Gene expression under control of regulatory elements of thermal shock gene of drozophyla in transgenic larvae germ of loach Misgurnus fossilis L.

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

The efficiency of transient expression of lacZ and gfp genesreporters under control of two different promoter elements of drozophyla hsp70 thermal shochk gene in transgeneic larva of Fo generation loach Misgurnus fossilis L. were studied. The expression of genes in early larva and in the prelarval stage was mosaic and depended upon the amount of genetic material introduced.

At the same time gene expression did not depend upon external tempreture increase, i.e. it appeared without thermal shock.

In 2-3 day larva the efficiency of transient expression was maximal and reached 100% in separate experimental series. Thus, regulatory elements of drozophula thermal shock gene are capable to provide constitutional expression of gene-reporter in loach larva.

Full Text

Введение

В последние годы появилось множество работ по получению линий трансгенных рыб с экспрессирующимися репортерными генами, находящимися под контролем гетерологичных регуляторных элементов. Для быстрого анализа различий в экспрессии генов с регуляторными элементами различной структуры довольно часто используют транзиентную экспрессию трансгенов у FO-поколения рыб [1-4]. Этот метод, несмотря на некоторые недостатки, может быть полезен для получения информации об уровнях и характере экспрессии трансгена в зависимости от индуцибельности и тканеспецифичности промотора.

Удобную модель для тестирования экспрессии чужеродных генов представляет собой вьюн Misgurnus fossilis L. Легкость содержания [отсутствие необходимости кормления взрослых особей) и получения половых продуктов, сравнительно большие размеры икринок и прозрачные оболочки, относительно короткая продолжительность эмбриогенеза способствуют использованию его в экспериментах по исследованию функционирования введенных генов [5-7].

Белки теплового шока [ТШ) вовлечены во многие физиологические и патологические процессы организма и играют центральную роль в защите и репарации клеток под воздействием стресса [тепловой, холодовой шок, ультразвук, тяжелые металлы и др.) [8]. Рядом исследователей показано, что гетерологичные промоторы генов ТШ могут обеспечивать индуцибельную экспрессию маркерных генов в трансгенных организмах и культуре клеток различных видов животных [9-14].

В данной работе репортерные гены lacZ и gfp, находящиеся под контролем двух разных промоторов гена ТШ дрозофилы hsp70, инъецировали в оплодотворенные яйцеклетки вьюна с целью анализа уровней экспрессии трансгенов в зависимости от структуры промоторов, температуры окружающей среды, концентрации введенного генетического материала и стадии развития зародышей.

Материалы и методы

Половозрелых вьюнов Misgurnus fossilis L., принадлежащих к семейству вьюнов Cobitidae, отряду карпообразных Cypriniformes, надотряду костистых рыб Teleostei, отлавливали в природе [в Рязанской обл.) в декабре месяце. Самцов и самок содержали раздельно в холодильнике при температуре 4-6°С. Зрелую икру получали через 40-42 часа после инъекций самке хорионического гонадотропина в дозе 100 МЕ и осеменяли суспензией спермы [15]. Через 20-80 мин после оплодотворения и вплоть до первого деления дробления под бластодиск через желток со стороны вегетативного полюса икринки инъецировали 10-20 нл водного раствора, содержащего рекомбинантную ДНК в концентрации 20-30 нг/мкл. Инъекцию проводили с помощью микроинъектора фирмы «Эппендорф» стеклянной микроиглой с диаметром кончика 12-14 мкм. Общее количество генетического материала варьировало, от 0,2 нг до 1,5 нг на икринку. Для инъекций использовали 2 различных плазмиды, одна из которых содержала ген b-галактозидазы E. coli (lacZ), находящийся под промотором гена hsp70 дрозофилы (pD88), у которого 5¢-нетранскрибируемая область содержит 88 пар нуклеотидов, прилегающих непосредственно к точке старта транскрипции [16] [любезно предоставлена профессором В.А. Гвоздевым), вторая репортерный ген зеленого флуоресцентного белка (gfp), находящийся под промотором гена hsp70 дрозофилы (pHLP), у которого 5¢-нетранскрибируемая область содержит 98 пар нуклеотидов. Икринки каждой серии инъекций получены от одной пары родителей. Зародышей инкубировали в отстойной воде при комнатной температуре.

Гистохимическую активность b-галактозидазы определяли с помощью субстрата X-Gal по методу, описанному ранее [17, 18], с добавлением хлороквина для блокирования эндогенной b-галактозидазной активности: зародышей фиксировали 2,5%-м глютаральдегидом, отмывали фосфатносолевым буфером (PBS) и инкубировали 30 мин в растворе следующего состава: 5 мМ К3Fe(CN)6, 5 мМ К4Fe(CN)6H2O, 2 мМ MgCl2, 0,2% Тритон X-100, 150 мкг/мл хлороквина на PBS (рН=7,4-7,6). После этого добавляли X-Gal до конечной концентрации 0,4 мг/мл и проводили окрашивание в течение суток при 35°С. Эмбрионы отмывали в PBS, переносили в 30% сахарозу на PBS, содержащий азид натрия. Окрашенные эмбрионы подсчитывали и фотографировали.

Количественный анализ b-галактозидазной активности в зародышах вьюна определяли по методу, описанному ранее [19], с некоторыми модификациями. Зародышей, по 5 штук, помещали в пробирки типа «Эппендорф» и промывали буфером С-39 следующего состава: 3,2 mM NaH2PO4´2H2O, 4,2 mM NaHCO3, 21 mM КCl, 65 mM NaCl. Буфер С-39 тщательно отбирали, добавляли 200 мкл буфера Z (60 mM Na2HPO4´12H2O, 40 mM NaH2PO4´2H2O, 10 mM КCl, 1 mM MgSO4, 0,35% в-меркаптоэтанола) и гомогенизировали, к гомогенату добавляли 100 мкл раствора субстрата о-нитрофенил-b-D-галактопиранозида в Z-буфере (4 мг/мл) и инкубировали его при 37°С 90 мин. Реакцию останавливали добавлением 1 мл 0,52 M раствора Na2CO3. Оптическую плотность измеряли при l=420 нм и l=550 нм. Относительную активность b-галактозидазы в условных единицах определяли по формуле А420 = 1,1´ А550.

Активность гена gfp определяли с помощью флуоресцентного микроскопа «Axioscop 2 plus» или «Leica DM6000 B» при длине волны 450-490 нм.

Часть зародышей на различных стадиях развития нагревали при 37°С в течение 30 мин, после чего через 2-4 часа подвергали гистохимическому окрашиванию с помощью X-Gal, проводили количественный анализ активности b-галактозидазы или исследовали зародыши под флуоресцентным микроскопом.

Положительным контролем служили зародыши, которым инъецировали рекомбинантную плазмиду, содержащую ген gfp под химерным регуляторным элементом, имеющим в своем составе немедленно ранний энхансер цитомегаловируса человека и промотор фактора элонгации 1b человека (pCEEGFP) [20] [любезно предоставлена Dr. T. Takada). Экспрессию трансгена (флуоресценция зеленым цветом) анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа

«Axioscop 2 plus» или «Leica DM6000 B» при длине волны 450-490 нм. Отрицательным контролем служили интактные зародыши и интактные зародыши, подвергавшиеся нагреванию.

Результаты

Экспрессия lacZ-гена под контролем регуляторных элементов гена теплового шока дрозофилы в эмбрионах вьюна

Было проведено 5 серий микроинъекций плазмиды pD88, содержащей lacZ-ген под контролем промотора гена ТШ дрозофилы, в оплодотворенные икринки вьюна на стадии бластодиска. 108 зародышей и предличинок 1-5-суточного возраста были обработаны X-Gal. Экспрессия lacZ-гена носила мозаичный характер и проявлялась на всех исследованных стадиях развития в виде сине-зеленых штрихов, точек, пятен различных размеров, расположенных по отдельности или в виде небольших групп (рис. 1А и 1В). У предличинок мозаичная экспрессия репортерного гена происходила на голове, в туловищных сомитах, хвосте, плавниках, а также в желточном синцитии и была представлена, в основном, клетками эпидермиса и мышечными волокнами.

