INFLUENCE OF INTRADERMAL HYALURONIC ACID ADMINISTRATION ON LIPOPEROKSIDATION PROCESSES IN THE SKIN OF EXPERIMENTAL ANIMALS

Abstract


The content of primary (diene conjugates), secondary (ketodienes and integrated trienes) and final (basis shiffova) products of lipid peroxidation in heptanew and isopropanol phases of lipidic extract of the skin of young female rats (4-5 months) and adult female rats (11-12 months) is studied. It is established that aging increase POL products . It is shown that intradermal injections of medicine of native high-molecular hyaluronic acid by a method of mesotherapy to animals of mature age renders the skin lipoperoksidation intensity braking effect.

Full Text

Возрастные изменения кожи - закономерный процесс с участием генетических и эпигенетических факторов, оказывающих влияние на количество, морфологическую структуру, пролиферативную активность, функциональные возможности дермальных фибробластов, кератиноцитов, меланоцитов [11, 12, 14]. В процессах старения особое внимание уделяется действию в клетках свободных радикалов, их повреждающему эффекту на клеточные структуры в результате переокисления липидов, окислительной модификации белков, нуклеиновых кислот [1, 6, 11]. На фоне накопления свободных радикалов при старении наблюдается истощение антиокислительных резервов и нарушение мобилизации компонентов антиокислительной защиты [4, 11, 13]. Для коррекции возрастных изменений и фотостарения кожи широкое применение нашли препараты гиалуроновой кислоты (ГК). ГК участвует не только в регуляции водного баланса, обеспечении тургора и тонуса кожи, но и процессов пролиферации, миграции и апоптоза клеток, обладает биостимулирующим действием на обменные процессы, способствует увеличению объема межклеточного вещества дермы, его структурных элементов за счет активации биосинтетической функции фибробластов, обладает противовоспалительными свойствами, участвует в обеспечении защиты клеток и внутриклеточных структур от окислительной деградации [8, 9, 10]. Цель исследования: охарактеризовать интенсивность процессов перекисного окисления липидов кожи при внутридермальном курсовом введении препарата гиалуроновой кислоты экспериментальным животным. Материал и методы. Эксперименты были проведены на самках крыс молодого (4-5 месяцев) и зрелого (11-12 месяцев) возраста. Животные содержались в условиях вивария при сбалансированном питании и естественном освещении. При проведении экспериментов соблюдали этические нормы и рекомендации по гуманному отношению к животным, введенные Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях, а также приказ Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты были проведены в два этапа. На первом этапе изучали перекисное окисление липидов (ПОЛ) в коже интактных животных молодого и зрелого возрастов. На втором этапе оценивали влияние препарата «JuvedermRHydrate™» (Франция) на эти процессы в коже зрелых животных. Препарат содержит 13,5 мг геля гиалуроновой кислоты с молекулярной массой 1 млн. дальтон и 9 мг маннитола в 1 мл фосфатного буфера рН7,2. Введение препарата осуществляли под легким эфирным наркозом интердермально техникой мезотерапии на боковую поверхность туловища (площадь 3х3 см) после удаления шерстяного покрова из расчета 0,06 мл на 100 г массы крысы трижды на 1-е, 3-и и 6-е сутки эксперимента. В контрольную область кожи (другой бок туловища) внутридермально инъецировали стерильный физиологический раствор. Животных выводили из эксперимента под легким эфирным наркозом на 2-е, 4-е, 7-е, 21-е и 37-е сутки. В коже в областях инъекции препарата ГК и физиологического раствора после удаления подкожной клетчатки определяли содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) спектрофотометрически в гептан-изопропаноловых экстрактах, первичные и вторичные продукты - по методу, описанному Волчегорским И.А., Долгушиныы И.И. и др. [2], конечные - по Львовской Е.И., Волчегорским И.А. и др. [6]. Статистическую обработку результатов осуществляли, используя пакет программ Statistica 6,0 for Window, рассчитывали медиану, верхний и нижний квартили. Межгрупповые различия показателей оценивали по U-критерию Манна-Уитни. Результаты и обсуждение При изучении уровня липопероксидации в коже животных разного возраста (таблица 1) были выявлены статистически значимые различия в содержании первичных (диеновые коньюгаты радикалов жирных кислот), вторичных (кетодиены и сопряженные триены) и конечных (шиффовы основания) продуктов. У группы зрелых животных обнаружилось увеличение продуктов липоперикседации как в гептановой фазе, в которую преимущественно экстрагируются нейтральные липиды, так и в изопропаноловой фазе, содержащей в основном полярные (дифильные) липиды. Полученные результаты не противоречат данным авторов, также констатировавших увеличение содержания продуктов ПОЛ и нарастающую интенсивность хемилюминесценции гомогенатов кожи в зависимости от возраста животных [3, 11]. Результаты изучения влияния инъекций препарата ГК на липопераксидацию в коже зрелых животных представлены в таблицах 2 и 3. Внутридермальные инъекции и препарата ГК и физраствора на следующие сутки после процедуры приводили к увеличению в гептановой фазе продуктов ПОЛ. На 21-е и 37-е сутки эксперимента содержание продуктов липопероксидации в контрольной области кожи не отличалось от уровня у животных интактной группы. В коже в области введения препарата ГК статистически значимое снижение концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ по сравнению с контрольной областью обнаруживалось на 4-е и 7-е сутки опыта, или после повторных инъекций препарата, а конечных продуктов - лишь в более поздние сроки исследования. Близкая динамика изменений содержания продуктов ПОЛ кожи была выявлена и при определении изопропаноловой фазы липидного экстракта кожи (таблица 3). И в этой фазе, преимущественно содержащей фосфолипиды биологических мембран, наблюдалось повышение уровня продуктов липопероксидации в первые дни эксперимента. Как в области инъекции препарата ГК, так и физиологического раствора, на 21-е и 37-е сутки существенных различий показателей липопероксидации в коже опытных и интактных животных не выявлялись. Однако в коже в области введений препарата ГК содержание диеновых коньюгатов на 2-е, 4-е и 7-е сутки, кетодиенов и сопряженных триенов, шиффовых оснований на 7-е сутки эксперимента было статистически значимо ниже, чем в контрольных участках кожи. Повышение интенсивности липопероксидации в коже в области инъецирования физиологического раствора и препарата гиалуроновой кислоты на следующие сутки после проведения процедуры мезотерапии, вероятно, связано с проявлением тканевого ответа и с развитием воспалительной реакции на травмирующее воздействие. Так, по данным Н.П. Михайловой и соавт. [7], при подкожной инъекции геля высокомолекулярной немодифицированной ГК экспериментальным животным в местах введения наблюдалось развитие асептического воспаления с нейтрофильной инфильтраций на первые сутки, которая в последующем сменялась лимфоцитарно-макрофагальной на более поздних сроках. Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что интердермальное инъецирование препарата гиалурона методом мезотерапии в первые сутки приводит к активации липопероксидации в коже в области введения препарата и физиологического раствора. Высокомолекулярная немодифицированная гиалуроновая кислота при этом проявляет антиоксидантное действие, снижая содержание в коже продуктов перекисного окисления липидов. Выводы При физиологическом старении в коже экспериментальных животных происходит увеличение содержания продуктов перекисного окисления липидов - диеновых коньюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов, шиффовых оснований. Интердермальное введение препарата нативной высокомолекулярной гиалуроновой кислоты способствует снижению содержания продуктов липопероксидации в коже экспериментальных животных зрелого возраста.

