Molekulyarnaya Meditsina (Molecular medicine)Molekulyarnaya Meditsina (Molecular medicine)Молекулярная медицина1728-29182499-9490Russkiy Vrach Publishing House63366710.29296/24999490-2024-03-05ReviewsОбзорыReview ArticleImmunohistochemical substantiation of the possibility of use electrochemical method whith using nanotechnological biosensors for assessing alkaline phosphatase activity in tissue colorectal carcinomaИммуногистохимическое обоснование возможности использования электрохимического метода с применением нанотехнологических биосенсоров для оценки активности щелочной фосфатазы в ткани колоректальной карциномыhttps://orcid.org/0000-0002-8646-0483BelkinAnton N.БелкинАнтон Николаевич
Russian Federation

senior lecturer at the Department of Pathological Anatomy with an autopsy course

старший преподаватель кафедры патологической анатомии с секционным курсом

belkinanton87@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-2861-4878FreyndHenrietta G.ФрейндГенриетта Герхардовна
Russian Federation

Head of the Department of Pathological Anatomy with an autopsy course, Doctor of Medical Sciences, Professor

заведующая кафедрой патологической анатомии с секционным курсом, доктор медицинских наук, профессор

gfreynd@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-3632-291XKochetovAnatoly G.КочетовАнатолий Глебович
Russian Federation

rector of the Institute, Professor

ректор Института, профессор

kochetov.lab@yandex.ruPerm State Medical University named after Academician E.A. Wagner Ministry of Health of the Russian FederationФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера» Минздрава РФInstitute of Laboratory Medicine, Leningradsky ProspektАНО ДПО «Институт лабораторной медицины»2406202422334392306202423062024Copyright ©; 2024, Russkiy Vrach Publishing HouseCopyright ©; 2024, ИД "Русский врач"2024Russkiy Vrach Publishing HouseИД "Русский врач"https://journals.eco-vector.com/1728-2918/article/view/633667

Introduction. Alkaline phosphatase (ALP) is an enzyme from the class of hydrolases, widely present in human tissues and organs. Intestinal ALP is one of the enzyme isoforms that is expressed in the mucous membrane throughout the intestine and is a marker of intestinal epithelial differentiation. It is known that the products of the chemical reaction between intestinal alkaline phosphate and a specific substrate, 1-naphthyl phosphate, have electrochemical activity. This makes it possible to evaluate the activity of the enzyme in biological tissues using the electrochemical method using nanotechnological biosensors.

The aim of the study. To evaluate the diagnostic significance of the electrochemical method for assessing alkaline phosphatase activity by comparing it with the results of histological and immunohistochemical studies in colorectal carcinoma.

Material and methods. A parallel electrochemical and morphological (histological and immunohistochemical with antibodies to intestinal alkaline phosphatase) study of material from colorectal carcinoma and the colon mucosa outside the tumor of 78 patients was carried out.

Results. In 70 patients, the current obtained from electrochemical study of tumor biopsies was significantly lower (49.2 nA (95% CI 41.3–88.9) than in biopsies of the intestinal mucosa outside the tumor (119.7 nA (95% CI 96.8–167.1), p<0.05). Histologically, the tumor tissue was represented by adenocarcinoma of varying degrees of differentiation. An immunohistochemical study revealed that the expression of intestinal ALP was absent in carcinoma cells, while in the epithelium of the colon mucosa outside the neoplasm, pronounced diffuse membrane expression of the enzyme was noted. In 8 patients, there was no association between the results of electrochemical and morphological studies due to the presence of non-tumor tissues in the material. An immunohistochemical study revealed that intestinal alkaline phosphatase can be expressed in immune cells and neurons of the submucosal nerve plexuses.

Conclusion. A comparison of the results of electrochemical, histological and immunohistochemical studies indicates that the electrochemical method has a high diagnostic value and can be used in screening for colorectal carcinoma.

Введение. Щелочная фосфатаза (ЩФ) – фермент из класса гидролаз, широко представленный в тканях и органах человека. Кишечная ЩФ – одна из изоформ фермента, которая экспрессируется в слизистой оболочке на всем протяжении кишечника и является маркером дифференцировки кишечного эпителия. Известно, что продукты химической реакции между кишечной ЩФ и специфическим субстратом – 1-нафтилфосфатом обладают электрохимической активностью. Это позволяет оценить активность фермента в биологических тканях с помощью электрохимического метода с применением нанотехнологических биосенсоров.