 

Рис. 1. Трансгенные зародыши вьюна с экспрессией плазмиды pDВВ после окрашивания Х-Gal: А-1-суточный зародыш (со снятой оболочкой); В-2-суточный зародыш; С-группа 5-суточных аномальных зародышей, полученных после инъекции трансгена в количестве 1,5 нг на икринку

 

В некоторых сериях опытов эффективность экспрессии трансгена наблюдали у 100 % зародышей. Как видно из таблицы, в которой представлены суммарные данные по всем 5 сериям опытов, начало экспрессии происходило у 66,7% суточных зародышей на стадии ранней средней гаструлы. Максимальная доля зародышей, экспрессирующих трансген, возрастала к 2-3 суткам, достигая 96,2-78,6% и постепенно снижалась к стадии вылупления из оболочек (57,1-52,9%). Следует отметить, что количество сине-зеленых точек и интенсивность окрашивания, отражающие экспрессию трансгена, были максимальными на стадии 2-3 суток развития. У 5-суточных предличинок экспрессия гена lacZ была представлена, в основном, в отдельных эпидермальных и мышечных клетках. Однако повышение концентрации трансгена или объема раствора при микроинъекции в икринки приводило к увеличению количества экспрессирующих зародышей, интенсивности экспрессии вводимого генетического материала и увеличению количества аномальных зародышей (рис. 1С).

 

Таблица. Эффективность экспрессии плазмиды рD88 у 1-5-суточных зародышей вьюна

Стадия развития (сутки)

Тепловой шок (ТШ)

Общее кол-во зародышей

Зародыши с экспрессией гена lacZ

кол-во

%

1

—

36

24

66,7

2

—

26

25

96,2

2

+

8

7

87,5

3

—

14

11

78,6

4

—

7

4

57,1

5

—

17

9

52,9

 

Нагревание 2-суточных зародышей в одной из серий опытов в течение 30 мин при 37°С и инкубация их при комнатной температуре в течение 2 часов с последующим гистохимическим окрашиванием не приводила к повышению эффективности и интенсивности экспрессии трансгена (табл.). Ни в одном случае не было отмечено специфического окрашивания на b-галактозидазу у интактных зародышей либо интактных зародышей, подвергавшихся нагреванию.

Полученные данные подтверждаются результатами и другой серии опытов, где 2-суточных зародышей подвергали аналогичной процедуре, после чего их гомогенизировали и отдельные суммарные гомогенаты (5 зародышей после нагревания, 5 зародышей без нагревания и 5 контрольных зародышей) окрашивали по методу, описанному выше, с добавлением субстрата о-нитрофенил-b-D-галактопиранозида и определяли уровень экспрессии количественным путем на спектрофотометре. Относительная фоновая активность b-галактозидазы у контрольных зародышей составила 0,095 у.е., у зародышей, микроинъецированных плазмидой pD88,-0,410 у.е., а зародышей той же серии после нагревания 0,280 у.е. Представленные данные свидетельствуют о том, что нагревание зародышей при 37°С в течение 30 мин и их обработка спустя 2 часа не приводит к увеличению экспрессии трансгена.

Экспрессия gfp-гена под контролем регуляторных элементов гена теплового шока дрозофилы в эмбрионах вьюна

Было проведено несколько серий микроинъекций рекомбинантной плазмиды pHLP, содержащей gfp-ген под промотором гена ТШ дрозофилы, в оплодотворенные икринки вьюна на стадии бластодиска. Экспрессия gfp-гена носила мозаичный характер и проявлялась в виде отдельных точек, пятен на поверхности суточных зародышей, в желточном синцитии, а по мере развития зародышей в мышечных волокнах, в эпителиальных клетках эпидермиса, меланофорах и других типах клеток (рис. 2А, В, С).

