CITOKINE PROFILE OF SALIVARY AND GINGIVAL FLUID IN PREGNANT WOMEN

Full Text

Физиологическая беременность характеризуется отсутствием выраженного материнского клеточно-опосредованного иммунитета против чужеродных (отцовских) антигенов плода, что является условием успешного вынашивания плода [1]. При этом гуморальный (антительный) иммунный ответ на инфекционные антигены в организме беременных сохраняется без изменений [2]. Фетоплацентарные ткани беременных спонтанно секретируют цитокины, угнетающие клеточный иммунный ответ и способствующие гуморальному ответу: интерлейкины (ИЛ)-4, -5, -10 и трансформирующий ростовой фактор бета [3]. Клетки трофобласта на всех стадиях беременности активно продуцируют ИЛ-10, биологическая активность которого проявляется угнетением клеточного специфического иммунного ответа [1]. Развитие беременности сопровождается снижением функциональной активности естественных киллеров организма матери, что способствует сохранению плода, поскольку именно Т-киллерам отводится роль основных клеток-эффекторов в отторжении антигенов эмбриона [4]. Ингибиторы естественных киллеров секретируются трофобластом. Как известно, естественные киллеры, продуцируя гамма-интерферон, играют роль пусковых клеток при развитии клеточно-опосредованного иммунного ответа [5]. Угнетение естественных киллеров и снижение продукции γ-интерферона способствует превалированию дифференцировки Т-хелперов Th2, продуцирующих интерлейкины 4, 6, 10, 13 и др., угнетающих клеточно-опосредованный иммунный ответ [6]. При этом защитные функции иммунной системы беременной женщины, обусловленные синтезом антител, не только не снижаются, но даже активизируются в отношении патогенных бактерий. Физиологическая беременность сопровождается компенсаторным увеличением количества активированных моноцитов в периферической крови, что в сочетании с продукцией специфических антител, факторов врожденной иммунной защиты обеспечивает высокий уровень антибактериальной защиты [7]. Целью работы явилось проведение сравнительного анализа цитокинового профиля ротовой (РЖ) и десневой жидкости (ДЖ) у беременных женщин без стоматологической патологии и осложнений гестационного периода по сравнению со здоровыми донорами в динамике гемостационного периода. Материал и методы Обследованы 31 беременная женщина (клиническая группа), которых наблюдали на базе стоматологических кабинетов женских консультаций и стоматологических поликлиник Ростова-на-Дону. Беременность женщин протекала физиологически с отсутствием стоматологической патологии. Контрольную группу составили 32 небеременные женщины в возрасте от 18 до 30 лет. Средний возраст беременных женщин был 26,4±1,7 года и здоровых доноров клинической группы - 25,9±2,1 года. Индексную оценку стоматологического статуса проводили с помощью стоматологических индексов в первый, второй и третий триместры беременности. При этом использовали индекс кариеса КПУ, индекс гигиены полости рта по Грин-Вермиллиону (OHI-S), папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс PMA и пародонтальный индекс CPITN. В группе беременных последовательно во все три триместра беременности (первый - 8-12 нед, второй - 13-27 нед, третий - 28-40 нед беременности) в РЖ и ДЖ определяли методом иммуноферментного анализа при помощи соответствующих тест-систем («ИЛ-4-ИФА-БЕСТ» и «ИЛ-8-ИФА-БЕСТ» ЗАО «Вектор-бест», Новосибирск, Россия) содержание интерлейкинов ИЛ-4 и ИЛ-8. В ходе ИФА использовали термошейкер ST3 (Латвия) и аппарат для промывания планшетов Elisa Washer Human (США), оценку полученных результатов проводили на фотометре Multilabel Counter 1420 Victor (Финляндия). Сбор РЖ проводили натощак с 8 до 9 ч, путем сплевывания в стерильную стеклянную пробирку. Биомассу центрифугировали, хранили при температуре 30oC. Собирали ДЖ введением полосок из хроматографической бумаги с заостренным концом в десневую борозду на 5 мин. Количество ДЖ определяли по площади пропитанного участка полоски (в мм2). Элюаты получали путем помещения полосок с ДЖ в эппендорф, содержащий 0,5 мл 0,9% раствора NaCl при периодическом встряхивании в течение 4 ч. Статистический анализ проводили с использованием программы Statistica 10.0 (StatSoft Inc., США). Результаты Характеристики стоматологического статуса здоровых доноров и пациенток клинической группы в динамике гестационного периода отражены в табл. 1. Индексная оценка гигиенического состояния полости рта и пародонта подтвердила отсутствие воспалительных изменений и стоматологической патологии. Гигиенический индекс и пародонтальные индексы здоровых доноров, а также пациенток клинической группы в динамике беременности имели низкие значения. Исследования концентрации антимикробных пептидов проведены в РЖ и ДЖ. РЖ - это продукты секреции слюнных и слизистых желез оболочки полости рта в совокупности с клетками слущенного эпителия, лейкоцитами, микроорганизмами, остатками пищи, а также ДЖ. ДЖ - это транссудат сыворотки крови из десневого желобка, включающий лейкоциты, слущенные эпителиальные клетки, микроорганизмы, электролиты, белковые компоненты, ферменты [8]. ДЖ является основным поставщиком лейкоцитов в РЖ [9]. Кроме того, лейкоциты в РЖ могут попадать из рото-глоточного лимфоидного кольца [10]. Часть лейкоцитов, попадая в ротовую полость, погибает, выделяя лизосомальные ферменты (лизоцим, пероксидазу и др.). Характеристики содержания ИЛ-4 и ИЛ-8 в РЖ и ДЖ у здоровых доноров и пациенток клинической группы в динамике беременности представлены в табл. 2. Изменения ИЛ-4 в динамике беременности в РЖ и ДЖ у пациенток клинической группы по направленности были сходными: от 1-го к 3-му триместру содержание ИЛ-4 возрастало. Однако, если у здоровых доноров различий ИЛ-4 в двух биологических средах не было, то в клинической группе во все три триместра в ДЖ концентрация ИЛ-4 по сравнению с РЖ была многократно выше. У пациенток клинической группы концентрация ИЛ-4 в РЖ по сравнению с аналогичным показателей здоровых волонтеров повышалась (p < 0,05) только во 2-м (47,4%) и 3-м (74,3%) триместрах беременности. В ДЖ достоверное повышение концентрации ИЛ-4 относительно показателя у здоровых доноров имело место во все три триместра: в 1, 2 и 3-м триместрах соответственно на 183% (p < 0,05), 227% (p < 0,05) и 298% (p < 0,05). Однако прирост содержания ИЛ-4 в РЖ во 2-м и 3-м триместрах относительно величины в 1-м триместре выражен в большей мере. ИЛ-4 как противовоспалительный цитокин способен угнетать клеточно-опосредованные иммунные реакции, оказывает протективное действие на нормальное течение беременности [11]. Повышение ИЛ-4 в РЖ и ДЖ, очевидно, является следствием повышения его концентрации в крови. ИЛ-4 также усиленно продуцируется плацентой [11]. Во 2-м и 3-м триместрах беременности в крови у женщин существенно повышается количество лимфоцитов, отвечающих секрецией ИЛ-4 на контакт с отцовскими лейкоцитами, которые содержат чужеродные антигены, унаследованные плодом [1]. В связи с этим повышение концентрации ИЛ-4 в биологических средах ротовой полости у беременных женщин в динамике гестационного периода является физиологическим явлением. Неоднозначную роль во время беременности играет продукт активированных макрофагов ИЛ-8, являясь, с одной стороны, провоспалительным, а с другой - протективным цитокином, обеспечивающим ангиогенез и защиту плацентарных оболочек [12]. В репродукции ИЛ-8 участвует в процессах овуляции, оплодотворения и имплантации эмбриона, а также вовлекается в патологический процесс при преждевременных родах [11]. Фибробласты, эндотелиальные и эпителиальные клетки, в том числе ротовой полости, могут выделять ИЛ-8 в