Molekulyarnaya Meditsina (Molecular medicine)

Молекулярная медицина

1728-29182499-9490

Russkiy Vrach Publishing House

303681

10.29296/24999490-2023-01-08

Original research

Оригинальные исследования

Research Article

The level of immune checkpoint co-inhibitors in tumor tissue in patients with colon tumor

Уровень коингибирующих иммунных контрольных точек в ткани опухоли у пациентов с новообразованиями толстой кишки

https://orcid.org/0000-0002-8472-107X

Chetveryakov

Andrey V.

Четверяков

Андрей Валерьевич

Russian Federation

postgraduate, Department of Hospital Surgery, FSBI HE “Chita State Medical Academy” of Ministry of Health

аспирант кафедры госпитальной хирургии ФГБОУ ВО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России

yasnogorsk94@gmail.com

https://orcid.org/0000-0002-2166-5154

Tsepelev

Viktor L.

Цепелев

Виктор Львович

Russian Federation

Head of the Department of Hospital Surgery, FSBI HE “Chita State Medical Academy” of Ministry of Health

Заведующий кафедрой госпитальной хирургии ФГБОУ ВО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России. Доктор медицинских наук, профессор.

viktorcepelev@mail.ru

FSBI HE “Chita State Medical Academy” of Ministry of HealthЧитинская государственная медицинская академия Минздрава России

01032023

211

56600103202301032023

2023

Russkiy Vrach Publishing House

ИД "Русский врач"

https://journals.eco-vector.com/1728-2918/article/view/303681

Introduction. A high level of checkpoint co-inhibitors in the tumor microenvironment plays an important role in inhibiting the local immune response, which contributes to the growth and progression of cancer.

The aim of the study. We aimed to determine immune checkpoint co-inhibitors level (CTLA-4, TIM-3, LAG-3, PD-1) and their ligands (B7-2, Galectin-9, PD-L1) in tumor tissue in patients with benign tumor of the colon and cancer.

Methods: the study enrolled 94 patients divided into 3 groups: 44 patients with colorectal cancer, 25 with a benign colon tumor, 25 – a control group (patients who underwent plastic surgery of a colostomy formed earlier due to a colon injury). The level of immune checkpoint co-inhibitors and their ligands was studied in tumor tissue by flow cytofluometry on a CytoFlex LX analyzer (Beckman Coulter, USA) using the LEGENDplex ™ HU multiplex analysis kit (Immune Checkpoint, USA)

Results: we found that in patients with colon cancer the level of immune checkpoint co-inhibitors (TIM-3, CTLA-4, LAG-3) in the homogenate supernatant of the tumor tissue was higher than in the control group. The level of TIM-3 protein increased by 43.6 times (p<0.001), CTLA-4 – by 2.3 times (p=0.007), LAG-3 – by 5.1 times (p<0.001). Patients with colorectal cancer also showed the elevation of the concentration of TIM-3 protein by 11.4 times (p<0.001), LAG-3 by 1.8 times (p=0.008), CTLA-4 protein by 1.5 times (p=0.02) compared to patients with benign colon tumor. In patients with colorectal cancer, the level of the TIM-3 ligand (Galectin-9) exceeded the indicator of the control group by 56.7 times (p<0.001), and the CTLA-4 ligand (B7-2) – by 1.7 times (p=0.004). In addition, the concentration of Galectin-9 in patients with CRC was 3.4 times higher (p<0.001), the B7-2 ligand was 1.5 times higher (p=0.04). compared to patients with benign colon tumor.

Conclusion: an increase in the level of CTLA-4, TIM-3, LAG-3 and their ligands – B7-2 and Galectin-9 in tumor tissue indicates the involvement of these molecules in the cancer genesis of colorectal cancer.

Введение. Высокий уровень коингибирующих контрольных точек в микроокружении опухоли играет важную роль в ингибировании локального иммунного ответа, что способствует росту и прогрессированию злокачественного новообразования.

Цель исследования. Определить уровень коингибирующих иммунных контрольных точек (CTLA-4, TIM-3, LAG-3, PD-1) и их лигандов (B7-2, Galectin-9, PD-L1) в ткани новообразования у пациентов с доброкачественными и злокачественными новообразованиями толстой кишки.

Методы: под наблюдением находились 94 пациента, которые были разделены на 3 группы: 44 больных с колоректальным раком, 25 – с доброкачественной опухолью толстой кишки, 25 – контрольная группа (пациенты, которым выполняли пластику колостомы, сформированной ранее по поводу травмы толстой кишки). Уровень коингибирующих иммунных контрольных точек и их лигандов определяли в супернатанте гомогената опухолевой ткани методом проточной цитофлуометрии на анализаторе CytoFlex LX (Beckman Coulter, США), используя набор для мультиплексного анализа LEGENDplex™ HU (Immune Checkpoint, США).