About the authors

A G GALEEVA

Bashkir State Medical University

Email: galeevmt@mail.ru

References

  1. Болдарев А. А., Мальцева В. А. Окислительный стресс и старение организма // Косметика и медицина. - 2002. - № 4. - С.15-25.
  2. Волчегорский И.А., Долгушин И.И., Колесников О.А., Цейликман В.Э. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакции организма. Челябинск: изд-во Челябинского педагогического университета. - 2000. - С. 21-28.
  3. Ермакова Е.Ю. Перекисное окисление липидов и барьерная функция кожи в условиях старения организма: Автореф. дисс. …канд. мед. наук: 03.00.04 -Биохимия. - Челябинск, 2005 - 22 с.
  4. Кошевенко Ю.Н. Кожа человека. Том 1. Структура, физиология и предназначение функциональных элементов кожного органа человека. - М.: Медицина, 2006. - 360 с.
  5. Кубанов А.А., Жилова М.Б., Кубанова А.А. Фотостарение кожи: механизмы развития, особенности клинических проявлений // Вестник дерматологии и венерологии. - 2012. - №5. - С. 53-59.
  6. Львовская Е.И., Волчегорский И.А., Шеляков Е.Е., Лифшиц Р.И. Спектрофотометрическое определение конечных продуктов перекисного окисления липидов // Вопросы медицинской химии. - 1991. - № 4. - С. 92-94.
  7. Михайлова Н.П., Шехтер А.Б., Руденко Т.Г. Морфологическое исследование результатов подкожного введения гелей немодифицированной и модифицированной гиалуроновой кислоты // Мезотерапия. - 2013. - № 24/04. - С. 6-16.
  8. Хабаров В.Н., Байков П.Я., Селянин М.А. Гиалуроновая кислота. - М.: Практическая медицина, 2012. - 224 с.
  9. Чайковская Е.А., Парсагашвили Е.З. Гиалуроновая кислота: биологический контроль над воспалением и ранозаживлением // Инъекционные методы в косметологии. - 2011. - № 4. - С. 20-29.
  10. Чайковская Е.А., Шарова А.А. Гиалуроновая кислота и её фракции. Биологические функции в ракурсе фармакотерапии // Инъекционные методы и композиции. - 2012. - № 1. - С. 9-16.
  11. Ястребов А.П., Мещанинов В.Н. Старение, перекисное окисление липидов и биовозраст. Екатеринбург: ООО «Уральский следопыт». - 2005. - 220 с.
  12. Lee D.E., Cho K.H. The effects of epidermal Keratinocytes and dermal fibroblasts on the formation of cutaneus basement membrane in three dimensional culture systems // Arch.Dermatol. Res. - 2005. - Vol. 296 (7). - P. 296-302.
  13. Levine R.L., Stadtmon E.R. Oxidative modixication of proteins during ageing // Exp.Gerontol. - 2001. - Vol. 36 (9). - P.495-1502.
  14. Sorrell M., Caplan A.I. Fibroblasts - a diverse population at the center of it all // Int.Rev.Cell Molecul.Biol. - 2009. - Vol. 276. - P.161-214.

Statistics

Views

Abstract - 39

PDF (Russian) - 9

Cited-By


Article Metrics

Metrics Loading ...

PlumX

Dimensions

Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2017 GALEEVA A.G.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies