THE PROPERTIES OF THE GINGIVAL FLUID FROM THE PATIENTS PRESENTING WITH ACUTE GINGIVITIS AND CHRONIC PERIODONTITIS

Full Text

В состав десневой жидкости (ДЖ) входят лейкоциты, слущенный эпителий, микроорганизмы, электролиты, белки, ферменты и компоненты системы иммунитета [1]. У здоровых людей ДЖ является транссудатом плазмы крови, а при воспалительном процессе формируется экссудат. Изменения состава ДЖ вносят вклад в патогенез острого гингивита и хронического пародонтита, частота которых остается высокой [4, 8, 14]. Воспалительный процесс в пародонте чаще имеет хроническое течение, что демонстрирует недостаточную эффективность механизмов врожденного (местного) и адаптивного (системного) иммунитета в полости рта [2, 5, 6, 9]. В настоящее время данные литературы о сдвигах состава ДЖ при этих видах патологии противоречивы [10, 12, 13]. Кроме того, некоторые компоненты ДЖ, способные модифицировать течение воспаления, до сих пор остаются неизвестными. Поэтому представляется важным оценить способ- Таблица 1. ФЧ и ФИ нейтрофилов, инкубируемых с физиологическим раствором и десневой жидкостью больных катаральным гингивитом и хроническим пародонтитом (п = 15; (М ± m) Показа тель Физиоло гический раствор Здоровые лица (п = 15) Больные катаральным гингивитом Больные хроническим пародонтитом ФЧ 2,5 ± 0,1 4,4 ± 0,2 7,1 ± 0,3 2,8 ± 0,2 р < 0,001* р1 < 0,001* р1 < 0,001* р2 < 0,001* ФИ, % 30,3 ± 1,5 74,4 ± 2,4 94,4 ± 1,3 38,4 ± 2,7 р < 0,001* р1 < 0,001* р1 < 0,001* р2 < 0,001* Примечание. Здесь и в табл. 4: * - вероятность различий при сравнении показателей: р - вероятность различий между показателями при инкубации с физиологическим раствором и показателями здоровых лиц; P1 - вероятность различий между показателями здоровых лиц и больных; р2 - вероятность различий между показателями больных катаральным гингивитом и больных хроническим пародонтитом. Таблица 2. Содержание ряда цитокинов в десневой жидкости больных катаральным гингивитом и хроническим пародонтитом (п = 15; М ± m) Показатель Здоровые лица Больные катаральным гингивитом Больные хроническим пародонтитом ΠΠ-1β 56,1 ± 13,7 86,7 ± 19,1 26,7 ± 6,8 р1 = 0,006* ИЛ-4 0 0 0 ИЛ-6 4,04 ± 0,9 36,9 ± 6,2 р < 0,001* 62,7 ± 5,14 р < 0,001* р1 < 0,001* ИЛ-8 23,4 ± 7,8 441,8 ± 23,8 р < 0,001* 114,3 ± 16,1 р < 0,001* р1 < 0,001* ФНОа 0,93 ± 0,2 7,5 ± 0,5 р < 0,001* 15,3 ± 2,3 р < 0,001* р1 = 0,003* П р и м е ч а н и е. Здесь и в табл. 3: * - вероятность различий при сравнении показателей: р - вероятность различий между показателями здоровых лиц и больных; р1 - вероятность различий между показателями больных катаральным гингивитом и больных хроническим пародонтитом. Масло Елена Юрьевна - канд. мед. наук, ассистент каф., тел. 8 (3022) 32-18-59, e-mail: maslo_lena@list.ru ность ДЖ изменять фагоцитарную активность интактных периферических нейтрофилов, а также определить уровень иммуноглобулинов, интерлейкинов, коагулирующие и фи-бринолитические свойства ДЖ при остром катаральном гингивите и хроническом пародонтите. Материал и методы Обследовано 30 больных от 25 до 40 лет (средний возраст 31,2 ± 0,4 года), которые были разделены на 2 группы по 15 человек: 1-я группа - пациенты с острым катаральным гингивитом, 2-я - с хроническим пародонтитом. Контрольную группу составили 15 человек, не имеющих соматическую и стоматологическую патологию. ДЖ получали с помощью шлифованной иглы путем аспирации. Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов -фагоцитарного числа (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ) -проводили после выделения нейтрофилов из крови доноров на двойном градиенте плотности фиколл-урографина (1,077 и 1,097 г/см3), трижды отмывали физиологическим раствором, вносили в пробирки в объеме 200 мкл (100 тыс. клеток в каждой аликвоте) и дополнительно вводили по 100 мкл десневой жидкости. В контрольные пробирки добавляли 200 мкл физиологического раствора (рН 7,2). Через 30 мин первичной инкубации при 37°С во все пробирки вносили по 50 мкл стандартной суспензии латекса и после дополнительной инкубации в течение 30 мин при 37°С готовили мазки, которые фиксировали этанолом и окрашивали по Романовскому-Гимзе. Концентрацию иммуноглобулинов (IgM, IgA, IgE, IgG общего и его подклассов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) и цитокинов (ΗΠ-1β, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, фНОа) определяли методом ИФА (реактивы ЗАО «Вектор-бест», Новосибирск). Коагуляционную и фибринолитическую активность ДЖ оценивали после внесения в 100 мкл донорской плазмы 100 мкл ДЖ. Через 10 мин инкубации при 37°С определяли время свертывания плазмы, коалиновое время, эуглобулиновый и хагеманзависимый фибринолиз. Полученные данные статистически анализировали с помощью программы Statistica for Windows Version 6.0. Оценку достоверности различий средних величин для независимых переменных осуществляли по t-критерию Стьюдента. Различия между сравниваемыми вариационными рядами считали достоверными при р < 0,05. Таблица 3. Уровень иммуноглобулинов в десневой жидкости больных катаральным гингивитом и хроническом пародонтитом (п = 15; М ± m) Показатель Здоровые лица Больные катаральным гингивитом Больные хроническим пародонтитом IgM 0,906 ± 0,3 3,560 ± 0,6 р < 0,01* 0,415 ± 0,1 р1 < 0,001* А Ig 0,702 ± 0,2 1,98 ± 0,4 р = 0,008* 0,844 ± 0,1 P1 = 0,01* E Ig 0 0 0 IgG общий 4,494 ± 0,7 19,51 ± 2,6 р < 0,001* 6,421 ± 1,5 р1 < 0,001* IgG1 0,228 ± 0,06 0,696 ± 0,1 р < 0,001* 0,186 ± 0,04 р1 < 0,001* IgG2 0,408 ± 0,1 1,258 ± 0,2 р < 0,001* 0,260 ± 0,1 р1 < 0,001* IgG3 0,108 ± 0,03 218 ± 0,06 р < 0,001* 0,083 ± 0,06 р1 < 0,001* IgG4 0,048 ± 0,02 0,172 ± 0,03 р = 0,002* 0,560 ± 0,06 р < 0,001* р1 < 0,001* 41 РОССИЙСКИЙ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, №1, 2012 Таблица 4. Сравнение ряда показателей гемостаза при инкубации донорской плазмы с физиологическим раствором и десневой жидкостью больных катаральным гингивитом и хроническим пародонтитом (n = 15; М ± m) Показатель Физиологический раствор Здоровые лица Больные катаральным гингивитом Больные хроническим пародонтитом Время рекальцификации, с 151,3 ± 1,1 132,4 ± 0,1 р < 0,001* 115,8 ± 1,2 р1 < 0,001* 98,6 ± 1,2 р1 < 0,001* р2 < 0,001* Коалиновое 42,2 ± 3,3 32,7 ± 2,6 24,5 ± 1,3 18,3 ± 1,6 время, с р = 0,03 р1 = 0,009* р1 < 0,001* р2 = 0,006* Эуглобулиновый фибринолиз, мин 245,0 ± 11,0 305,0 ± 14,0 р < 0,002* 363,0 ± 16,0 p1 = 0,01* 420,0 ± 13,0 р1 < 0,001* p2 = 0,01* Хагеманзависи- 2,8 ± 0,7 4,2 ± 0,4 5,7 ± 0,5 7,6 ± 1,3 мый фибринолиз, мин 0,09 Λ = 0,02* А = 0,02* Результаты и обсуждение При инкубации периферических нейтрофилов с ДЖ изменялась их фагоцитарная активность (табл. 1). При инкубации нейтрофилов с ДЖ уже у здоровых людей ФЧ увеличивалось на 60% по сравнению с инкубацией клеток с физиологическим раствором, еще больше повышаясь у пациентов с острым гингивитом. Вместе с тем при хроническом пародонтите ФЧ снижалось по сравнению с таковым как у здоровых лиц, так и у больных катаральным гингивитом. Подобная динамика наблюдалась и в уровне ФИ. Полученные факты свидетельствуют о том, что в ДЖ присутствуют вещества, способные активировать фагоцитоз нейтрофилов. Так, ранее было показано, что так называемые «оральные» лейкоциты обладают большей фагоцитарной активностью, чем нейтрофилы периферической крови одного и того же индивидуума [15]. На роль активаторов фагоцитоза могут претендовать провоспалительные цитокины, особенно ИЛ-8, ФНОа, компоненты комплемента С3а и С5а, возможно, иммунные комплексы, протеазы и др. При эмиграции в ДЖ активируются «оральные» лейкоциты, что сопровождается возрастанием местного резистивного потенциала. Вместе с тем при контакте интактных нейтрофилов с ДЖ больных острым гингивитом происходит еще большая активация фагоцитоза. Выявленный сдвиг, вероятно, указывает на дополнительную активацию нейтрофилов медиаторами воспаления - провос-палительными цитокинами, а также появлением других биологически активных веществ. ДЖ больных хроническим пародонтитом ингибировала фагоцитарную активность нейтрофилов. Не исключено, что этот эффект может быть связан с резким снижением уровня ИЛ-8 (табл. 2). Нами показано, что в ДЖ здоровых лиц содержатся все Ig, за исключением IgE (табл. 3). При катаральном гингивите происходит значительное повышение концентрации IgA, IgM и IgG за счет всех подклассов. Вероятно, выявленный сдвиг отражает закономерности местного воспалительного процесса, проявляющегося в увеличении проницаемости ге-матосаливаторного барьера вообще и гематодесневого барьера в частности. Гиперпродукция Ig может происходить мест-но вследствие активации межэпителиальных лимфоцитов [3]. При пародонтите же содержание IgG и его подклассов, за исключением IgG4, а также IgA и IgM уменьшалось по сравнению с концентрацией этих веществ в ДЖ у больных катаральным гингивитом. Следует отметить, что при пародонтите в достаточно высокой концентрации регистрируется IgE. В патогенезе хронического пародонтита, вероятно, могут принимать участие аллергические реакции I типа. В ДЖ как здоровых, так и больных катаральным гингивитом и хроническим пародонтитом выявляются провоспалительные цитокины (см. табл. 2). Так, концентрация ΗΠ-1β возрастает при катаральном гингивите и снижается при пародонтите. Аналогичная закономерность была выявлена при определении уровня ИЛ-8. Вместе с тем содержание провоспалительных цитокинов ИЛ-6 и ФНОа увеличивалось у пациентов с катаральным гингивитом и еще в большей степени нарастало при развитии хронического пародонтита. Противовоспалительный цитокин ИЛ-4 не выявлялся в ДЖ здоровых и больных лиц. Инкубация донорской плазмы с ДЖ как здоровых лиц, так и больных катаральным гингивитом и особенно хроническим пародонтитом сопровождалась уменьшением времени свертывания плазмы и коалино-вого времени, ингибированием эуглобули-нового и хагеманзависимого фибринолиза (табл. 4), при этом более выраженно при развитии пародонтита. Вероятно, обнаруженные реакции свидетельствуют о гиперпродукции тканевого фактора и ингибиторов активатора плазминогена, источниками которых могут служить моноциты и эндотелиальные клетки сосудов ротовой полости [7]. Не исключено, что повышение коагуляционного потенциала и появление ингибиторов фибринолиза в ДЖ при острых и хронических воспалительных процессах способствуют формированию «фибринового» блока, препятствующего резорбции и диссеминации микроорганизмов по микрососудам [11]. Таким образом, ДЖ содержит иммуноглобулины, цитоки-ны, прокоагулянты и ингибиторы фибринолиза. У здоровых лиц она способна усиливать фагоцитарную активность интактных периферических нейтрофилов. При остром гингивите это свойство ДЖ еще больше возрастает. При хроническом пародонтите выявляются признаки снижения местной резистентности и повышение тромбогенного потенциала.

About the authors

N. N Tsybikov

E. T Domanova

V. V Zobnin

M. Yu Ignatov

E. Yu Maslo

Email: maslo_lena@list.ru

N. V Isakova

References

Supplementary files