senior researcher Institute of Biomedical Chemistry, PhD
старший научный сотрудник Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича», кандидат биологических наук
researcher Institute of Biomedical Chemistry, PhD
научный сотрудник Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича», кандидат биологических наук
Head of the laboratory Institute of Biomedical Chemistry, Professor, doctor of biological Sciences
заведующий лабораторией Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича», профессор, доктор биологических наук
Introduction. The quantitative determination and isotyping of autoantibodies to a clinically significant protein - glutathione-S-transferase (GST) in blood serum samples is relevant for monitoring and predicting the dynamics of autoimmune processes. The aim of this study. To adapt an optical biosensor based on surface plasmon resonance (SPR) to detect the interactions of GST and its antibodies in several model experiments using blood serum samples. Methods. The SPR method was used to detect antigen-antibody complexes in the direct, signal enhancement and competitive inhibition assays. Results. For the first time it was shown that there is a principle possibility of SPR analysis for the detection of polyclonal antibodies against GST as an antigen in blood serum samples and isotype determination of bound antibodies with the following immunosensor parameters: a) the immobilization level of GST on a CM5 chip was 4-4.5 ng/mm2; b) the ligand binding capacity decrease after each biosensor cycle, when using 10 mM glycine-HCl (pH 1.5) as an regeneration solution, was 0.1-0.3%; c) linearity range was 30-325 nM; d) the serum content in the analyzed samples was 10% (v/v). Conclusion. Thus, the adaptation of the Biacore SPR biosensors (GE Healthcare, USA) to serial analysis of serum samples to monitor the presence and dynamics of autoantibodies to human body proteins (including GST) opens up new ways for the development of diagnostic tools in biomedical and clinical studies.
Введение. Количественное определение и изотипирование аутоантител к клинически значимому белку - глутатион-S-траснферазе в образцах сыворотки крови актуально для мониторинга и прогноза динамики аутоиммунных процессов. Цель исследования. Целью настоящего исследования была адаптация оптического биосенсора поверхностного плазмонного резонанса (Surface Plasmon Resonance, SPR) для детекции взаимодействий глутатион-S-трансферазы (GST) и антител к ней в модельных экспериментах с использованием образцов сыворотки крови. Методы. Для детекции комплексов «антиген - антитело» был использован метод SPR. Эксперименты выполняли по схемам прямой регистрации взаимодействий, «усиления сигнала» и «конкурентного ингибирования». Результаты. Впервые было показано, что существует принципиальная возможность SPR анализа для детекции поликлональных антител против GST в образцах сыворотки и определения изотипов связавшихся антител со следующими параметрами иммуносенсора: а) уровень иммобилизации GSTна чипе CM5 составил 4-4,5 нг/мм2; б) падение способности GST связывать антитела за биосенсорный цикл при использовании регенерационного раствора 10мМ глицин-НCl (pH 1,5) было 0,1-0,3%; диапазон линейности 30-325нМ; в) содержание сыворотки в анализируемых образцах 10% (по объему). Заключение. Таким образом, адаптация SPR биосенсоров линейки Biacore (GE Healthcare, США) под серийные анализы образцов сыворотки для мониторинга наличия и динамики аутоантител к белкам организма человека (в том числе к GST) открывает новые пути развития диагностического инструментария в биомедицинских и клинических исследованиях.