Description of methods for the detection of Helicobacter pylori in children with chronic gastroduodenal pathology

全文:

Одним из основных этиологических факторов возникновения и развития хронической гастродуоденальной патологии у детей в настоящее время является инфекция Helicobacter pylori (H. pylori) [1-5]: у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки она встречается в 87% случаев, а у детей с гастродуоденитом - в 42% [6, 7]. H. pylori обнаруживают у детей на всех континентах, во всех обследуемых популяциях. Общая инфицированность детского населения земного шара достигает 60% и варьирует в различных регионах планеты [8]. Поэтому разработка алгоритмов ранней и точной диагностики H. pylori является наиболее актуальной. Среди всего многообразия диагностических тестов, разработанных для выявления H. pylori, выделяют несколько групп - инвазивные и неинвазивные, прямые е-mail: r868@mail.ru и косвенные. Инвазивные методы основаны на взятии биоптатов при проведении эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС). К ним относятся бактериологический (культуральный), морфологический (гистологический и цитологический) и биохимический методы, а также полимеразная цепная реакция (ПЦР) биоптатов слизистой оболочки (СО) желудка. Неинвазивные тесты не требуют проведения ЭГДС, материалом для исследования являются кровь, кал, моча, слюна, выдыхаемый пациентом воздух. К ним относятся серологические и иммунологические реакции, ПЦР, исследование кала, дыхательные тесты [9-11]. Прямые методы основаны на непосредственном выявлении микроорганизма в биоптате СО желудка, косвенные - регистрируют не саму бактерию, а последствия ее персистирования в организме [10, 12]. «Золотым стандартом» диагностики H. pylori является морфологическое исследование биоптата СО желудка, позволяющее обнаружить бактерии и определить их расположение, наблюдать взаимоотношение с тканями «хозяина», оценить характер патологического процесса в СО, наличие воспаления, атрофии, метаплазии [13]. До настоящего времени не разработано универсального способа диагностики H. pylori. Каждый метод исследования имеет свои преимущества и недостатки, они отличаются по чувствительности и специфичности. Во время проведения многочисленных сравнительных исследований установлено, что результаты различных методов не всегда идентичны, следовательно, для более точной первичной диагностики инфекции необходимо использовать как минимум два теста [10], один из которых - определение H. pylori в биоптате СО желудка [14]. материал и методы Под наблюдением находился 151 ребенок в возрасте от 7 до 17 лет, в том числе 23 пациента с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБ ДПК), 97 больных хроническим гастродуоденитом (ХГД) и 31 условно-здоровых детей того же возраста (группа контроля). Пациенты с ХГД, вошедшие в исследование, были госпитализированы в периоде обострения заболевания. Большинство детей с ЯБ ДПК (87%) поступили в стационар для получения противорецидивного лечения, у 3 пациентов (13%) заболевание было выявлено впервые. Все больные были подвергнуты общепринятым клинико-инструментальным и специальным методам исследования. Специальные тесты включали методы выявление H. pylori у пациентов: дыхательный Хелик-тест,разработанный ООО«АМА» (Россия), цитологический метод исследования и ПЦР биоптатов с детекцией ureC гена микроорганизма. Мазки-отпечатки окрашивались по Романовскому - Гимзе, степень обсемененности СО желудка H.pylori оценивали по критериям Л.И. Аруин с соавт. (1998) [15]. Для молекулярно-генетического анализа использовали образцы ДНК пациентов, выделенных сорбентным методом в соответствии с прилагаемой инструкцией с помощью комплекта реагентов для выделения ДНК «Проба-ГС» ООО «НПО ДНК-Технология» (Россия). Для оценки результатов диагностических тестов на определение H. pylori в качестве «золотого стандарта» был принят цитологический метод. Расчет ценности диагностических методов исследования Н. pylori проводили по формулам: - Se = ИП/(ИП + ЛО), где Se - чувствительность, ИП - истинно положительный, ЛО - ложно отрицательный; - Sp = ИО/(ИО + ЛО), где Sp - специфичность, ИО - истинно отрицательный; - Gt = (ИП + ИО)/(ИП + ИО), где Gt - общая точность; - Вероятность хеликобактериоза при « + » результате = ИП/(ИП+ЛП); - Вероятность хеликобактериоза при «-» результате = ЛО/(ЛО+ИО). Статистическую обработку, применяемую для оценки достоверности результатов, проводили при помощи программных пакетов Microsoft Excel 2003, BIOSTATISTICA и «GraphPad InStat». Для оценки связи между признаками, имеющими ненормальное распределение, применяли коэффициент ранговой корреляции Спирмена (RR), для параметрических данных - и критерий Пирсона. Для всех относительных