Цель исследования: оценить диагностическую значимость электрохимического метода оценки активности ЩФ путем сопоставления с результатами гистологического и иммуногистохимического (ИГХ) исследований при колоректальной карциноме (КРК).

Материал и методы. Проведено параллельное электрохимическое и морфологическое (гистологическое и ИГХ с антителами к кишечной ЩФ) исследование материала КРК и слизистой оболочки толстой кишки вне опухоли 78 пациентов.

Результаты. У 70 пациентов сила тока, полученная при электрохимическом исследовании биоптатов опухолей, была значительно ниже (49,2 нА (95% ДИ 41,3–88,9), чем в биоптатах слизистой оболочки кишки вне опухоли (119,7нА (95% ДИ 96,8–167,1), p<0,05). Гистологически ткань опухоли была представлена аденокарциномой различной степени дифференцировки. При ИГХ исследовании установлено, что экспрессия кишечной ЩФ отсутствовала в клетках карциномы, в то время как в эпителии слизистой оболочки толстой кишки вне новообразования отмечалась выраженная диффузная мембранная экспрессия фермента. У 8 пациентов отсутствовала ассоциация результатов электрохимического и морфологического исследований ввиду присутствия в материале тканей, не являющихся опухолью. При ИГХ исследовании было выявлено, что кишечная ЩФ может экспрессироваться в иммунных клетках и нейронах подслизистых нервных сплетений.

Заключение. Сопоставление результатов электрохимического, гистологического и ИГХ исследований свидетельствует о том, что электрохимический метод обладает высокой диагностической ценностью и может применяться при проведении скрининга КРК.

