BIOLOGY OF THE ORAL CAVITY IN CHILDREN LIVING IN THE CITY OF CHIRCHIK

Full Text

Мы живём в XXI веке - веке научно технического прогресса, в основе которого широкое внедрение в нашу жизнь новых технологий. При этом следует заметить, что научно-технический прогресс - решающий фактор роста общественного производства. С развитием научно-технической революции неизбежно возрастает воздействие человека на природу, которое становится все более и более заметным. Нередко оно связано с загрязнением воздушного бассейна, водоёмов, нарушением почвенного покрова. Современные медицинские исследования свидетельствует, что в здоровье человеческой популяции, в том числе в стоматологическом, в последнее десятилетие сохраняются неблагоприятные тенденции, при этом определяющее значение в нарушении здоровья населения принадлежит следующим фактором: образу жизни, экологии природной среды, генотипу популяции и уровню оказания медицинской помощи. Неблагоприятные экологические факторы в первую очередь оказывают негативное влияние на здоровье детей и, в том числе, на стоматологический статус. При этом состояние стоматологического здоровья детей является одним из чувствительных показателей, отражающих качество окружающей среды, так как для развивающихся и активно растущих тканей челюстно-лицевой области ребёнка потенциально опасны любые концентрации и дозы вредных веществ. Цель исследования - изучить состояние количественных и качественных показателей флоры и показателей местных факторов защиты полости рта у детей, проживающих в г. Чирчике. Вполне очевидно, что к числу важных региональных экологических факторов, негативно влияющих на состояние здоровья населения, следует отнести промышленные выбросы. Одним из промышленных городов в Ташкентской области является г. Чирчик, в котором расположены такие промышленные производства, как Чирчикский химический завод «Мах-am-Chirhiq”, Узбекский комбинат тугоплавных и жаропрочных металлов (УзКТЖМ), трансформаторный и капролактановый заводы, которые выбрасывают свои промышленные отходы в атмосферу (пыль, сернистые газы, двуокись азота, аммиак и др.). Материал и методы Для решения поставленной цели нами проведены микробиологические и иммунологические исследования у 57 детей, проживавших в г. Чирчике. Все эти дети в зависимости от возраста были разделены на 3 группы: 1-я -17 детей в возрасте 6-7 лет, 2-я - 25 детей в возрасте 8-12 лет, 3-я - 15 детей в возрасте 13-15 лет. У всех детей забирали ротовую жидкость методом смыва со слизистой оболочки полости рта (путём полоскания). Для этого были подготовлены пробирки с 9 мл стерильного физиологического раствора (Ефимович О.И., 2002). Полученный материал этим способом считали как первое разведение (101), из этого материала в лаборатории готовили ряд серийных разведений, в последующем определенный объём этих разведений засевали на поверхность дифференциальнодиагностических питательных сред. Для этого нами использованы высокоселективные питательные среды производства Узбекско-Индийской фирмы Hei-Media, такие как среда Эндо, молочно-солевой агар, Сабуро-агар, бифидоагар, МРС-4 (молочно-индуцирующая среда). Посевы на кровяном агаре, Эндо, молочно-солевом агаре и Сабур-агаре культивировали в обычных условиях в течение 18-24 ч при температуре 37 0С, а культивирование посевов для выделения анаэробов осуществляли в анаэростате, используя газогенераторные патроны. Посевы в анаэростате со средами МРС-4, КАБ и Блоурока помещали в термостат при 37 0С на 3-5 сут. По истечении указанных сроков все засеянные чашки вынимали из термостата, подсчитывали выросшие колонии, определяли групповую и видовую принадлежность изолированных колоний микробов на основе данных микроскопии мазков, окрашенных по Граму, и по характеру роста на селективных питательных средах. Родовую принадлежность стафилококков и микрококков определяли следующими тестами: наличие пигмента, данные микроскопии, ферментация глюкозы в анаэробных условиях. Для дифференциации видов стафилококков использовали следующие характеристики: способность вырабатывать гемолизин, плазмокоагулазу, лецитиназу, ферментировать маннит в анаэробных условиях. При наличии всех этих свойств изучаемые культуры нами были отнесены к золотистым стафилококком. Эпидермальные стафилококки не обладали подобными свойствами. К стрептококкам группы Д мы относили штаммы, ферментирующие маннит, дающие рост в 40% желчи, 6,5% хлорида натрия, редуцирующие в молоке 1% синьку. При работе по модифицированной методике результат учитывали по последнему разведению, в котором получен рост бактерий. Количество микроорганизмов подсчитывали по следующий формуле: к = А·200·Р( КОЕ/мл). Количество микробов каждого вида выражали в Lg. КОЕ /мл. Параллельно с микробиологическими исследованиями у одних и тех же детей во всех возрастных группах изучали местные факторы защиты полости рта, такие как фагоцитарная активность нейтрофилов, уровень лизоцима и титр иммуноглобулина А секреторной фракции (sIgA). Определение фагоцитарной активности нейтрофилов в ротовой жидкости проводили по модифицированной методике Антонова А.