Laboratory diagnosis of trade animals’ trichinosis

Full Text

Введение

В последние время наблюдается усиление эпидемической напряженности по гельминтозоонозам на территории России, включая страны СНГ. Данные, полученные в результате анализа эпизоотической и эпидемиологической ситуации, свидетельствует о повышении роли диких промысловых и экзотических животных в распространении таких зоонозов, как трихинеллез, спарганоз, парагонимоз, аляриоз и другие [1-4].

Трихинеллез в некоторых регионах оценивается как природно-очаговая инвазия, что связано в основном с употреблением населением мяса диких животных, добытых на охотах, экзотических блюд из барсучатины, волчатины и других. В соответствии с СаНПиНом «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации» (Москва, 2003) выявление личинок трихинелл в мышечной ткани животных проводится методами компрессорной трихинеллоскопии и переваривания мышечной ткани в искусственном желудочном соке. Низкая производительность, невысокая эффективность диагностики, утомляемость исследователей при компрессорной диагностике являются основанием для поиска новых, более эффективных методов контроля на трихинеллез. В настоящее время высокопроизводительным методом диагностики трихинеллеза является искусственное переваривание в желудочном соке, с использованием аппаратов типа АВТ [5-7]. Метод искусственного пептолиза основан на растворении в искусственном желудочном соке мышечной ткани и обнаружении в осадке личинок трихинелл. Его проведение регламентировано «Методикой лабораторной диагностики трихинеллеза», утвержденной Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 16.10.86 г. Современные аппараты для выделения личинок трихинелл («Гельми», «Гастрос», «Рубикон») используются в ветеринарных лабораториях мясокомбинатов и рынках. Время диагностирования в приборах сокращено до 35 минут.

Цель исследований - отработать и рекомендовать ветеринарным врачам-диагностам оптимальные интервалы времени искусственного переваривания на аппаратах АВТ мышечных проб от охотничье-промысловых животных для диагностики трихинеллеза.

Материалы и методы

В процессе исследуемого мониторинга на трихинеллез в Центральном регионе России были отобраны естественно инвазированные туши животных. Зараженных животных хранили при отрицательной температуре (-5°C) в климатической камере до проведения детальных исследований. Для приготовления мясного фарша из тушек использовали диафрагму, массетер, мышцы сгибателей и разгибателей конечностей, язык. В исследованиях использовались замороженные, а затем охлажденные пробы мышц. Для получения качественного мясного фарша из мышечной ткани удаляли жир и соединительную ткань. В исследовательской работе использовались автоматизированные диагностические аппараты по выделению личинок трихинелл типа АВТ - «Рубикон» и «Гельми». На указанных приборах проведены трихинеллоскопические исследования различных видов проб мышечной ткани охотничье-промысловых животных. При исследовании туши из регламентированных групп мышц брали по 10-14 г мышечной ткани и формировали групповую пробу массой 50±0,5 г, в которой полностью отсутствовали фасции, кости, жир и сухожилия. Пробы мышц пропускали через мясорубку с диаметром отверстий на выходе 4 мм. Периоды работы приборов задавались в ручном режиме с интервалом в 10 минут. Для получения более чистого осадка из мышц на мешалки крепили с помощью вязальной проволоки d-1,5 мм мешочки из мельничного газа, куда помещалась навеска мясного фарша. В опытах по проведению искусственного пептолиза использовался отечественный пепсин производством фирмы ООО «Шако» Ростовской области [8]. Навеска фермента для приготовления искусственного желудочного сока составляла 3 г на 1 л водопроводной воды. Соляной кислоты в составе желудочного сока было 10 мл. Температура переваривающего сока соответствовала 41-42°С [5; 7-9]. Реакторы заправляли свежеприготовленным искусственным соком. Для пептолиза 50 г мясного фарша каждый раз готовили 1 л желудочного сока по прописи. Личинки трихинелл появлялись в осадке достаточно быстро, активно двигаясь, сгибаясь и разгибаясь. Погибшие личинки раскручивались и принимали серповидную форму. За учетный период автоматизированного переваривания должно было подвергнутся искусственному пептолизу от 40 до 70% мышечной массы исследуемой пробы. По окончании заданного цикла пептолиза (каждые 10 минут) 5 мл осадка сливали, отстаивали, микроскопировали, проводили подсчет личинок. Учет результатов проводили по отобранным пробам мышц из тушек кабанов, волков, лисиц, енотовидных собак и куниц. Оптимально рекомендуемый период переваривания мышечных проб основывался на интенсивности выделения личинок трихинелл из мышечного фарша за определенный период времени и переваривания 40-50% объема массы мышечной пробы.

Результаты исследований и обсуждения

Для мышечных проб, отобранных от диких промысловых животных, при диагностике на трихинеллез характерно высыхание, так как поблизости, как правило, не бывает ветеринарных пунктов с диагностической лабораторией и после разделки и заготовки трофеев в охотничьих угодьях тратится значительное время на доставку их на стол ветеринарно-санитарным экспертам.

Судя по полученным в результате опытов графикам (рис. 1-6), пробы исследуемых мышц вначале насыщаются искусственным желудочным соком, помещенным в контейнеры аппаратов. В это время происходит увеличение навески мышечной ткани (см. верхний красный график). В мышечных пробах от кабанов, лисиц, куниц увеличение массы навески происходило до 40 минут, от волков до 50 минут и от енотовидных собак до 60 минут. Далее происходило быстрое ферментирование ткани и снижение массы навески исследуемых проб. В контроле же, представленном мышечной тканью экспериментально инвазированных крыс возбудителем T. spiralis (лабораторный изолят), насыщение мышечной пробы не происходило, а переваривание мышц в искусственном желудочном соке начиналось сразу. Во время измерения опытных навесок мышечных проб от диких животных было отмечено, что личинки трихинелл интенсивно выделялись при наибольшем насыщении навески искусственным соком и чуть позже. Видимо, трихинеллы после активации могли свободно выходить в переваривающий осадок после увеличения массы диагностической пробы. Полученные данные по искусственному пептолизу в аппаратах типа АВТ согласуются с данными Л.А. Гребенкиной (2008), которая одна из первых апробировала перевариваемость мышечных тканей от кабанов, мышей, медведей, лисиц, волков и енотовидных собак [10].

