EVALUATION OF VIBILITY OF EMBRYOS AFTER VITRIFICATION

详细

全文:

Витрификация эмбрионов млекопитающих, в частности человека, на сегодняшний день является перспективным методом для сохранения генетического материала и успешной приживляемости размороженных эмбрионов после трансплантации [1, 2]. В связи с этим разработка оптимального метода витрификации эмбрионов на модели млекопитающих актуальна как для репродуктивной медицины, так и для животноводства. Для исследования отобрали 50 ооцитов с хорошей морфологией категории А и разной степенью зрелости. После процедуры дозревания (IVM) их подвергли оплодотворению in vitro с помощью семени крупного рогатого скота (КРС). Витрификацию эмбрионов осуществляли в средах с разными криопротекторами в несколько этапов. После хранения в криобанке опытные образцы разморозили и провели как морфологическую оценку жизнеспособности, так и их флуоресцентный анализ при помощи Hoechst 33342, окрашивающий ДНК клеточного ядра, и специального кита для мертвых/апопто-тических клеток (PI/Alexa Fluor 488 Annexin, Molecular Probes). В результате оплодотворения in vitro получили 32 эмбриона (64,0%). Морфологический анализ эмбрионов после витрификации показал, что у 27 эмбрионов (86.4%) морфология схожа с нативными. Оценка эмбрионов КРС на апоптоз (Annexin) показала, что доля дегенеративных эмбрионов, окрашенных в зеленый цвет, составила 13.6% (5/32). Что не противоречит данным ни морфологического анализа, ни визуализированное Hoechst начало фрагментации ядер бластомеров, характерное для апоптоза. Отсутствие окраски бластомеров PI показало, что целостность блестящей оболочки после витрифика-ции не нарушилась. Таким образом, использованный в работе метод ви-трификации и анализ жизнеспособности эмбрионов млекопитающих при помощи флуоресцентных красителей PI, Annexin и Hoechst могут успешно использоваться в программах вспомогательных репродуктивных технологий репродуктивной медицины.