величин были найдены ошибки репрезентативности и 95,5% вероятность безошибочного прогноза. Сравнительный анализ основывался на определении статистической значимости различий показателей по F-критерию Фишера. Критический уровень значимости (p) при проверке статистических гипотез в исследовании принимали равным 0,05. результаты и обсуждение При анализе данных, полученных в результате верификации инфекции H. pylori с помощью дыхательного Хелик-теста, цитологического метода и ПЦР, выявлено, что Н. pylori являлся этиологическим фактором заболеваний желудка и ДПК у 83,9% обследованных больных (у 110 из 131 пациентов): у 100% больных, страдающих ЯБ ДПК, и 80,5% - ХГД. Распространенность хеликобактериоза у детей с хронической патологией гастродуоденальной области в г. Казани находилась в доверительном интервале 73,6% - 94,2% (р<0,05), а у пациентов с ХГД - 66% - 95% (р<0,05), что соответствует литературным данным [12, 16, 17]. При формировании группы контроля нами были выявлены 6 пациентов (19%), у которых при отсутствии хронической гастродуоденальной патологии в анамнезе и воспалительных изменений СО желудка при цитологическом исследовании в настоящее время, было выявлено бессимптомное персистирование H. pylori [18-20]. При анализе специфических эндоскопических признаков хеликобактерной инфекции 100% чувствительность и специфичность была подтверждена при обнаружении эрозий гастродуоденальной области и ЯБ ДПК. Н. pylori был выявлен у 86,4% пациентов с гипертрофическим гастродуоденитом, у 36,8% из них при ЭГДС была обнаружена картина «булыжной мостовой», при которых Н. pylori выявлялся в 100% случаев. Сравнительный анализ данных, полученных при диагностике хеликобактериоза, показал, что наибольшее количество ИП результатов выявлено при исследовании с помощью дыхательного теста (ИП = 110), меньше - при диагностике ПЦР (ИП = 103). При исследовании с помощью ПЦР было обнаружено наибольшее число ИО результатов ( ИО = 31), в отличие от Хелик-теста (ИО = 25) (табл. 1). ЛП данные чаще всего были получены при исследовании дыхательным тестом (ЛП = 21), реже при ПЦР (ЛП = 10). При диагностике сравниваемыми методами было выявлено большое количество ЛО ответов (при применении Хелик-теста ЛО = 6, при ПЦР ЛО = 7, соответственно). Таким образом, дыхательный Хелик-тест и ПЦР при диагностике инфекции H. pylori показали одинаково высокую Se (94,8% и 93,6%), но низкую Sp (80,6% и 79,5%) и высокую вероятность хели-кобактериоза при отрицательных результатах методов (19,4% и 18,4%). Было выявлено, что общая точность и прогностическая ценность положительного ответа при ПЦР (88,7% и 91,2%) выше, чем Хелик-теста (83,3% и 84%) (табл. 2). Таблица 1. количество истинно положительных (ип), истинно отрицательных (ио) и ложно отрицательных (ло) результатов при диагностике хеликобактериоза различными методами Результат Хелик-тест ПЦР-диагностика Хелик-тест + ПЦР «+» «-» «+» «-» «+» «-» Н. pylori «+» ИП = 110 ЛО = 6 ИП = 103 ЛО = 7 ИП = 116 ЛО = 2 Н. pylori «-» ЛП = 21 ИО = 25 ЛП = 10 ИО = 31 ЛП = 4 ИО = 29 Таблица 2. Характеристика методов диагностики Н. ру/оп-инфекции при хронической гастродуоденальной патологии у детей Показатели Хелик-тест ПЦР Хелик-тест + ПЦР Se 94,8% 93,6% 98,3% Sp 80,6% 79,5% 93,5% Вероятность хеликобактериоза при положительном результате 84% 91,2% 96,6% Вероятность хеликобактериоза при отрицательном результате 9,4% 18,4% 6,4% Общая точность 83,3% 88,7% 96% В связи с выявлением низкой Sp (Хелик-тест = 80,6%, ПЦР = 79,5%) и высокой вероятности H. ру/ог/-инфекции при отрицательных результатах методов (Хелик-тест = 19,4%, ПЦР = 18,4%) было решено оценить диагностическую ценность тестов при их комбинации. Сравнительный анализ выявил, что ИП результаты при диагностике с помощью комбинации методов обнаружены у 116 пациентов. Это выше чем при верификации инфекции с помощью Хелик-теста (ИП = 110) и ПЦР (ИП = 103). При исследовании двумя методами было выявлено меньше ЛО (2) и ЛП (4) данных, в отличие от диагностики с помощью дыхательного теста (ЛО = 6, ЛП = 21) и ПЦР (ЛО = 7, ЛП = 10). Анализ диагностической ценности комбинации Хелик-теста и ПЦР при верификации инфекции H. ру/ог/ показал более высокую Se (98,3%), Sp (93,5%), общую точность (96%), а также вероятность хеликобактериоза при положительном результате (96,6%) и низкую вероятность при отрицательном результате (6,4%) методов. Поэтому для первичной диагностики инфекции H. ру/ог/ лучше использовать комбинацию тестов (Хелик-тест и ПЦР биоптатов СО желудка), что уменьшит долю ЛП и ЛО результатов.

作者简介

R. Faizullina

Kazan State Medical University; Kazan (Volga region) Federal University

E. Abdullina

Kazan State Medical University

I. Akhmetov

Kazan State Medical University

参考

补充文件