Результаты: установлено, что у больных с раком толстой кишки в супернатанте гомогената ткани опухоли уровень коингибирующих иммунных контрольных точек (TIM-3, CTLA-4, LAG-3) больше чем в контрольной группе. Уровень белка TIM-3 увеличивается в 43,6 раза (p<0,001), CTLA-4 – в 2,3 раза (p=0,007), LAG-3 – в 5,1 раза (p<0,001). Также у пациентов с колоректальным раком концентрация белка TIM-3 превышала аналогичный показатель больных с доброкачественной опухолью толстой кишки в 11,4 раза (p<0,001), LAG-3 в 1,8 раза (p=0,008), белка CTLA-4 в 1,5 раза (p=0,02). У больных со злокачественным новообразованием толстой кишки уровень лиганда TIM-3 (Galectin-9) превышал показатель группы контроля в 56,7 раза (p<0,001), а лиганда CTLA-4 (B7-2) – в 1,7 раза (p=0,004). К тому же концентрация Galectin-9 у пациентов с КРР по отношению к группе больных доброкачественной опухолью толстой кишки была выше в 3,4 раза (p<0,001), лиганда B7-2 в 1,5 раза (p=0,04).

Заключение. Увеличение уровня CTLA-4, TIM-3, LAG-3 и их лигандов – B7-2 и Galectin-9 в ткани опухоли указывает на участие этих молекул в канцерогенезе колоректального рака.

colorectal cancerimmune control pointsTIM-3CTLA-4LAG-3

колоректальный ракиммунные контрольные точкиTIM-3CTLA-4LAG-3

Grisaru-Tal S. Eosinophil–lymphocyte interactions in the tumor microenvironment and cancer immunotherapy. Nature Immunology. 2022; 23 (9): 1309–16. DOI: https://doi.org/10.1038/s41590-022-01291-2

Zhang H., Chen J. Current status and future directions of cancer immunotherapy. J. of cancer. 2018; 9 (10): 1773. DOI: https://doi.org/10.7150/jca.24577

Reticker-Flynn N. E. Lymph node colonization induces tumor-immune tolerance to promote distant metastasis. Cell. 2022; 185 (11): 1924–42. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2022.04.019

Ghorbaninezhad F., Masoumi J., Bakhshivand M., Baghbanzadeh A., Mokhtarzadeh A., Kazemi T., Aghebati-Maleki L., Shotorbani S.S., Jafarlou M., Brunetti O., Santarpia M., Baradaran B., Silvestris N. CTLA-4 silencing in dendritic cells loaded with colorectal cancer cell lysate improves autologous T-cell responses in vitro. Front Immunol. 2022; 1 (13): 931316. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.931316

Li X., Zhou X., Liu J., Zhang J., Feng Y., Wang F. Liposomal Co-delivery of PD-L1 siRNA/Anemoside B4 for Enhanced Combinational Immunotherapeutic Effect. ACS Applied Materials & Interfaces. 2022; 14 (25): 28439–54. DOI: https://doi.org/10.1021/acsami.2c01123

Joller N., Kuchroo K. Tim-3, Lag-3, and TIGIT. Curr Top Microbiol Immunol. 2017; 410: 127–56. DOI: https://doi.org/10.1007/82.2017.62

Liao X.A. Review of emerging biomarkers for immune checkpoint inhibitors in tumors of the gastrointestinal tract. Medical Science Monitor: International Medical J. of Experimental and Clinical Research. 2022; 28: e935348. DOI: https://doi.org/10.12659/MSM.935348

Sasidharan Nair V., El Salhat H., Taha R.Z. DNA methylation and repressive H3K9 and H3K27 trimethylation in the promoter regions of PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, TIGIT, and PD-L1 genes in human primary breast cancer. Clin Epigenet. 2018; 10 (11): 13148–52. DOI: https://doi.org/10.1186/s13148-018-0512-1

10.

Chen F. Immunohistochemistry analyses of LAG-3 expression across different tumor types and co-expression with PD-1. J. Clin. Oncol. 2020; 38 (15): е15086. DOI: 10.1200/JCO.2020.38.15_suppl.e15086

11.

Cheng G., Li M. Expression of Tim-3 in gastric cancer tissue and its relationship with prognosis. Int J. Clin. Exp. Pathol. 2015; 8 (8): 9452–7.

12.

