кандидат биологических наук
кандидат химических наук
доктор медицинских наук, профессор
кандидат биологических наук
кандидат химических наук
доктор медицинских наук, профессор
Introduction. The specific activity of blood coagulation factor VIIa depends, among other things, on the presence of N-acetylneuraminic acid (sialic acid) and phosphate residues in the molecule. Thus the authenticity of glycosylation profile as one efficacy and safety proofs of drug product is of particular interest. However, the whole variability of posttranslational modifications requires an individual approach to corresponding assessment processed in accordance with the requirements and recommendations of the comparison of biosimilar drug products. Methods. Objects under the study referred as: original drug product NovoSeven, biosimilar drug product Coagil-VII and European reference standard of Human Coagulation Factor VIIa (rDNA) CRS. Two methodological approaches of high-pH-anion-exchange chromatography (HPAEC) and hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) with fluorescent and mass-spectrometric detection were used for the analysis of oligosaccharide distribution in all factor VIIa molecules. Results. А set of rFVIIa modifications represented basically by complex biantennary oligosaccharides with insignificant part of triantennary structures was established in this study. The most characteristic modification for Coagil-VII biosimilar was complex bisialylated core-fucosylated biantennary group. Conclusion. The evaluation of the N-glycosylation profile of recombinant blood coagulation factor VIIa based on the comparative analysis of biosimilar drug product, original drug product, and CRS standard sample revealed difference in quantitation of N-glycans among with general matching of the majority of peak retention times. Mass-spectrometric detection allowed to carry out a structural interpretation of HPLC data. A biosimilar drug product was used as an example to illustrate the necessity for factory standards certified in a prescribed manner for the further glycan profile authentication.
Введение. Специфическая коагуляционная активность фактора свертывания крови УПа зависит от наличия в молекуле данного белка N-ацетилнейраминовой (сиаловой) кислоты и фосфатных остатков. В связи с этим в качестве одного из критериев эффективности и безопасности лекарственных препаратов, содержащих данный белок, необходимо подтверждение подлинности профиля гликозилирования. Вместе с тем возможная вариабильность посттрансляционных модификаций требует индивидуального подхода к их оценке в соответствии с требованиями и рекомендациями по сравнению биоподобных препаратов. Материал и методы. В качестве объектов исследования использовали оригинальный препарат «НовоСэвен», биоподобный лекарственный препарат «Коагил-VII» и европейский референсный образец Human coagulation factor Vila (rDNA) CRS. Для анализа олигосахаридной части применяли методы анионообменной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии гидрофильного взаимодействия с флюоресцентным и масс-спектрометрическим детектированием. Результаты. В ходе исследования установлен основной набор модификаций молекул рекомбинантного фактора свертывания крови Vila, представленный комплексными биантенными олигосахаридами с незначительным присутствием триантенных структур. Для биоподобного лекарственного препарата наиболее характерной является модификация дисиалированной галактозилированной комплексной группой с одним остатком фукозы. Заключение. Оценка профиля N-гликозилирования рекомбинантного фактора свертывания крови Vila, основанная на сравнительном анализе биоподобного препарата, оригинального препарата и стандартного образца CRS выявила различия в количественном содержании гликанов при общем совпадении времен удерживания основных пиков всех образцов. Масс-спектрометрическое исследование позволило осуществить структурную интерпретацию полученных хроматографических данных. На примере биоподобного препарата показана необходимость использования при подтверждении подлинности гликопрофиля в качестве образца сравнения аттестованного установленным образом стандартного образца предприятия.