alkaline phosphatasecolorectal carcinomaelectrochemical methodimmunohistochemical methodbiosensorsщелочная фосфатазаколоректальная карциномаэлектрохимический методиммуногистохимический методбиосенсорыRawla P., Sunkara T., Barsouk A. Epidemiology of colorectal cancer: incidence, mortality, survival, and risk factors. Prz Gastroenterol. 2019; 14 (2): 89–103. DOI: 10.5114/pg.2018.81072National Cancer Institute. Surveillance, epidemiology, and end results program (SEER). http://seer.cancer.govMuginova S.V., Zhavoronkova A.M., Polyakov A.E., Shekhovtsova T.N. Application of alkaline phosphatases from different sources in pharmaceutical and clinical analysis for the determination of their cofactors; zinc and magnesium ions. Anal Sci. 2007; 23: 357–63. DOI: 10.2116/analsci.23.357Metwalli O.M., Mourand F.E. Studies on organ-specific alkaline phosphatases in relation to their diagnostic value. Z Ernahrung Swiss. 1980; 19: 154–8. DOI: 10.1007/BF02018779Molnár К., Vannay А., Szebeni В., Fanni Bánki N., Sziksz E., Cseh Á., Győrffy H., László Lakatos P., Papp M., Arató A., Veres G. Intestinal alkaline phosphatase in the colonic mucosa of children with inflammatory bowel disease World J. Gastroenterol. 2012; 18: 3254–9. DOI: 10.3748/wjg.v18.i25.3254Narisawa S., Huang L., Iwasaki A., Hasegawa H., Alpers D.H., Millán J.L. Accelerated fat absorption in intestinal alkaline phosphatase knockout mice. Mol. Cell. Biol. 2003; 23: 7525–30. DOI: 10.1128/MCB.23.21.7525-7530.2003Tuin A., Poelstra K., de Jager-Krikken A., Bok L., Raaben W., Velders M. P., Dijkstra G. Role of alkaline phosphatase in colitis in man and rats. Gut. 2009; 58 (3): 379–87. DOI: 10.1136/gut.2007.128868Akiba Y., Mizumori M., Guth P.H., Engel E., Kaunitz J.D. Duodenal brush border intestinal alkaline phosphatase activity affects bicarbonate secretion in rats. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2007; 293 (6): 1223–33. DOI: 10.1152/ajpgi.00313.2007Estaki M., DeCoffe D., Gibson D.L. Interplay between intestinal alkaline phosphatase, diet, gut microbes and immunity. World J. Gastroenterol. 2014; 20 (42): 15650–6. DOI: 10.3748/wjg.v20.i42.15650Chen K.T., Malo M.S., Moss A.K., Zeller S., Johnson P., Ebrahimi F., Mostafa G., Alam S.N., Ramasamy S., Warren H.S., Hohmann E.L., Hodin R.A. Identification of specific targets for the gut mucosal defense factor intestinal alkaline phosphatase. Am. J. Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2010; 299 (2): 467–75. DOI: 10.1152/ajpgi.00364.2009Moss D.W. Alkaline phosphatase isoenzymes. Clin Chem. 1982; 28 (10): 2007–16.Wilkers J.M., Gamer A., Peters T.J. Studies on the localization and properties of rat duodenal HCO3-ATPase with special relation to alkaline phosphatase. Biochim Biophys Acta. 1987; 924 (1): 159–66. DOI: 10.1016/0304-4165(87)90083-3Singh S.B., Lin H.C. Role of Intestinal alkaline phosphatase in innate immunity. Biomolecules. 2021; 11 (12): 1784. DOI: 10.3390/biom11121784Hinnebusch B.F., Siddique A., Henderson J.W., Malo M.S., Zhang W., Athaide C.P., Abedrapo M.A., Chen X., Yang W.V., Hodin R.A. Enterocyte differentiation marker intestinal alkaline phosphatase is a target gene of the gut-enriched Kruppel-like factor. Am. J. Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2004; 286 (1): 23–30. DOI: 10.1152/ajpgi.00203.2003Barnard J.A., Warwick G. Butyrate rapidly induces growth inhibition and differentiation in HT-29 cells. Cell Growth Differ. 1993; 4 (6): 495–501.Kabat E. A., Furth J. A histochemical study of distribution of alkaline phosphatase in various normal and neoplastic tissues. Am. J. Pathol. 1941; 17 (3): 303–18.Li M., Jiang F., Xue L., Peng C., Shi Z., Zhang Z., Li J., Pan Y., Wang X., Feng C., Qiao D., Chen Z., Luo Q., Chen X. Recent Progress in Biosensors for Detection of Tumor Biomarkers. Molecules. 2022; 27 (21): 7327. DOI: 10.3390/molecules27217327Верник С., Белкин А.Н., Фрейнд Г.Г., Кацнельсон М.Д., Шахам-Диаманд Й., Лицын С.Н., Четвертных В.А. Морфологическое обоснование возможности использования электрохимических биосенсоров в диагностике колоректального рака. Пермский медицинский журнал. 2012; 5: 5–7. [Vernik S., Belkin A.N., Freynd G.G., Katsnelson M.D., Shaham-Diamand Y., Litsyn S.N., Chetvertnykh V.A. Morphological substantiation of the possibility of using electrochemical biosensors in the diagnosis of colorectal cancer. Perm Medical Journal. 2012; 5: 5–7 (in Russian)].Шелудько В.С. Девяткова Г.И. Теоретические основы медицинской статистики (статистические методы обработки и анализа материалов научно-исследовательских работ): методические рекомендации, 3-е изд., исправленное и дополненное. Пермь: ФГБОУ ВО «ПГМУ имени академика Е.А. Вагнера» Минздрава России; 2016; 80. [Sheludko V.S. Devyatkova G.I. Theoretical foundations of medical statistics (statistical methods of processing and analysis of research materials): methodological recommendations, 3rd ed., corrected and expanded. Perm: Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education “Perm State Medical University named after Academician E.A. Wagner» of the Russian Ministry of Health; 2016; 80 (in Russian)].Ланг Т.А., Сесик М. Описание статистики в медицине. Руководство для авторов, редакторов и рецензентов. М.: Практическая медицина, 2011; 480. [Lang T.A., Sesik M. Description of statistics in medicine. A guide for authors, editors and reviewers. M.: Practical Medicine, 2011; 480 (in Russian)].Song Z.M., Brookes S.J., Costa M. Characterization of alkaline phosphatase-reactive neurons in the guinea-pig small intestine. Neuroscience. 1994; 63 (40): 1153–67. DOI: 10.1016/0306-4522(94)90580-0Stewart C. Leukocyte alkaline phosphatase in myeloid maturation. Pathol. 1974; 6 (3): 287–93. DOI: 10.3109/00313027409068999Kumar V., Abbas A., Aster J. Robbins basic pathology 9th edition. Saunders, 2012; 928.