В. (1996). Для этого отобранную ротовую жидкость очищали, промывали забуференным раствором и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин, надасадочную жидкость сливали, а к осадку добавляли 0,5 мл физиологического раствора. К 0,2 мл полученной взвеси в пробирке добавляли 0,1 мл взвеси частиц латекса (5-108 1 мл) диаметром 0,8 мкм. Смесь инкубировали во влажной камере 30 мин при 37 0С. В последующем из этой смеси готовили мазки, окрашивали по Романовскому-Гимзе. Подсчитывали не менее 100 нейтрофилов с латексом и без него в каждом препарате, определяли показатель фагоцитоза и выражали в %. Активность лизоцима в ротовой жидкости определяли способом, предложенным Ш.Р Алиевым (2004), который включал в себя использование стерильных бумажных дисков. В этих целях брали пинцетом бумажные диски (схожие с антибиотиковыми дисками) и тщательно пропитывали их в ротовой жидкости. После чего эти диски укладывали на поверхность питательного агара Мюллера-Хинтона в чашках Петри, засеянных газоном суточной культуры М. Lu-teus (штамм №003596/126/национальная коллекция микроорганизмов инфекции человека НИИ ЭМИЗ МЗРУз). Посевы инкубировали в термостате при температуре 370С, активность лизоцима в ротовой жидкости определяли по методу диффузии в агар. Определение титра иммуноглобулина класса А секреторной фракции ^1дЛ) проводили по методу Манчини (1994). Метод основан на измерении диаметра кольца преципитации, образующегося при внесении ротовой жидкости в лунки, вырезанные в слое агара, в котором предварительно диспергированы моноспе-цифические сыворотки. В стандартных условиях опыта диаметр кольца преципитации прямо пропорционален концентрации иммуноглобулина. Нам представлялось интересным изучение состояния колонизационной резистентности различных биотопов полости рта у обследуемых детей, таких как десна, поверхность языка, щеки и нёбо. Для решения этой задачи нами использованы гильзы из нержавеющей стали с определённой глубиной и поверхностью, которые после тщательной стерилизации в асептических условиях заливали высокоселективными питательными средами, после чего помещали в чашки Петри и хранили в холодильнике. При обследовании детей производили посев отпечатками, для этого гильзы со стороны поверхности с питательными средами прикладывались к поверхности слизистых оболочек: десны, языка, щеки и нёба на 2-3 с, затем эти гильзы вновь помещали в чашки Петри и вносили в термостат при температуре 370С на 24-48 ч. По истечении срока инкубации чашки вынимали из термостата, забирали из них гильзы с посевами и производили подсчёт выросших колоний (КОЕ/см2), после чего у выросших колоний изучали морфологию, культуральные, тинкториальные и биохимические свойства, тем самым устанавливали вид выросшего микроба. Результаты исследования Полученные данные исследований представлены в табл. 1. Как видно из табл. 1, у детей 6-7 лет общее количество факультативной группы микробов стало выше, чем в анаэробной. При этом особенно страдают среди анаэробов количественные показатели лактобактерий, так, их количество составило Lg. 2,10 ± 0,1 КОЕ/мл. Настораживает у этой группы детей высевание патогенных штаммов стафилококка. По остальным группам микробов, хотя и есть незначительные изменения, но они недостоверны. У детей в возрасте 8-12 и 13-15 лет флора полости рта во многом стоит близко к нормальным показателям. Однако следует заметить достоверное увеличение количества стрептококков, особенно штаммов Str.mutans и тШ8. Данные иммунологического исследования титра лизоцима, показатель фагоцитоза и уровень секреторного иммуноглобулина класса А ^1дЛ) приведены в табл. 2. Из табл. 2 видно, что у детей в возрастной группе 6-7 лет почти по всем показателям отмечается иммунодефицит. Так, титр лизоцима составил 14 ± 0,41мг/%, тогда как он равняется 19,180 ± 0,60 мг/%. Показатель фагоцитоза составил 48,4 ± 1,45 %, что достоверно ниже контрольных показателей. Уровень sIgЛ составил 1,7 ± 0,1г/л, что значительно ниже нормы. Интересно отметить, что у детей более старшего возраста - 8-12 и 13-15 лет эти показатели существенно улучшились, хотя иммунодефицит у них усугубился только по показателям фракци№1дЛ . Вполне очевидно, что возраст 12 и 15 лет - это период начала полового созревания, который способствует улучшению показателей местных факторов защиты полости рта у детей и охране слизистой оболочки полости рта от развития патологических процессов. Эти позитивные сдвиги показателей местных факторов защиты полости рта у детей вполне коррелируют с состоянием микроэкологических процессов. Наиболее интересные данные нами получены при исследовании колонизационной резистентности микробов биотопов полости рта, таких как десна, поверхность языка, щека и нёбо у детей, проживающих