011-2012 гг.) Возрастные группы, годы Число сывороток Процент положительных обследованных положительных от 19 до 29 329 2 0,6 от 30 до 49 543 5 0,9 от 50 до 69 300 3 1,0 от 70 до 89 137 3 2,2 В с е г о... 1448 13 0,9 В Краснодарском крае среди 243 обследованных сывороток было выявлено 11 (4,5%)положи- тельных : 11 - в ИФА-IgG (4,5%) и 9 - в реакции нейтрализации (3,7%). Процент совпадения результатов по двум реакциям составил 72,2%. Среди мужчин антитела встречались в 4,1% случаев, среди женщин - в 3,6% случаев (табл. 5). Титры IgG во всех случаях значительно превышали титры нейтрализующих антител (табл. 6). Среди 56 сывороток из Ставропольского края 3 (5,4%) оказались положительными: 2 - только в ИФА-IgG и одна - в реакции нейтрализации. У женщин антитела встречались в 6,7% случаев, у мужчин - в 3,4% случаев (табл. 7). Единичные пробы сывороток были получены из городов Ставрополя и Кисловодска и 17 сельских районов края: Александровского, Апанасенковско- го, Арзгирского, Благодарненского, Буденновского, Ипатовского, Красногвардейского, Курского, Лево- кумского, Минералводского, Нефтекумского, Новоалександровского, Новоселицкого, Петровского, Тру- новского, Туркменского и Шпаковского. Антитела к ВЗН были обнаружены у двух жителей Ипатовского района и у одного жителя Левокумского района. Саратовская область В результате обследования 1448 сывороток крови из Саратовской области IgG антитела к ВЗН были обнаружены в 13 (0,8%) сыворотках , 9 из них оказались положительными и в реакции нейтрализации. Процент совпадения результатов двух реакций составил 69,2%. Обследованные сыворотки были получены из Таблица 10 Показатели обнаружения антител к ВЗН у мужчин и женщин в Саратовской области (2011-2012 гг.) Пол Число сывороток Процент положительных обследованных положительных Мужчины 456 3 0,7 Женщины 852 9 0,8 Неизвестен 140 1 0,7 Всего... 1448 13 0,9 ORIGINAL INVESTIGATIONS 14 районов Саратовской области. Положительные находки были выявлены в Базарно-Карабулакском (4,5%), Воскресенском (1,6%), Аткарском (1,1%), Балтайском (1,0%), Калининском (0,9%), Романовском (0,9%), Саратовском (0,8%) районах (табл. 8). Антитела встречались несколько чаще в старших возрастных группах; у мужчин - в 0,7% случаев, у женщин - в 0,8% (табл. 9, 10). Так же как и при обследовании сывороток крови населения Астраханской области и Краснодарского края, титры IgG у серопозитивных доноров из Саратовской области в большинстве случаев значительно превышали титры нейтрализующих антител (табл. 11). Для подтверждения специфичности антител к ВЗН, выявляемых у населения регионов России, 11 сывороток крови больных ЛЗН из Ростовской области были обследованы методом MAC-ELISA с антигенами вирусов ЗН и Усуту, 5 сывороток серопозитивных доноров из Астраханской области - в реакции нейтрализации с вирусами ЗН и Усуту. Полученные результаты свидетельствуют о том, что антитела, обнаруженные в этих группах обследованных лиц, появились в результате инфицирования ВЗН, но не вирусом Усуту (табл. 12, 13). Обсуждение В результате обследования методом ИФА-IgG и реакции нейтрализации 2404 сывороток крови, взятых у жителей южного региона европейской части России в 2010-2013 гг., антитела к ВЗН были обнаружены нами в 19,6% случаев в Астраханской области, в 4,5% в Краснодарском крае, в 0,9% в Саратовской области, в 5,4% в Ставропольском крае. Совпадение результатов по реакции нейтрализации Т аблица 1 1 Титрование сывороток крови жителей Саратовской области, позитивных на антитела к ВЗН Номер сыворотки Титры ИФА-IgG РН 76 1:200 1:40 224 1:400 1:640 231 1:1600 отр 236 1:800 отр 267 1:400 1:80 286 1:200 1:80 596 1:400 отр 608 1:1600 1:160 644 1:1600 1:20 646 1:1600 1:320 825 1:800 отр 1677 1:3200 1:80 1801 1:3200 1:20 Таблица 12 Результаты обследования IgM-позитивных сывороток крови больных ЛЗН из Ростовской области в ИФА-IgM на антитела к вирусу Усуту Номер сыворотки Титры IgM антител в ИФА с антигенами вирусов Западного Нила Усуту 231 1:3200 0* 242 1:1600 0 252 1:100 0 290 1:3200 1:400 291 1:200 0 304 > 1:3200 1:800 311 1:800 0 323 1:200 0 339 1:400 0 368 1:200 0 382 > 1:3200 1:200 Примечание. * - 0 - отрицательный результат в разведении сывороток 1:100. оригинальные исследования и ИФА-IgG составило 80,7% по Астраханской области, 69,2% по Саратовской области, по Ставропольскому краю, 72,2% по Краснодарскому краю. В сумме по всем регионам процент совпадения составил 73,1%. Данные по Ставропольскому краю по причине незначительного количества обследованных проб недостаточно информативны. Тем не менее представленные в статье результаты в целом коррелируют с показателями заболеваемости и известной продолжительностью эпидемиологической активности ЛЗН на территориях этого региона. В Астраханской области циркуляция ВЗН была впервые установлена в 1963 г. [1], первые случаи заболевания верифицированы в 1967 г. [2]. В период с 1990 по 1998 г. выявлено 27 подтвержденных случаев [3], с 1999 по 2015 г. (по данным Роспотребнадзора) - 548. Наиболее высокие показатели заболеваемости наблюдались в 1995 (95), 2005 (73), 2012 (70) и 2013 (70) гг. В 1964-1965 гг. при обследовании методом РТГА антитела к ВЗН были обнаружены в среднем у 3,3% жителей области, в Таблица 13 Обследование сывороток крови доноров из Астраханской области на антитела к ВЗН и Усуту в реакции нейтрализации Номер Результаты РН с вирусами сыворотки ЗН Усуту 487 1:160 отр* 506 1:20 отр 519 1:640 отр 601 1:80 отр 610 1:640 отр П р и м е ч а н и е . * - отрицательный результат в разведении 1:20. 1967-1970 гг. в дельтовых районах - у 16,3%, в г. Астрахани и прилегающих территориях - у 4,1%. В 1989 г. специфические IgG антитела выявлялись (в среднем по области) у 48,2% населения, в 19981999 гг. - у 37,9%, в 2001 г. - 19,4%, в 2010-2012 гг. - в 19,6%. В Краснодарском крае во время эпидемической вспышки ЛЗН в южном регионе европейской части России было зарегистрировано 85 случаев ЛЗН [12], в 2007, 2008, 2010 и 2015 гг. в общей сложности - 20 случаев. В 1981-1993 гг. частота обнаружения антител к ВЗН у населения различных районов края варьировала от 1,2 до 2,8%, по данным за 2007 г. - от 0,5 до 12,5%. В Ставропольском крае единственный случай заболевания местного жителя верифицирован в 2012 г. В 1991 г. методом РТГА антитела ЗН были обнаружены у населения Ставрополя и Не- винномысска в 0,7% случаев, позднее методом ИФА-IgG - у 1,1% обследованных лиц. В Саратовской области двое больных ЛЗН были выявлены впервые в 2010 г., 9 - в 2012, 30 - в 2013 и один - в 2014 г. (данные Роспотребнадзора). В 1990-1991 гг. IgG антитела к ВЗН были обнаружены у жителей области в 8,1% случаев. Анализ информации, содержащийся в настоящей статье, в сочетании с данными о заболеваемости ЛЗН в Волгоградской области (1258 случаев с 1999 по 2014 г.), Ростовской области (218 с 2000 по 2015 г.) и Дагестане (1 случай в 2015 г.), свидетельствует об активности эндемичных очагов ЛЗН и расширении ареала ВЗН в обширном южном регионе европейской части России, включающем в настоящее время Астраханскую, Волгоградскую, Ростовскую, Саратовскую области, Краснодарский край, Ставропольский край и Дагестан. Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