Рисунок 1 – Динамика изменения навески фарша (ножки диафрагмы, диафрагма) и интенсивность выделения личинок капсулообразующих трихинелл из мышечной ткани естественно инвазированной тушки кабана. Интенсивность инвазии (ИИ) = 12 лич./г диафрагмы

Рисунок 2 – Динамика изменения навески фарша (диафрагма, мышцы передней и задней конечностей) и интенсивность выделения личинок капсулообразующих трихинелл из мышечной ткани естественно инвазированных тушек волков. ИИ = 19 и 27 лич./г диафрагмы (результаты двух опытов)

Рисунок 3 – Динамика изменения навески фарша (диафрагма, мышцы передней и задней конечностей) и интенсивность выделения личинок капсулообразующих трихинелл из мышечной ткани естественно инвазированных тушек обыкновенных лисиц. ИИ = 20, 24, 26, 21 лич./г диафрагмы (результаты 4 опытов)

Рисунок 4 – Динамика изменения навески фарша (диафрагма, мышцы передней и задней конечностей) и интенсивность выделения личинок капсулообразующих трихинелл из мышечной ткани естественно инвазированных тушек енотовидных собак. ИИ = 54, 63 лич./г диафрагмы (результаты 2 опытов)

Рисунок 5 – Динамика изменения навески фарша (диафрагма, язык, мышцы шеи, передней и задней конечностей) и интенсивность выделения личинок капсулообразующих трихинелл из мышечной ткани естественно инвазированных тушек куниц. ИИ = 52, 63, 49 лич./г диафрагмы (результаты 3 опытов)

Рисунок 6 – Динамика изменения навески фарша (мышцы головы, шеи, межреберные, мышцы передней и задней конечностей) и интенсивность выделения личинок T. spiralis трихинелл (лабораторный изолят) из мышечной ткани тушки лабораторной крысы (ИИ = 138 лич./г диафрагмы)

Таким образом, в результате серии поставленных опытов отработан оптимальный период времени для трихинеллоскопического контроля проб мышечной ткани от диких животных автоматизированным методом на аппаратах типа АВТ. Рекомендуемые режимы работы приборов при диагностике мышц промысловых животных на трихинеллез представлены в табл. 1. С учетом вышеизложенного, актуальным является дальнейшее изучение метода автоматизированной диагностики инвазированных тушек промысловых млекопитающих личинками других нематод, спарганусами, мезоцеркариями трематоды Alaria alata на территории Центральной России, так как дикие животные, особенно кабаны, животные семейства куньих [1-4; 12], являются объектами спортивно-промысловой охоты и зараженное мясо может представлять потенциальную угрозу для здоровья человека.

Таблица 1 - Оптимальные режимы работы аппаратов типа АВТ при диагностике мышечной ткани промысловых животных на трихинеллез

About the authors

Oleg Nikolayevich Andreyanov

Author for correspondence.
Email: 1980oleg@mail.ru

doctor of veterinary sciences, senior researcher of Parasitic Zoonosis Laboratory

References

Supplementary files

Supplementary Files

Action

1. JATS XML

Download

2. Figure 1 - Dynamics of minced meat weight change (diaphragm legs, diaphragm) and intensity of release of capsule-forming trichinella larvae from muscle tissue of naturally infested boar carcass. Intensity of infestation (II) = 12 larvae/g diaphragm

Download (24KB)

Indexing metadata

3. Figure 2 - Dynamics of minced meat weight change (diaphragm, forelimb and hindlimb muscles) and intensity of excretion of capsule-forming trichinella larvae from muscle tissue of naturally infected wolf carcasses. AI = 19 and 27 larvae/g diaphragm (results of two experiments)

Download (23KB)

Indexing metadata

4. Figure 3 - Dynamics of minced meat weight change (diaphragm, forelimb and hindlimb muscles) and intensity of excretion of capsule-forming trichinella larvae from muscle tissue of naturally infected carcasses of common foxes. AI = 20, 24, 26, 21 larvae/g diaphragm (results of 4 experiments)

Download (27KB)

Indexing metadata

5. Figure 4 - Dynamics of minced meat weight change (diaphragm, forelimb and hindlimb muscles) and intensity of excretion of capsule-forming trichinella larvae from muscle tissue of naturally infected raccoon dogs carcasses. II = 54, 63 larvae/g diaphragm (results of 2 experiments)

Download (25KB)

Indexing metadata

6. Figure 5 - Dynamics of mince weight changes (diaphragm, tongue, neck muscles, forelimbs and hindlimbs) and intensity of excretion of capsule-forming trichinella larvae from muscle tissue of naturally infected marten carcasses. II = 52, 63, 49 larvae/g diaphragm (results of 3 experiments)

Download (23KB)

Indexing metadata

7. Figure 6 - Dynamics of mince weight changes (head, neck, intercostal, forelimb, and hindlimb muscles) and intensity of T. spiralis trichinella larvae release (laboratory isolate) from muscle tissue of laboratory rat carcass (II = 138 larvae/g diaphragm)

Download (19KB)

Indexing metadata