в г. Чирчике, в возрастном аспекте. По данным наших исследований (табл. 3), установлено, что плотность микробной популяции в полости рта у здоровых детей является основополагающей характеристикой сообществ и во многом зависит от топографии экологической ниши. Наибольшее её значение отмечено в десне (4,01 ± 0,3 КОЕ/см2), минимальное - на слизистых оболочках нёба (1,20 ± 0,1 КОЕ/см2). При этом преобладающей по численности и видовому составу в биоценозе была грамположи-тельная флора, которая колонизировала 100 % обследуемых. Интересно отметить, что основную часть микрофлоры полости рта у здоровых детей составили представители рода Стрептококкус, при этом доминирующим видом был Str. salivarius . Среди грамположительной флоры значительное место в колонизации занимали стафилококки, при этом их количество преобладало на поверхности языка и десне. Среди других изучаемых групп микробов, которые колонизируют в полости рта, этим свойством очень слабо обладали грамотрицательные палочки (эшерихии, клебсиеллы), а грибы рода Кандида обладали способностью колонизировать только слизистые оболочки десны и языка. Изучение способности микробов к колонизации различных биотопов полости рта позволяет понять те интимные процессы, которые происходят в полости рта. Эти процессы, несомненно, зависят от состояния рН ротовой жидкости, а также от наличия специальных рецепторов в наших клетках Следующую группу наших исследований по изучению колонизационной резистентности микробов различных биотопов полости рта составили дети в возрасте 6-7 лет. Данные этих исследований представлены в табл. 4. Из табл. 4 видно, что у этих детей произошли достоверные сдвиги в процессе колонизации почти всех биотопов. Интересно отметить, что почти во всех биотопах отмечается достоверное снижение способности к колонизации, в частности у всех видов стрептококков, в то же время преобладающее место заняли стафилококки и грибы рода Кандида. Кроме того, настораживает то, что во всех биотопах достоверно уменьшена способность к колонизации у культур лактобактерии, а в отдельных биотопах, таких как щека и нёбо, она вообще элиминирована. Среди грамотрицательной флоры можно отменить стабильное состояние по колонизации эшерихии и клебсиеллы. Эти изменения, происходящие в вопросах колонизации микробов в биотопах полости рта у детей 6-7 лет, должны настораживать детских стоматологов в связи с риском развития у данной группы детей патологических состояний. По всей видимости, эти дети нуждаются в улучшении гигиены полости рта и проведении профилактических вмешательств по нормализации выявленных нарушений. Состояние колонизационных процессов в полости рта нами рассмотрено также у детей в возрасте 8-12 лет (табл. 5). Из табл.5 видно, что в этой группе детей произошли достоверные сдвиги в количественных параметрах процессов колонизации микробов в большинстве биотопов по лактобактериям и стрептококкам. Хотя всё ещё сохраняется тенденция превалирования в колонизации таких микробов, как грибы рода Кандида. Микробиологические исследования процессов колонизации микробов различных биотопов в полости рта у детей, проживающих в Чирчике, в возрасте 1315 лет, представлены в табл. 6. Из табл. 6 видно, что в этой возрастной группе позитивные процессы ещё более выражены. Так, почти по всем изучаемым биотопам отмечается доминирование культур стрептококков. При этом несколько снизились количественные параметры стафилококков. Однако настораживает другое - это сохранение высоких показателей по способности колонизации по всем биотопам микробов рода Кандида. Таким образом, на основании проведённых микробиологических и иммунологических исследований полости рта у детей, проживающих в г. Чирчике, в возрастном аспекте можно сделать определённые выводы. На основании проведённых санитарногигиенических и микробиологических исследований можно констатировать, что г. Чирчик является экологически неблагоприятным регионом. Выводы 1. Изучение микроэкологии ротовой жидкости у детей в г. Чирчик позволило установить, что в возрастной группе 6-7 лет наиболее выражены дисбио-тические состояния, главной особенностью которых являются снижение количества лактобактерий, но возрастание количества стафилококков и грибов рода Кандида. 2. При изучении местных факторов защиты полости рта у детей, проживающих в г. Чирчик, в возрастном аспекте выявлено, что иммунодефицитные состояния наиболее выражены у детей 6-7 лет. 3. Исследование состояния колонизационной резистентности микробов показало, что наиболее выраженные нарушения отмечены у детей 6-7 лет.

About the authors

Artur Mikhaylovich Khaidarov

Tashkent state dental Institute

Email: dr.khaydarovartur@mail.ru
Dean of the faculty of pediatric dentistry, Tashkent state dental Institute Tashkent

I. M Mukhamedov

Tashkent state dental Institute

Tashkent

Sh. K Bekpolotov

Tashkent state dental Institute

Tashkent

References

Supplementary files