INFLUENCE OF INTRADERMAL HYALURONIC ACID ADMINISTRATION ON LIPOPEROKSIDATION PROCESSES IN THE SKIN OF EXPERIMENTAL ANIMALS

Full Text

Возрастные изменения кожи - закономерный процесс с участием генетических и эпигенетических факторов, оказывающих влияние на количество, морфологическую структуру, пролиферативную активность, функциональные возможности дермальных фибробластов, кератиноцитов, меланоцитов [11, 12, 14]. В процессах старения особое внимание уделяется действию в клетках свободных радикалов, их повреждающему эффекту на клеточные структуры в результате переокисления липидов, окислительной модификации белков, нуклеиновых кислот [1, 6, 11]. На фоне накопления свободных радикалов при старении наблюдается истощение антиокислительных резервов и нарушение мобилизации компонентов антиокислительной защиты [4, 11, 13]. Для коррекции возрастных изменений и фотостарения кожи широкое применение нашли препараты гиалуроновой кислоты (ГК). ГК участвует не только в регуляции водного баланса, обеспечении тургора и тонуса кожи, но и процессов пролиферации, миграции и апоптоза клеток, обладает биостимулирующим действием на обменные процессы, способствует увеличению объема межклеточного вещества дермы, его структурных элементов за счет активации биосинтетической функции фибробластов, обладает противовоспалительными свойствами, участвует в обеспечении защиты клеток и внутриклеточных структур от окислительной деградации [8, 9, 10]. Цель исследования: охарактеризовать интенсивность процессов перекисного окисления липидов кожи при внутридермальном курсовом введении препарата гиалуроновой кислоты экспериментальным животным. Материал и методы. Эксперименты были проведены на самках крыс молодого (4-5 месяцев) и зрелого (11-12 месяцев) возраста. Животные содержались в условиях вивария при сбалансированном питании и естественном освещении. При проведении экспериментов соблюдали этические нормы и рекомендации по гуманному отношению к животным, введенные Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях, а также приказ Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты были проведены в два этапа. На первом этапе изучали перекисное окисление липидов (ПОЛ) в коже интактных животных молодого и зрелого возрастов. На втором этапе оценивали влияние препарата «JuvedermRHydrate™» (Франция) на эти процессы в коже зрелых животных. Препарат содержит 13,5 мг геля гиалуроновой кислоты с молекулярной массой 1 млн. дальтон и 9 мг маннитола в 1 мл фосфатного буфера рН7,2. Введение препарата осуществляли под легким эфирным наркозом интердермально техникой мезотерапии на боковую поверхность туловища (площадь 3х3 см) после удаления шерстяного покрова из расчета 0,06 мл на 100 г массы крысы трижды на 1-е, 3-и и 6-е сутки эксперимента. В контрольную область кожи (другой бок туловища) внутридермально инъецировали стерильный физиологический раствор. Животных выводили из эксперимента под легким эфирным наркозом на 2-е, 4-е, 7-е, 21-е и 37-е сутки. В коже в областях инъекции препарата ГК и физиологического раствора после удаления подкожной клетчатки определяли содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) спектрофотометрически в гептан-изопропаноловых экстрактах, первичные и вторичные продукты - по методу, описанному Волчегорским И.А., Долгушиныы И.И. и др. [2], конечные - по Львовской Е.И., Волчегорским И.А. и др. [6]. Статистическую обработку результатов осуществляли, используя пакет программ Statistica 6,0 for Window, рассчитывали медиану, верхний и нижний квартили. Межгрупповые различия показателей оценивали по U-критерию Манна-Уитни. Результаты и обсуждение При изучении уровня липопероксидации в коже животных разного возраста (таблица 1) были выявлены статистически значимые различия в содержании первичных (диеновые коньюгаты радикалов жирных кислот), вторичных (кетодиены и сопряженные триены) и конечных (шиффовы основания) продуктов. У группы зрелых животных обнаружилось увеличение продуктов липоперикседации как в гептановой фазе, в которую преимущественно экстрагируются нейтральные липиды, так и в изопропаноловой фазе, содержащей в основном полярные (дифильные) липиды. Полученные результаты не противоречат данным авторов, также констатировавших увеличение содержания продуктов ПОЛ и нарастающую интенсивность хемилюминесценции гомогенатов кожи в зависимости от возраста животных [3, 11]. Результаты изучения влияния инъекций препарата ГК на липопераксидацию в коже зрелых животных представлены в таблицах 2 и 3. Внутридермальные инъекции и препарата ГК и физраствора на следующие сутки после процедуры приводили к увеличению в гептановой фазе продуктов ПОЛ. На 21-е и 37-е сутки эксперимента содержание продуктов липопероксидации в контрольной области кожи не отличалось от уровня у животных интактной группы. В коже в области введения препарата ГК статистически значимое снижение концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ по сравнению с контрольной областью обнаруживалось на 4-е и 7-е сутки опыта, или после повторных инъекций препарата, а конечных продуктов - лишь в более поздние сроки исследования. Близкая динамика изменений содержания продуктов ПОЛ кожи была выявлена и при определении изопропаноловой фазы липидного экстракта кожи (таблица 3). И в этой фазе, преимущественно содержащей фосфолипиды биологических мембран, наблюдалось повышение уровня продуктов липопероксидации в первые дни эксперимента. Как в области инъекции препарата ГК, так и физиологического раствора, на 21-е и 37-е сутки существенных различий показателей липопероксидации в коже опытных и интактных животных не выявлялись. Однако в коже в области введений препарата ГК содержание диеновых коньюгатов на 2-е, 4-е и 7-е сутки, кетодиенов и сопряженных триенов, шиффовых оснований на 7-е сутки эксперимента было статистически значимо ниже, чем в контрольных участках кожи. Повышение интенсивности липопероксидации в коже в области инъецирования физиологического раствора и препарата гиалуроновой кислоты на следующие сутки после проведения процедуры мезотерапии, вероятно, связано с проявлением тканевого ответа и с развитием воспалительной реакции на травмирующее воздействие. Так, по данным Н.П. Михайловой и соавт. [7], при подкожной инъекции геля высокомолекулярной немодифицированной ГК экспериментальным животным в местах введения наблюдалось развитие асептического воспаления с нейтрофильной инфильтраций на первые сутки, которая в последующем сменялась лимфоцитарно-макрофагальной на более поздних сроках. Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что интердермальное инъецирование препарата гиалурона методом мезотерапии в первые сутки приводит к активации липопероксидации в коже в области введения препарата и физиологического раствора. Высокомолекулярная немодифицированная гиалуроновая кислота при этом проявляет антиоксидантное действие, снижая содержание в коже продуктов перекисного окисления липидов. Выводы При физиологическом старении в коже экспериментальных животных происходит увеличение содержания продуктов перекисного окисления липидов - диеновых коньюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов, шиффовых оснований. Интердермальное введение препарата нативной высокомолекулярной гиалуроновой кислоты способствует снижению содержания продуктов липопероксидации в коже экспериментальных животных зрелого возраста.

About the authors

A G GALEEVA

Bashkir State Medical University

Email: galeevmt@mail.ru

References

Supplementary files