Introduction. Studying the effect of the nitric oxide (II) donor, S-nitrosoglutathione, on the relative amount of selectin P in HUVEC cell lysates in vitro may contribute to fundamental understanding of the effect of the nitric oxide system on the adhesive function of the endothelium.
Objective: To evaluate the effect of nitric oxide (II) donor S-nitrosoglutathione (GSNO) on the activity of mitochondrial endotheliocyte oxidoreductases, the relative amount of selectin P and nitric oxide metabolites in HUVEC cell lysates, and the absolute amount of sP-selectin (soluble) in a conditioned medium.
Material and methods. The mitochondrial dehydrogenase activity of HUVEC cells was evaluated using an MTT test. The relative amount of P-selectin in endotheliocyte lysates was determined by the Western blot method, the absolute amount of the soluble selectin fragment (sP) in the cellular supernatant was determined by the sandwich ELISA method, the level of persistent nitric oxide (II) metabolites was determined by the method based on the reduction of nitrates to nitrites in the presence of vanadium chloride and subsequent spectrophotometric detection using Griss reagent.
Results. The study found that upon joint incubation of the primary HUVEC cell line with nitrosoglutathione solutions in various concentrations, the development of nitrosative stress is noted, as evidenced by an increase in its markers – persistent nitric oxide (II) metabolites in cell lysates. Under conditions of nitrosative stress, there is a decrease in the activity of mitochondrial endotheliocyte oxidoreductases, which may be due to the negative effects of excess nitric oxide or its toxic products. With a three-hour exposure of nitrosoglutathione to endotheliocytes at a low concentration of 10 mkM, there is a statistically significant increase in the relative amount of P-selectin; at high concentrations of 100-500 mkM, there is a statistically significant decrease in the relative amount of P-selectin.
Conclusion. The results obtained in this study indicate the effect of nitric oxide (II) on the functional response of the endothelium by quantifying the cell adhesion molecule P-selectin.
Введение. Изучение влияния донатора оксида азота (II), S-нитрозоглутатиона, на относительное количество Р-селектина в лизатах клетках HUVEC (human umbilical vein endothelial cells) in vitro может внести вклад в фундаментальные представления о влиянии системы оксида азота на адгезивную функцию эндотелия.
Цель исследования. Оценить влияние донатора оксида азота (II) S-нитрозоглутатиона (GSNO) на активность митохондриальных оксидоредуктаз эндотелиоцитов, относительное количество Р-селектина и метаболитов оксида азота в лизатах клеток HUVEC, абсолютное количество sР- селектина (soluble) в кондиционной среде.
Материал и методы. Активность митохондриальных дегидрогеназ клеток HUVEC оценивали с использованием МТТ-теста. Относительное количество Р-селектина в лизатах эндотелиоцитов определяли методом вестерн-блотт, абсолютное количество растворимого фрагмента селектина (sР) в клеточном супернатанте определяли сэндвич-методом иммуноферментного анализа (ИФА), уровень стойких метаболитов оксида азота (II) определяли методом, основанным на восстановлении нитратов до нитритов в присутствии хлористого ванадия и последующей спектрофотометрической детекцией с использованием реактива Грисса.
Результаты. В исследовании было установлено, что при совместной инкубации первичной линии клеток HUVEC с растворами нитрозоглутатиона в различных концентрациях отмечается развитие нитрозативного стресса, о чем свидетельствует повышение его маркеров – стойких метаболитов оксида азота (II) в лизатах клеток. В условиях нитрозативного стресса отмечается снижение активности митохондриальных оксидоредуктаз эндотелиоцитов, что может быть связано с негативным влиянием избытка оксида азота или его токсических продуктов. При трехчасовом воздействии нитрозоглутатиона на эндотелиоциты в низкой концентрации 10 мкМ отмечается статистически значимое повышение относительного количества Р-селектина; при высоких концентрациях – 100–500 мкМ отмечается статистически значимое снижение относительного количества Р-селектина.
Заключение. Полученные в данном исследовании результаты свидетельствуют о влиянии оксида азота (II) на функциональный ответ эндотелия путем количественного изменения молекулы клеточной адгезии P-селектина.