ответ на действие ИЛ-1 или ФНО-α [13]. Синтез ИЛ-8 может быть индуцирован также бактериальными и вирусными продуктами [13]. ИЛ-8 относят к хемокинам, вызывающим направленную миграцию лейкоцитов в очаг воспаления. ИЛ-8 усиливает экспрессию молекул адгезии, повышает внутриклеточную гибель микроорганизмов [14]. При физиологическом течении беременности ИЛ-8 продуцируется на всем ее протяжении, что связано с активацией факторов врожденного иммунитета, прежде всего дефензинов [15]. Установлено, что в ДЖ концентрация ИЛ-8 по сравнению с РЖ была на порядок (в 10-14 раз) выше как у здоровых доноров, так и у пациенток клинической группы. Если в РЖ содержание ИЛ-8 плавно повышалось от 1-го (4,5±0,3 пг/мл) ко 2-му (6,5±0,5 пг/мл) и 3-му триместру (7,2±0,4 пг/мл), то в ДЖ достоверный и выраженный прирост изучаемого цитокина произошел к 3-му триместру. По сравнению со здоровыми донорами у пациенток клинической группы повышение ИЛ-8 в РЖ было выражено как во 2-м (на 71%; p < 0,05), так и в 3-м триместре (на 89,5%; p < 0,05). В ДЖ существенное отличие концентрации цитокина у пациенток клинической группы по сравнению со здоровыми донорами произошло в 3-м триместре (на 57,9%; p < 0,05). Наиболее выраженный прирост концентрации ИЛ-8 как в РЖ, так и в ДЖ у пациенток клинической группы наблюдался в 3-м триместре беременности. Следовательно, концентрация ИЛ-4 как противовоспалительного медиатора, ограничивающего клеточный и стимулирующий гуморальный иммунитет, у беременных женщин при физиологическом состоянии и при отсутствии стоматологических заболеваний в течение гестационного периода в биологических средах ротовой полости последовательно повышалась. Причем, уровень содержания этих цитокинов в ДЖ многократно выше, чем в РЖ, что подчеркивает изменения содержания этих цитокинов в крови при беременности, а также прирост их концентрации в биологических жидкостях полости рта за счет усиленной секреции лейкоцитами. Продукция ИЛ-8 с течением беременности повышалась, в основном медиатор накапливался в десневой жидкости, что можно связать с его протективным действием, обеспечивающим ангиогенез. Кроме того, при физиологическом течении беременности ИЛ-8 продуцируется на всем ее протяжении, что связано с активацией факторов врожденного иммунитета, прежде всего дефензинов [15]. В заключение необходимо отметить, что динамика цитокинового профиля биологических сред РЖ и ДЖ в течение гестационного периода имела свои особенности. В организме беременной ввиду специфического иммунного ответа на чужеродные антигены плода в биологических средах ротовой полости компенсаторно активировались факторы гуморальной защиты. Выводы 1. У беременных женщин с физиологически протекающей беременностью при отсутствии стоматологических заболеваний факторы гуморальной защиты полости рта накапливаются преимущественно в ДЖ по сравнению с РЖ. 2. Содержание цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-8 в биологических жидкостях полости рта в динамике беременности возрастает, что усиливает защитный потенциал биологической среды ротовой полости.

About the authors

Viktoriya Aleksandrovna Prohodnaya

Rostov State Medical University, Health Ministry of Russian Federation

Email: ms.victoria111@mail.ru
cand. med. sci., assistant of the Department of dentistry of the Rostov state medical University, dentist 344022, Rostov-on-Don, Russian Federation

S. O Surmeneva

Rostov State Medical University, Health Ministry of Russian Federation

344022, Rostov-on-Don, Russian Federation

E. H Chibichyan

Rostov State Medical University, Health Ministry of Russian Federation

344022, Rostov-on-Don, Russian Federation

A. Yu Kosykh

Rostov State Medical University, Health Ministry of Russian Federation

344022, Rostov-on-Don, Russian Federation

References

Supplementary files