DEVELOPMENT OF APPROACHES TO THE STANDARDIZATION OF THE RHIZOMES AND ROOTS OF Urtica dioica L

Full Text

Крапива двудомная (Urtica dioica L., сем. крапивные Urticaceae) - одно из самых известных и популярных лекарственных растений, входящих в мировые фармакопеи, а также в Государственную фармакопею нашей страны [3, 4, 5, 8, 9]. В России лекарственным сырьем крапивы двудомной являются листья, которые применяются в качестве источника кровоостанавливающих средств. За рубежом корневища с корнями крапивы используют для получения лекарственных препаратов, обладающих противоопухолевой активностью («Простафортон», «Базотон») и применяемых для лечения аденомы предстательной железы [4]. Эффективная терапия аденомы предстательной железы является актуальной проблемой современной медицины. Несмотря на положительный зарубежный опыт, в нашей стране препараты на основе корневищ с корнями крапивы двудомной не производятся. Это связано с тем обстоятельством, что в РФ отсутствует фармакопейная статья на указанный вид сырья. Следовательно, подходы к стандартизации данного вида сырья до сих пор не разработаны. Следует отметить, что химический состав корневищ с корнями крапивы двудомной достаточно богат. В данном сырье содержатся стерины (β-ситостерин, эргостерин), лектины, полисахариды, аминокислоты и другие вещества [5]. Вместе с тем, до сих пор остается неясным вопрос относительно того, какая именно группа биологически активных соединений (БАС) корневищ с корнями крапивы обусловливает специфическое антинеопластическое действие, характерное для препаратов на основе данного сырья. Большинство авторов склоняются к мысли, что этим действием обладают вещества стероидной природы [1, 4]. Следует отметить, что химический состав корневищ крапивы до сих пор изучен в недостаточной степени. Ранее для препаратов из корневищ с корнями крапивы двудомной нами была обнаружена диуретическая активность [1]. В ходе проведенных хронических экспериментов на крысах было установлено, что густой экстракт корневищ с корнями крапивы двудомной в дозе 10 мг/кг за 24 ч опыта умеренно стимулирует диурез и салурез. Диуретические свойства данного препарата, на наш взгляд, будут способствовать уменьшению отеков и выведению токсинов из организма, а препарат будет оказывать комплексное воздействие на организм. Цель исследования: разработка подходов к стандартизации корневищ с корнями крапивы двудомной как перспективного источника противоопухолевых лекарственных средств. В качестве объекта исследования нами использовались образцы сырья корневищ с корнями крапивы двудомной, заготовленные в период с 2011 по 2014 гг. на территории Самарской области. С целью выделения основных БАС из спиртового экстракта корневищ с корнями крапивы двудомной осуществляли разделение веществ методом адсорбционной колоночной хроматографии. Был использован силикагель марки «для хроматографии», при этом в качестве элюента использовали хлороформ и смесь хлороформа и этилового спирта в различных сочетаниях. Процесс разделения и состав фракций контролировался с помощью метода тонкослойной хроматографии (ТСХ). В результате ТСХ-анализа были отобраны фракции, в которых детектировался компонент стериновой природы. Это показывает возможность использования ТСХ для целей качественного анализа корневищ с корнями крапивы двудомной и препаратов на их основе. Путем перекристаллизации и дополнительной гель-хроматографии нами получено кристаллическое вещество белого цвета, не растворимое в воде, растворимое в спирте этиловом 96%. При УФ-спектроскопии в среде концентрированной серной кислоты вещество имеет выраженный максимум поглощения при λ=328±2 нм. Спектроскопия полученного вещества в среде этилового спирта (96%) позволила выявить его оптическую прозрачность, что тоже характерно для веществ стериновой природы. Полученное вещество было идентифицировано на основании данных УФ-, 1Н-ЯМР-спектроскопии (Bruker AM300 SF=300.13 MHz) и масс-спектроскопии (m/z 398) как эргостерин. Анализ литературных данных показывает, что единых подходов к стандартизации корневищ с корнями крапивы двудомной в мире не существует. Даже в том случае, когда корневища с корнями крапивы двудомной являются фармакопейным видом сырья, методики качественного и количественного анализа могут отсутствовать. Стандартизация сырья осуществляется только по морфолого-анатомическим признакам в Американской травяной фармакопее, в монографии ВОЗ по отдельным лекарственным растениям. На наш взгляд, в корневищах с корнями крапивы двудомной целесообразно определять сумму стеринов, характерную для данного сырья. Поэтому за основу нашего метода количественного анализа суммы стериновых соединений корневищ с корнями крапивы двудомной был взят метод, основанный на взаимодействии концентрированной серной кислоты с тритерпеновыми соединениями [2, 7]. Однако данная методика была нами оптимизирована путем исключения ряда стадий, что значительно сокращает время анализа, а также повышает точность метода. В результате проведенных исследований было определено, что наиболее эффективным методом количественного анализа для суммы стериновых компонентов в корневищах с корнями крапивы двудомной является прямая спектрофотометрия. Содержание суммы стеринов в корневищах с корнями крапивы двудомной, по нашим данным, варьирует от 2,07±0,03 % до 3,37±0,05 %. Таким образом, наиболее эффективным подходом к стандартизации корневищ с корнями крапивы двудомной является определение стериновых соединений. Методикой качественного анализа была выбрана тонкослойная хроматография, методикой количественного анализа явилась прямая спектрофотометрия.

About the authors

E A BALAGOZYAN

Email: mredgar@mail.ru

V A KURKIN

Email: Kurkinvladimir@yandex.ru

O E PRAVDIVCEVA

V M RIZHOV

References

Supplementary files