About the authors

Alina A. Kozlova

N.F. Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: arboelisa@mail.ru
researcher of the Laboratory of biology and indication of viruses, N.F. Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology 18, Gamaleya str., Moscow, 123098, Russian Federation

A. M Butenko

N.F. Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: arboelisa@mail.ru
D.I. Ivanovsky Institute of Virology 18, Gamaleya str., Moscow, 123098, Russian Federation

V. F Larichev

N.F. Gamaleya Federal Research Center for Epidemiology and Microbiology

Email: vlarichev@mail.ru
D.I. Ivanovsky Institute of Virology 18, Gamaleya str., Moscow, 123098, Russian Federation

A. R Azarian

Center of Hygiene and Epidemiology in the Astrakhan region

Email: tu_rpn@astrakhan.ru
Astrakhan, 414057, Nikolaya Ostrovskogo str., 122/89

A. P Grishanova

Center of Hygiene and Epidemiology in the Astrakhan region

Email: tu_tnp@astrakhan.ru
Astrakhan, 414057, Nikolaya Ostrovskogo str., 122/89

E. I Ivashchenko

Center of Hygiene and Epidemiology in the Astrakhan region

Email: tu_rpn@astrakhan.ru
Astrakhan, 414057, Nikolaya Ostrovskogo str., 122/89

G. L Shendo

Center of Hygiene and Epidemiology in the Astrakhan region

Email: astrfguz@yandex.ru
Astrakhan, 414057, Nikolaya Ostrovskogo str., 122/89

T. K Dzagurova

M.P. Chumakov Institute of Poliomyelitis and viral encephalitides

Email: centrglps@rambler.ru
27 km, Kiev highway, Moscow, 142782, Russian Federation

O. M Pilikova

Stavropol Research Anti-Plague Institute

Email: novppchs@rambler.ru
13-15, Soviet str., Stavropol, 355035, Russian Federation

N. F Vasilenko

Prichernomorskaya Anti-Plague Station

Email: nfvasilenko@mail.ru
90, Kunikova str., Novorossiysk, 353919, Russian Federation

References

Supplementary files