 

Рис. 2. Трансгенные зародыши вьюна с экспрессией плазмиды pHLP: А-4-суточный зародыш с экспрессией gfp-гена; В - мышечные волокна; С - меланофоры

 

В одной из серий опытов в икринки вьюна на стадии бластодиска инъецировали в качестве контроля плазмиду pCEEGFP, содержащую gfp-ген под химерным промотором, имеющим в своем составе немедленно ранний энхансер цитомегаловируса человека и промотор фактора элонгации 1b человека. Этой плазмидой было проинъецировано 48 икринок, в такое же количество икринок параллельно инъецировали плазмиду pHLP. Анализ экспрессии трансгенов у развившихся после микроинъекции суточных зародышей показал, что при инъекции контрольной плазмиды pCEEGFP 25 из 26 зародышей экспрессировали трансген, тогда как при инъекции плазмиды pHLP и эффективность, и интенсивность экспрессии трансгена была значительно ниже только у 6 зародышей из 26, выживших через сутки после микроинъекции, наблюдалась экспрессия gfp-гена. К 2-м суткам развития несколько из 11 зародышей, выживших после инъекции плазмиды pHLP, экспрессировали трансген (рис. 3А).

 

Рис. 3. Трансгенные зародыши вьюна: А-группа 2-суточных зародышей с экспрессией плазмиды pHLP; В - эта же группа 2-суточных зародышей с экспрессией плазмиды pHLP через 2 часа после нагревания; С-группа 2-суточных зародышей с экспрессией плазмиды pCEEGFP

 

Нагревание данной группы зародышей в течение 30 мин при 37°С и последующее инкубирование их при комнатной температуре в течение 2,5 часов не привело к заметному увеличению интенсивности экспрессии трансгена (рис. 3В). Не было отмечено явного усиления экспрессии gfp-гена в данной группе зародышей ни через 4 часа, ни через сутки после нагревания. В то же время, после инъекции плазмиды pCEEGFP трансген интенсивно экспрессировался у 6 из 7 выживших 2-суточных зародышей (рис. 3С). Дальнейшее наблюдение (до 12 суток развития) за зародышами с плазмидой pHLP данной серии экспериментов показало, что на 6-е сутки у 2 предличинок из 6 интенсивная экспрессия трансгена проявлялась в мышечных, эпидермальных клетках и в желточном синцитии (рис. 4А). У одной из двух экспрессирующих предличинок была обнаружена сильная экспрессия gfp-гена в хрусталиках глаз (рис. 4В), которая сохранялась до 12 суток развития. На 7-12-е сутки развития экспрессия gfp-гена у обеих предличинок отмечалась также в отдельных клетках или клонах клеток эпидермиса, мышц, жабр, в меланофорах и других типах клеток (рис. 4С). Не было отмечено флуоресцентного свечения клеток у контрольных интактных зародышей либо контрольных зародышей, подвергавшихся нагреванию.

 

Рис. 4. Трансгенные зародыши вьюна с экспрессией плазмиды pHLP: А-6-суточная предличинка (флуоресценция мышечных, эпителиальных клеток и желточного синцития); В-глаз 7-суточной предличинки; С-клон эпителиальных клеток, расположенных на хвостовой части туловища

 

Обсуждение результатов

В настоящей работе показано, что экспрессия репортерных генов lacZ и gfp под контролем регуляторных элементов гена ТШ hsp70 дрозофилы после микроинъекции в оплодотворенные икринки вьюна происходила во время раннего развития эмбрионов FO-поколения. Экспрессия трансгенов осуществлялась на достаточно высоком уровне независимо от структуры регуляторных элементов и носила мозаичный характер.

Ранее также наблюдалась мозаичная транзиентная экспрессия репортерных генов в эмбрионах различных организмов FO-поколения при тестировании эффективности работы гетерологичных регуляторных элементов. В частности, промоторы Hox1 мыши и Hox2 человека обеспечивали высокую транзиентную экспрессию гена lacZ у суточных эмбрионов зебрафиш [1]; два различных промотора зебрафиш, специфичных для мышечных и эпителиальных клеток (mylz2 и krt8), строго направляли мозаичную тканеспецифическую экспрессию gfp и rfp генов в ранних трансгенных эмбрионах медаки [4]; ген gfp под контролем нейронального гена [GATA2) зебрафиш мозаично экспрессировался в эмбрионах Хenopus L. [21].