Guo X.J., Lu J.C., Zeng H.Y., Zhou R., Sun Q.M., Yang G.H., Pei Y.Z., Meng X.L., Shen Y.H., Zhang P.F., Cai J.B., Huang P.X., Ke A.W., Shi Y.H., Zhou J., Fan J., Chen Y., Yang L.X., Shi G.M., Huang X.Y. CTLA-4 Synergizes with PD1/PD-L1 in the Inhibitory Tumor Microenvironment of Intrahepatic Cholangiocarcinoma. Front Immunol. 2021; 12: 705378. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.705378

13.

Мудров В.А. Алгоритмы статистического анализа количественных признаков в биомедицинских исследованиях с помощью пакета программ SPSS. Забайкальский медицинский вестник. 2020; 1: 140–50. [Mudrov VA. Statistical analysis algorithms of quantitative features in biomedical research using the SPSS software package. Zabajkal’skij medicinskij vestnik. 2020; 1: 140–50 (In Russian)]

14.

Lang T.A., Altman D.G. Basic statistical reporting for articles published in biomedical journals: the “Statistical analyses and methods in the published literature” or the SAMPL guidelines. Int J. Nurs Stud. 2015; 52 (1): 5–9. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ijnurstu.2014.09.006

15.

Wen, Y., Tang, F., Tu, C., Hornicek, F., Duan, Z., & Min, L. Immune checkpoints in osteosarcoma: Recent advances and therapeutic potential. Cancer Letters. 2022; 5 (8): 215887. DOI: https://doi.org/10.1016/j.canlet.2022.215887

16.

Bode H.F., Heikkinen A., Lundgren S., Kaprio J. Differences in DNA Methylation-Based Age Prediction Within Twin Pairs Discordant for Cancer. Twin Research and Human Genetics. 2022; 1 (4): 1–9. DOI: https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2020.08.009

17.

Bagbudar S., Karanlik H., Cabioglu N., Bayram A., Ibis K., Aydin E., Yavuz E., Onder S. Prognostic Implications of Immune Infiltrates in the Breast Cancer Microenvironment: The Role of Expressions of CTLA-4, PD-1, and LAG-3. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 2022; 30 (2): 99–107.

18.

19.

Baleeiro R.B., Bouwens C.J., Liu P., Di Gioia C., Dunmall L.S. MHC class II molecules on pancreatic cancer cells indicate a potential for neo-antigen-based immunotherapy. OncoImmunology. 2022; 11 (1): 2080329. DOI: https://doi.org/10.1080/2162402x2022.2080329

20.

Pyke R.M. Evolutionary pressure against MHC class II binding cancer mutations. Cell. 2018; 175 (2): 416–28. DOI: 10.1016/j.cell.2018.08.048

21.

Gertel S., Polachek A., Elkayam O. Lymphocyte activation gene-3 (LAG-3) regulatory T cells: An evolving biomarker for treatment response in autoimmune diseases. Autoimmunity Reviews. 2022; 21 (6): 103085. DOI: https://doi.org/10.1016/j.autrev.2022.103085

22.

Toor S. M. et al. Immune checkpoints in circulating and tumor-infiltrating CD4+ T cell subsets in colorectal cancer patients. Frontiers in immunology. 2019; 10: 2936.

23.

Tirier S.M., Mallm J.P., Steiger S., Poos A.M., Awwad M.S., Giesen N., Casiraghi N., Susak H., Bauer K., Baumann A., John L., Seckinger A., Hose D., Müller-Tidow C., Goldschmidt H., Stegle O., Hundemer M., Weinhold N., Raab M.S., Rippe K. Subclone-specific microenvironmental impact and drug response in refractory multiple myeloma revealed by single-cell transcriptomics. Nat Commun. 2021; 12 (1): 6960. DOI:1 https://doi.org/0.1038/s41467-021-26951-z

24.

Sun F., Guo Z.S., Gregory A.D., Shapiro S.D., Xiao G., Qu Z. Dual but not single PD-1 or TIM-3 blockade enhances oncolytic virotherapy in refractory lung cancer. J. Immunother Cancer. 2020; 8 (1): 000294. DOI: https://doi.org/10.1136/jitc-2019-000294

25.

Wang, J., Asch, A. S., Hamad, N., Weickhardt, A., Tomaszewska-Kiecana, M., Dlugosz-Danecka, M. A phase 1, open-label study of MGD013, a bispecific DART® molecule binding PD-1 and LAG-3 in patients with relapsed or refractory diffuse large B-cell lymphoma. Blood. 2022; 136: 21–2.

26.

Feng Y., Liu L., Li J., Huang J., Xie J.H., Menard L., Shi Y., Zhao X., Xie S., Zang W., Tan H. Systematic characterization of the tumor microenvironment in Chinese patients with hepatocellular carcinoma highlights intratumoral B-cells as a potential immunotherapy target. Oncol Rep. 2022; 47 (2): 38. DOI: https://doi.org/10.3892/or.2021.8249