кандидат фармацевтических наук
доктор медицинских наук, профессор
кандидат медицинских наук, доцент
Introduction. To assess the pharmacokinetic indices of new drugs, it is necessary to develop analytical methods for determining their concentration in biological objects. Purpose of the study. Development and validation of HPLC-mass spectrometric methods for the determination of a new valproic acid derivative and 1,3,4-thiadiazole in rat brain. Methods. The object of the study was a new anticonvulsant N- (5-ethyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)-2-propylpentanamide (valprazolamide). Determination of valprazolamide was carried out by the HPLC-mass spectrometric method. Selectivity, sample transfer, linearity, accuracy, precision, matrix effect, the degree of extraction of valprazolamide were evaluated. Results. A method of HPLC-mass spectrometric determination of valprazolamide in rat brain homogenates was developed (Zorbax Eclipsi plus C18 analytical column - 4 μm 2,0*150 mm, temperature - 30°C; the mobile phase is acetonitrile and deionized water with the following gradient profile: 0-1 minute 10% acetonitrile; 1-5 minutes a linear increase in the concentration of acetonitrile to 90%; 5-6 minutes isocratic plot with a concentration of acetonitrile 90%; 6-10 minutes column conditioning with 10% acetonitrile; the flow rate of the mobile phase is of 0.6 ml/min; the volume of the injected sample accounts for 10 μl; total elution time - 10 minutes, mass detection with negative polarization). The MRM transition of valprazolamide amounted to m/z 254,0 → m/z 167,1. Conclusion. The analytical limits of the method are in the range from 1 to 1000 ng/ml. The developed method is selective, accurate, precise and linear, it meets the requirements for the validation of bioanalytical methods in all respects.
Введение. Для оценки фармакокинетических параметров новых лекарственных средств необходима разработка аналитических методов определения их содержания в биологических объектах. Цель исследования. Разработка и валидация методики высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-детектированием нового производного вальпроевой кислоты и 1,3,4-тиадиазола в головном мозге крыс. Методы. Объектом исследования явился новый антиконвульсант N-(5-этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид (вальпразоламид). Определение вальпразоламида осуществляли ВЭЖХ-масс-спектрометрическим методом. Оценивали селективность, перенос пробы, линейность, правильность, прецизионность, матричный эффект, степень извлечения вальпразоламида. Результаты. Разработана методика ВЭЖХ-масс-спектрометрического определения вальпразоламида в гомогенатах головного мозга крыс (аналитическая колонка Zorbax Eclipsi plus C18 4 мкм 2,0*150 мм, температура 30°С; подвижная фаза - ацетонитрил и вода деионизированная со следующим профилем градиента: 0-1-я минута - 10% раствор ацетонитрила; 1-5-я минута - линейное повышение концентрации ацетонитрила до 90%; 5-6-я минута - изократический участок с концентрацией ацетонитрила 90%; 6-10-я минута - кондиционирование колонки 10% ацетонитрилом; скорость потока подвижной фазы - 0,6 мл/мин; объем вводимой пробы - 10 мкл; общее время элюирования - 10 мин, масс-детектирование при отрицательной поляризации). Значение MRM-перехода вальпразоламида составило m/z 254,0 → m/z 167,1. Заключение. Аналитический диапазон методики составляет 1-1000нг/мл. Разработанная методика является селективной, точной, прецизионной и линейной, по всем параметрам соответствует требованиям по валидации биоаналитических методик.