В ряде работ исследовали уровень активности репортерных генов под индуцибельными регуляторными элементами генов ТШ. Показано, в частности, что ген люциферазы (luc) под промотором гена hsp70 дрозофилы после применения ТШ приводил к 55-кратному увеличению уровня экспрессии трансгена в ранних эмбрионах устриц [10]; полностью изолированные регуляторные элементы гена hsp70 тиляпии обеспечивали индуцибельную экспрессию lacZ-гена без предпочтения в какой-либо ткани у эмбрионов зебрафиш и в культуре клеток карпа [3]; ген lacZ под контролем промоторов генов hsp70 мыши и Хenopus L. в трансгенных эмбрионах зебрафиш экспрессировался в ответ на действие ТШ [12]; высокий уровень люциферазной активности после локального воздействия ультразвуком проявлялся в тканях мышей и крыс после внутривенной инъекции вектора с luc-геном под промотором гена hsp70В дрозофилы [13]; индуцибельная экспрессия гена, кодирующего синий белок BFP, под промотором гена hsp70 дрозофилы, наблюдалась в трансфецированных эмбриональных стволовых клетках мыши [14].

Эти данные свидетельствует о том, что промоторная активность, в целом, и механизмы тканеспецифической и индуцибельной экспрессии генов, в частности, высококонсервативны у различных видов животных. В отдельных работах детально проанализированы регуляторные элементы гена hsp70 дрозофилы и других организмов, при этом показано, что экспрессия трансгенов под этими элементами строго индуцибельна. В одном из исследований наблюдалась низкая фоновая экспрессия гена lacZ под контролем регуляторных последовательностей генов hsp70 мыши и Хenopus L. в трансгенных эмбрионах зебрафиш без теплового воздействия [несколько окрашенных клеток на эмбрион), однако после повышения температуры авторы отмечали значительное увеличение количества экспрессирующих клеток [12]. В наших экспериментах повышение температуры окружающей среды не приводило к явному усилению и без того довольно интенсивной экспрессии трансгенов под обоими вариантами регуляторных элементов гена hsp70 дрозофилы. Возможно, что это связано не столько со структурой этих элементов, сколько с особенностями развития вьюна: в развивающихся икринках вьюна находится большое количество транскрипционных факторов, которые являются достаточно консервативными и способны к взаимодействию с гетерологичными промоторами, в результате чего для активации экспрессии трансгенов не требуется никаких дополнительных воздействий, достаточно только готовности транскрипционного аппарата собственного генома транскрибировать чужеродную ДНК [7]. Видимо, гомологи транскрипционных факторов HSF у различных видов рыб способны высокоэффективно связываться с промоторами генов hsp70 других видов животных, что подтверждает консервативную природу регуляторных районов гена hsp70 [12].

Дополнительным доводом в пользу наличия большого количества транскрипционных факторов широкого спектра действия в зародышах вьюна является тот факт, что lacZ-ген под контролем высокоспецифичного промотора гена aS1-казеина быка [22], инъецированный в оплодотворенные икринки вьюна, также высокоэффективно экспрессировался в различных тканях 1-5-суточных зародышей (собственные неопубликованные данные).

По нашим данным, увеличение концентрации трансгенов при введении в яйцеклетки вьюна приводило к увеличению экспрессии трансгена как в отношении количества экспрессирующих предличинок, так и интенсивности экспрессии в индивидуальных особях. Это сопровождалось повышением количества аномальных зародышей, что согласуется с данными других авторов [12].

Начало экспрессии трансгенов у суточных зародышей вьюна (в период ранней-средней гаструлы) согласуется с данными наших предыдущих исследований [17] и совпадает с началом экспрессии чужеродной ДНК в период гаструляции у зебрафиш [23]. Максимальное количество экспрессирующих особей вьюна (до 100% в отдельных сериях экспериментов) без теплового воздействия мы наблюдали у 2-3-суточных зародышей (в период перед вылуплением при формировании органов осевого комплекса и сразу же после вылупления из оболочек), что полностью совпадает с нашими предыдущими данными при инъекции lacZ-гена под контролем промоторов RSV и CMV в икринки вьюна [17, 2]. Наивысший пик транзиентной экспрессии трансгенов отмечался и в соответствующий период развития [гаструла начало сегментации) у 12 24-часовых эмбрионов зебрафиш FO-поколения после инъекции репортерных генов под регуляторными элементами вирусов SV-40 и RSV [23], Hox-генов [82,7% экспрессирующих особей) [1], генов hsp70 мыши и Хenopus L. [12], нейронального гена GATA2 [21].

Гены ТШ у зебрафиш в нестрессовых условиях экспрессируются уникальным образом. В частности, ген hsp90alpha экспрессируется во время нормальной дифференцировки в мышечных волокнах, ген hsp70-4 - во время развития хрусталика глаза [24, 8]. Однако под воздействием стресса экспрессия трансгенов с гетерологичными hsp70-промоторами у эмбрионов зебрафиш не имеет специфического характера и сходна с таковой, например, при использовании SV40-промотора, который является конститутивным [3]. В наших экспериментах экспрессия трансгенов не носила предпочтительного характера по отношению к каким-либо органам и тканям и наблюдалась в эпителиальных и пигментных клетках эпидермиса, мышечных волокнах, желточном синцитии, хрусталике глаз. Аналогичный характер экспрессии мы наблюдали также после введения lacZ-гена с промоторами RSV и CMV [2].

Таким образом, в ранних эмбрионах вьюна показана достаточно высокая транзиентная мозаичная активность репортерных генов lacZ и gfp под контролем двух отличающихся регуляторных элементов гена hsp70 дрозофилы без применения теплового шока. Полученные результаты свидетельствуют о том, что данную модель удобно использовать для быстрого тестирования промоторной активности генов, принадлежащих к различным таксономическим группам.

×

About the authors

L. E. Andreeva

Molecular Genetics Institute, RAS

Author for correspondence.
Email: redaktor@celltranspl.ru
Russian Federation, Moscow

N. V. Khaydarova

Molecular Genetics Institute, RAS

Email: redaktor@celltranspl.ru
Russian Federation, Moscow

A. V. Rodriges-Blanko

Molecular Genetics Institute, RAS

Email: redaktor@celltranspl.ru
Russian Federation, Moscow

N. N. Kananaykina

Institute of Gene Biology RAS

Email: redaktor@celltranspl.ru

laboratory of neurogenetics and genetics of development

Russian Federation, Moscow

A. V. Revishchin

Institute of Gene Biology RAS

Email: redaktor@celltranspl.ru

laboratory of neurogenetics and genetics of development

Russian Federation, Moscow

V. Z. Tarantul

Molecular Genetics Institute, RAS

Email: redaktor@celltranspl.ru
Russian Federation, Moscow

L. I. Korochkin

Institute of Gene Biology RAS

Email: redaktor@celltranspl.ru

laboratory of neurogenetics and genetics of development

Russian Federation, Moscow

G. V. Pavlova

Institute of Gene Biology RAS

Email: redaktor@celltranspl.ru

laboratory of neurogenetics and genetics of development

Russian Federation, Moscow

References

  1. Westerfield M., Wegner J., Jegalian B.G. et al. Specific activation of mammalian Hox promoters in mosaic transgenic zebrafish. Genes Dev. 1992; 6: 591-8.
  2. Андреева Л.Е., Григоренко А.П., Гордеева О.Ф., Дворянчиков Г.А. Экспрессия CMV-lacZ и RSV-lacZ-генов в трансгенных эмбрионах рыб и мышей. Генетика 1996; 3: 1661-8.
  3. Molina A., Biemar F., Muller F. et al. Cloning and expression analysis of an inducible HSP70 gene from tilapia fish. FEBS Lett 2000; 474: 5-10.
  4. Zeng Z., Liu X., Seebah S., Gong Z. Faithful expression of living color reporter genes in transgenic medaka under two tissue-specific zebrafish promoters. Dev. Dyn. 2005; 234: 387-92.
  5. Козлов А.П., Решетников В.Л., Корж В.П., Нейфах А.А. Чужеродная ДНК в развивающихся зародышах вьюна Misgurnus fossilis L. Мол. биология 1988; 22: 1614-22.
  6. Колесников В.А., Алимов А.А., Барминцев В.А. и др. Высокоскоростная механическая инъекция чужеродной ДНК в яйцеклетки рыбы. Генетика 1990; 26: 2122-6.
  7. Андреева Л.Е., Дворянчиков Г.А. Анализ экспрессии RSV-lacZ-гена в трансгеннных эмбрионах вьюна Misgurnus fossilis L. при различных вариантах инъекций. Генетика 1995; 31: 759-66.
  8. Krone P.H., Evans T.G., Blechinger S.R. Heat shock gene expression and function during zebrafish embryogenesis. Semin. Cell Dev. Biol. 2003; 14: 267-74.
  9. Krone P.H., Heikkila J.J. Expression of microinjected hsp 70/CAT and hsp 30/CAT chimeric genes in developing Xenopus laevis embryos. Dev. 1989; 106: 271-81.
  10. Cadoret J.P., Boulo V., Gendreau S., Mialhe E. Promoters from Drosophila heat shock protein and cytomegalovirus drive transient expression of luciferase introduced by particle bombardment into embryos of the oyster Crassostrea gigas. J. Biotechnol. 1997; 56: 183-9.
  11. Saraiva E., Fampa P., Cedeno V. et al. Expression of heterologous promoters in Lutzomyia longipalpis and Phlebotomus papatasi (Diptera: Psychodidae) cell lines. J. Med. Entomol. 2000; 37: 802-6.
  12. Adam A., Bartfai R., Lele Z. et al. Heat-inducible expression of a reporter gene detected by transient assay in zebrafish. Exp. Cell Res. 2000; 256: 282-90.
  13. Smith R.C., Machluf M., Bromley P. et al. Spatial and temporal control of transgene expression through ultrasound-mediated induction of the heat shock protein 70B promoter in vivo. Hum. Gene Ther. 2002; 13: 697-706.
  14. Павлова Г.В., Мануилова Е.С., Арсеньева Е.Л. и др., Экспрессия белка BFP в трансфецированных эмбриональных стволовых клетках. Клеточные технологии в биологии и медицине 2005; 2: 99-102.
  15. Нейфах А.А. Использование метода радиационной инактивации ядер для исследования их функций в раннем развитии рыб. Журн. Общ. Биологии 1959; 20: 202-13.
  16. Amin J., Mestril R., Schiller P. et al. Organization of the Drosophila melanogaster hsp70 heat shock regulation unit. Mol. Cell Biol. 1987; 7: 1055-62.
  17. Андреева Л.Е., Жаданов А.Б. Кузнецов Ю.М. Экспрессия гена -галактозидазы в трансгенных эмбрионах вьюна Misgurnus fossilis L. Генетика 1993; 29: 740-7.
  18. Thorey I.S., Meneses J.J., Neznanov N. et al. Embryonic expression of human keratin 18 and K18-beta-galactosidase fusion genes in transgenic mice. Dev. Biol. 1993; 160: 519-34.
  19. Amin J., Mestril R., Lawson R. et al. The heat shock consensus sequence is not sufficient for hsp70 gene expression in Drosophila melanogaster. Mol. Cell Biol. 1985; 5:1 97-203.
  20. Takada T., Iida K., Awaji T. et al. Selective production of transgenic mice using green fluorescent protein as a marker. Nat. Biotechnol. 1997; 15: 458-61.
  21. Conway G., Torrejon M., Lin S., Reinsch S. Fluorescent tagged analysis of neural gene function using mosaics in zebrafish and Xenopus laevis. Brain Res. 2006; 1070: 150-9.
  22. Дворянчиков Г.А., Серова И.А., Андреева Л.Е. и др. Секреция биологически активного гранулоцит колоние-стимулирующего фактора (ГКСФ) человека в молоке трансгенных мышей. Генетика 2005; 41: 1330-7.
  23. Stuart G.W., Vielkind J.R., McMurray J.V., Westerfield M. Stable lines of transgenic zebrafish exhibit reproducible patterns of transgene expression. Dev. 1990; 109: 577-84.
  24. Halloran M.C., Sato-Maeda M., Warren J.T. et al. Laser-induced gene expression in specific cells of transgenic zebrafish. Dev. 2000; 127: 1953-60.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download
2. Fig. 1

Download (125KB)
Indexing metadata
3. Fig. 2

Download (67KB)
Indexing metadata
4. Fig. 3

Download (125KB)
Indexing metadata
5. Fig. 4

Download (64KB)
Indexing metadata

Copyright (c) 2006 Eco-Vector


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: 

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies