THE QUANTITATIVE ANALYSIS OF TANNINS CALCULATED ON THE CATECHIN IN THE UNDERGROUND ORGANS OF POTENTILLA ERECTA L

Abstract

The quantitative analysis of tannins based on the catechin in the underground organs of Potentilla erecta L. was performed. The possibility of using of this method for analysis of studied raw materials was assessed.

Full Text

Дубильные вещества - это высокомолекулярные фенольные соединения, широко встречающиеся в природе и обладающие фармакологической активностью (противовоспалительным и антибактериальным действием) [2]. Несмотря на то, что лекарственное растительное сырье (ЛРС), содержащее дубильные вещества, широко используется в фармацевтической практике, проблемы стандартизации данной группы биологически активных соединений (БАС) до сих пор в полной мере не решены. Согласно Государственной фармакопее (ГФ) Российской Федерации XIII издания, для количественного анализа дубильных веществ указаны следующие методы: перманганатометрия и спектрофотометрия в пересчете на пирогаллол [1]. В литературе имеются данные об определении дубильных веществ методом спектрофотометрии с использованием раствора стандартного образца танина, а также разработана методика с пересчетом на катехин для сабельника болотного и коричника китайского [3, 4, 5, 6]. На наш взгляд, использование стандартных образцов из группы гидролизуемых танинов (пирогаллола, танина) не является оптимальным подходом к анализу лекарственного растительного сырья, содержащего преимущественно конденсированные дубильные вещества, - дуб обыкновенный, черника обыкновенная, представители рода лапчатка и др. [2, 7]. Таким образом, мы считаем, что для стандартизации ЛРС вышеперечисленных растений целесообразно использовать методику, позволяющую проводить расчет на вещество конденсированной природы, в частности, катехин [4, 6]. Цель исследования: определение количественного содержания дубильных веществ в подземных органах лапчатки прямостоячей в пересчете на катехин и оценка возможности использования данного метода для анализа изучаемого рода. Материалы и методы Объектами исследования послужили промышленные образцы корневищ лапчатки прямостоячей (ООО «Лекра-сэт», г. Барнаул). Для приготовления извлечения брали 1 г измельченного сырья (точная навеска) с размером частиц до 3 мм, помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 40%, 50% и 70%-го спирта этилового. Колбу закрывали пробкой, взвешивали и присоединяли к обратному холодильнику. Нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Затем колбу охлаждали в течение 30 минут и доводили экстрагентом до исходной массы. Извлечение фильтровали через бумажный фильтр. Для соблюдения условий методики, разработанной для коричника китайского и сабельника болотного, в количественном анализе при использовании этилового спирта в концентрации 50% осуществляли измерение оптической плотности в подкисленном 50%-м этиловом спирте. Для его приготовления в мерную колбу вместимостью 100 мл помещали 20 мл 50%-го этилового спирта и 1 мл 1%-го раствора хлористоводородной кислоты, перемешивали, доводили до метки спиртом этиловым 50% и снова перемешивали. Использование спирта подкисленного позволяет подавить ионизацию фенольных гидроксилов и достичь определенного значения рH [4]. Количественную оценку содержания дубильных веществ проводили с использованием метода спектрофотометрии на приборе «Specord 40» (Analytik Jena). Результаты исследования Для количественного анализа брали 1 мл полученного извлечения, переносили в мерную колбу на 50 мл и в зависимости от использованного экстрагента доводили до метки 40%, 50% (подкисленным) или 70%-м этиловым спиртом соответственно (раствор А). Затем 1 мл раствора А переносили в мерную колбу на 50 мл и доводили до метки (раствор Б). Измеряли оптическую плотность полученного раствора Б при длине волны 279 нм. Содержание суммы дубильных веществ в лекарственном растительном сырье в процентах рассчитывали по формуле: missing image filemissing image file, где Dx - оптическая плотность испытуемого раствора; mx - навеска сырья, г; 2500 - разведение, мл; 144 - коэффициент удельного поглощения катехина [6]. Внешний вид кривой поглощения для извлечения из подземных органов лапчатки прямостоячей представлен на рисунке 1. Количественное содержание дубильных веществ в пересчете на катехин варьировало от 26,2±0,6% до 28,5±0,5% (таблица 1). Таблица 1 Результаты количественного анализа подземных органов лапчатки прямостоячей (Potentilla erecta L.) Экстрагент 40% этиловый спирт 50% этиловый спирт [6] 70% этиловый спирт 26,2±0,6% 28,5±0,5% 26,7±0,6% Из таблицы 1 видно, что нет существенных различий в расчетном содержании дубильных веществ при экстракции спиртом этиловым разных концентраций и использовании подкисленного и неподкисленного спирта этилового для измерения оптической плотности. Кроме того, 70%-й этиловый спирт является также оптимальным экстрагентом для флавоноидных структур. Следовательно, данная методика может быть использована и для расчета содержания флавоноидов в сырье. На наш взгляд, для оценки качества сырья лапчатки прямостоячей целесообразнее использовать показатель «дубильные вещества в пересчете на катехин», чем «дубильные вещества в пересчете на танин». Таким образом, можно рекомендовать данный метод для анализа сырья лапчатки прямостоячей, так как полученные результаты соответствуют пределу содержания дубильных веществ, указанному в фармакопейной статье - не менее 20%. Заключение Таким образом, определено количественное содержание дубильных веществ в пересчете на катехин в подземных органах лапчатки прямостоячей. Установлено, что использование в качестве экстрагента спирта этилового 40%-го или 70%-го (вместо 50%-го, указанного в методике) не оказывает значительного влияния на результаты количественного определения дубильных веществ в пересчете на катехин. Кроме того, полученные результаты соотносятся с требованиями ГФ РФ XIII по содержанию дубильных веществ - «дубильные вещества в пересчете на танин - не менее 20%». Следовательно, качество сырья можно оценивать, используя менее трудоемкий метод в пересчете на катехин.