IMMUNOHISTOCHEMICAL FEATURES OF THE ENDOMETRIUMIN WOMEN WITH TUBAL-PERITONEAL INFERTILITY

Full Text

Одной из проблем современного акушерства и гинекологии продолжает оставаться бесплодие, обусловленное развитием хронического эндометрита. Несмотря на значительные успехи в диагностике патологических процессов репродуктивной системы, хронический эндометрит продолжает оставаться terra incognita, особенно те его формы, которые не имеют манифестных клинических проявлений или четких гистологических признаков [1, 2, 8]. Отметим, что адекватное морфофункциональное состояние эндометрия является одним из определяющих моментов в благополучном исходе имплантации и развития эмбриона [5, 6, 7]. Так, исследования, проведенные «Международным центром репродуктивной медицины» (проф. Корсак В.С. и соавт, 2005), свидетельствовали о том, что патология эндометрия выявляется у 73,7% больных, страдающих трубно-перитонеальной формой бесплодия [3]. По данным В.Е. Радзинского и соавт. (2009, 2012), хронический эндометрит является причиной невынашивания беременности в 70% случаев [7, 8]. В ряде работ, касающихся исследования иммуноморфологических изменений эндометрия, было подчеркнуто, что хронический эндометрит следует рассматривать как клинико-морфологический синдром. При этом оценка только клинических симптомов заболевания верифицирует его лишь в половине случаев [9]. В то же время морфологическое исследование подтверждает, что в основе хронического эндометрита лежит каскад патологических реакций, приводящий к нарушению не только цикличности трансформации ткани, но и её рецепции [4, 6]. Новым направлением в оценке функциональных возможностей эндометрия явилась имуногистохимия, использование которой позволяет не только оценить имеющиеся воспалительные изменения структуры ткани, но и иммунологические особенности функционального слоя. Цель исследования: определение иммуногистохимических изменений эндометрия у женщин, страдающих трубно-перитонеальным бесплодием и готовящихся к протоколу ЭКО. Материалы и методы Нами было исследовано 252 биоптата от 84 женщин, страдающих трубно-перитонеальным бесплодием. У всех женщин был сохранен овуляторный менструальный цикл, не было выявлено инфекций, способных повлиять на структуру эндометрия. Биопсия эндометрия проводилась в процессе проведения плановой гистероскопии. Исследования проводились на оборудовании «Karl Storz» с оптической системой «Hopkins» (углы обзора: 30º, 70º и 90º) на 21-23 дни менструального цикла. Материал, полученный в результате биопсии, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Полученные образцы промывали проточной водой и проводили дегидратацию, используя спирты с возрастающей концентрацией, после чего заливали в парафин. Далее на роторном микротоме проводили срезы. Полученные микропрепараты окрашивали согласно общепринятым стандартам диагностики, затем производили морфометрию полученных препаратов. Микроскопический анализ окрашенных препаратов проводился на световом микроскопе DigiMicro Mini+WiFi при увеличении в 200 и 800 раз. Фотофиксация микропрепаратов осуществлялась камерой-окуляром DCM510 (5,1Mpx, USB 2.0), морфометрия оцифрованных изображений срезов проводилась в 50 полях зрения в каждом микропрепарате, результаты обрабатывались с помощью программы ToupView 3.2 на персональном компьютере. Определение СD56+, CD16+ и маркёра активации HLA-DR(II)+ в лимфоцитах ткани эндометрия проводили реактивами LSAB+kit (DAKO, Дания) с использованием вторичных антител, конъюгированных со щелочной фосфатазой. Имеющийся материал фиксировали в 10%-ном забуференном формалине (рН 7,2), затем обрабатывали соответственно стандартному протоколу, затем парафинировали. После этого готовили серийные парафиновые срезы, толщиной 3-5 мкм и помещали их на стекла с поли-L-лизиновым покрытием. Затем препараты обрабатывали согласно протоколу иммуногистохимической реакции, предлагаемому компанией Dako. Нами было отмечено, что гистероскопическая картина в большинстве случаев была типичной и в основном отражала нормальное состояние слизистой матки в лютеиновую фазу менструального цикла. У подавляющего большинства женщин эндометрий характеризовался значительной толщиной, сочностью, присутствовал богатый сосудистый рисунок, цвет эндометрия колебался от желто-розового до сочного красного, иногда складки эндометрия имели полиповидную форму. Устья маточных труб были видны не при каждом исследовании. Эндометрий был отечным, отчетливо просматривались протоки желез в виде прозрачных точек. Рис. 1. Эндометрий в лютеиновую фазу менструального цикла (собственное наблюдение, пациентка Д., 1981 г.р.) Анализ полученных гистологических протоколов биопсии эндометрия свидетельствовал о том, что в лютеиновую фазу менструального цикла у большинства пациенток фиксировалась следующая картина эндометрия: толщина его в среднем составляла 10,1±0,2 мм, строма базального слоя состояла преимущественно из соединительной ткани, в которой располагалось большое количество аргирофильных и тонких коллагеновых волокон. Железы эндометрия были узкими, эпителий цилиндрический и однорядный, расположен с равными промежутками друг от друга, апикальный край был преимущественно ровным, ядра клеток занимали треть эндометрия, в цитоплазме содержалось много вакуолей. Среди клеток цилиндрического эпителия встречались крупные «пузырьковидные» клетки, расположенные вплотную к базальной мембране, и лимфоциты. У 15 (17,9%) женщин в базальном слое обнаруживались лимфатические фолликулы с очаговыми перигландулярными или периваскулярными инфильтратами, что указывало на наличие воспалительного процесса. Толщина функционального слоя в среднем составляла 6,8±0,3мм, в нём также фиксировались тесно расположенные вокруг сосудов и желез аргирофильные волокна. Обозначался спонгиозный и компактный слои - в последнем преобладала отечная цитогенная строма. К 23 дню цикла были четко видны децидуальные изменения. Имелись зернистые клетки, единичные лимфоциты и тучные клетки. Сосуды в большинстве препаратов были спиралевидными, в отдельных местах образовывали синусоиды и клубки (рис. 2 и 3). Рис. 2. Эндометрий в лютеиновую фазу менструального цикла (собственное наблюдение, пациентка Л., 1984 г.р.; окр. гематоксилином и эозином, Ч100) Рис. 3. Эндометрий в лютеиновую фазу менструального цикла (собственное наблюдение, пациентка А., 1983г.р.; окр. гематоксилином и эозином, Ч100) Иммуноцитохимическими методами нами была определена экспрессия эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в тканях эндометрия, а также экспрессия маркеров СD56+, CD16+ и маркера активации HLA-DR(II)+. Исследования свидетельствовали о том, что по содержанию выявленных показателей имелись определенные различия. Так, у тех женщин, у которых гистологически были выявлены признаки воспаления (15 чел. - 17,9%), средняя экспрессия эстрогеновых рецепторов (ЭР) составила в железах 7,5%, в строме 22,4%. В то же время при нормальной гистологической картине среднее содержание ЭР в железах составило 38,6%, в строме 34,6%. Что касается прогестероновых рецепторов (ПР), их число было несколько выше. Повторимся, что исследование проводилось нами на 21-23 день овуляторного менструального цикла, соответственно содержание ПР в железах составило 45,4%, в строме 70,1%. Примеры типичного распределения эстрогеновых и прогестероновых рецепторов отражены нами на рисунках 4 и 5. Рис. 4. Распределение ЭР в эндометрии в лютеиновую фазу менструального цикла (собственное наблюдение, пациентка Н., 1983г.р.; ув. Ч 100). Рис. 5. Распределение ПР в эндометрии в лютеиновую фазу менструального цикла (Собственное наблюдение, пациентка Н., 1983 г.р.; ув. Ч 200). Далее нами было рассмотрено содержание СD56+, CD16+ и маркёра активации HLA-DR(II)+ в эндометрии. Для удобства подачи полученной информации мы разделили все полученные результаты на 3 группы. Нормальным состоянием эндометрия мы считали содержание клеток, экспрессирующих СD56+, CD16+, и маркёра активации HLA-DR(II)+от 0 до 10. Согласно принятому нами за основу методу А.В. Кузнецовой (2001), при повышении числа клеток, экспрессирующих CD56+ более 10, нами выставлялся диагноз аутоиммунного хронического эндометрита. При числе клеток, экспрессирующих CD16+, CD56+ выше 10, и при числе клеток, экспрессирующих HLA-DR(II)+ от 0 до 10 в поле зрения, нами диагностировался «хронический эндометрит с аутоиммунным компонентом без активации процесса». И, наконец, при числе клеток, экспрессирующих CD16+ и HLA-DR(II)+ выше 10, и при числе клеток, экспрессирующих CD56+ от 0 до 10 в поле зрения, выставлялся диагноз «хронический эндометрит с обострением». Полученные результаты распределения пациенток обеих групп представлены нами в таблице 1. Результаты и их обсуждение Как видно из данных, приведенных в таблице, основное число женщин с трубно-перитонеальным бесплодием страдали той или иной формой хронического эндометрита. При этом 43 женщины в группе (51,1%) имели аутоиммунный хронический эндометрит, который мог быть реальным препятствием в реализации репродуктивной функции. Несколько реже встречался хронический эндометрит с аутоиммунным компонентом без активации процесса - у 18 (21,4%) женщин. Явного эндометрита, который, помимо иммуноцитохимических методов, подтверждался и гистологическим исследованием биоптатов, было 15 (17,9%) случаев. Выводы Таким образом, обобщая полученные нами результаты, можно сделать вывод о том, что при планировании протокола ЭКО проведение иммуноцитохимического исследования эндометрия необходимо, поскольку ни гормональное, ни сонографическое, ни даже гистологическое исследования не дают полного представления о патологических процессах, происходящих в эндометрии. Только комплексное обследование женщин, страдающих трубно-перитонеальным бесплодием, с учетом всех компонентов диагностического процесса позволит определить тактику её последующего ведения.

About the authors

A A VASYUHINA

Email: annavasyuhina@bk.ru

L S TSELKOVICH

Email: samaraobsgyn2@yandex.ru

References

Supplementary files