THE STUDY OF PHENOLIC COMPOUNDS OF AERIAL AND UNDERGROUND ORGANS OF POTENTILLA RECTA L

Abstract

The qualitative and quantitative analyses of flavonoids and tannins contained in aerial and underground organs of Potentilla recta L. were done by using of thin layer chromatography and spectrophotometry. The quantitative content of the target biologically active compounds was determined.

Full Text

Представители рода лапчатка (Potentilla L.) содержат широкий спектр биологически активных соединений (БАС), обеспечивающих разнообразие фармакологических эффектов, при этом наибольший интерес представляют БАС фенольной природы. На территории Российской Федерации официнальным видом является только лапчатка прямостоячая (Potentilla erecta L.), другие представители рода используются в народной медицине, для производства биологически активных добавок и изучены в меньшей степени [2, 4, 8]. Так, одним из перспективных, но малоизученных видов рода лапчатка является лапчатка прямая (Potentilla recta L.) [6, 8]. Цель исследования: изучение фенольного состава надземной и подземной части лапчатки прямой (Potentilla recta L.). Материалы и методы Объектами исследования служили образцы корневищ и корней лапчатки прямой, заготовленные на территории Самарской области с июня по август 2014 года. Сушка сырья проводилась естественным способом. Для проведения качественного химического анализа использовали хроматографию в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» [3, 7]. Хроматографическое разделение проводили на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» с использованием следующей системы растворителей: н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2). Детекцию фенольных соединений проводили в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 и 366 нм, а также обработкой хроматографических пластинок растворами диазобензолсульфокислоты (ДСК). Количественную оценку содержания целевых веществ проводили с использованием метода дифференциальной спектрофотометрии на приборе «Specord 40» (Analytic Jena). Результаты исследования На начальном этапе исследования был проведен качественный анализ надземной и подземной части лапчатки прямой, в качестве целевых групп БАС рассматривались дубильные вещества и флавоноиды. Качественный анализ дубильных веществ в корневищах и корнях включал в себя пробирочную реакцию водного извлечения с железоаммониевыми квасцами. Флавоноидный комплекс идентифицировали на хроматографических пластинках в видимом и УФ-свете (фиолетовая флуоресценция при λ=254 нм), а также по реакции диазосочетания. Флавоноиды проявлялись в виде последовательности желто-оранжевых пятен с различными значениями Rf (рис. 1). А Б Рис. 1. Хроматограммы в системе растворителей н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (4:1:2): А - извлечение из подземных органов лапчатки прямой; Б - извлечение из надземных органов лапчатки прямой. Обозначения: 1 - извлечение на 40% спирте этиловом; 2 - извлечение на 70% спирте этиловом; 3 - извлечение на 95% спирте этиловом; 4 - извлечение на воде очищенной; 5 - ГСО рутин; 6 - кверцетин; 7 - цинарозид Оценка содержания флавоноидного состава подземных органов лапчатки прямой для извлечения на 70% спирте была проведен нами ранее [6]. Результаты анализа свидетельствуют, что количественное содержание флавоноидов в пересчете на цинарозид варьирует 0,07% до 0,15%. Анализ флавоноидов травы лапчатки прямой проводили для извлечений на 40% и 70% этаноле, в случае которых при добавлении раствора алюминия хлорида наблюдался батохромный сдвиг кривой поглощения (рис. 2). При этом содержание флавоноидов в надземной части лапчатки прямой (также в пересчете на цинарозид) варьирует от 0,33% до 0,39%. Б Рис. 2. Электронный спектр поглощения спиртовых извлечений из травы лапчатки прямой (Potentilla recta L.): А - извлечение на 40% этиловом спирте; Б - извлечение на 70% этиловом спирте. Обозначения: 1 - исходный раствор; 2 - раствор с добавлением AlCl3 Количественный анализ дубильных веществ проводили методом спектрофотометрии в сравнении с раствором танина [5]. Б Рис. 3. Электронный спектр поглощения водных извлечений из сырья Potentilla recta L.: А - корневища и корни лапчатки прямой; Б - надземная часть лапчатки прямой Количественное содержание дубильных веществ в траве лапчатки прямой, определенное данным методом, варьируется от 3,13% до 3,44%. Количество дубильных веществ в подземных органах, рассчитанное методом спектрофотометрии, в исследованном образце составило от 1,36% до 1,89%. При этом дополнительно оценка содержания дубильных веществ в корневищах и корнях лапчатки прямой осуществлялась фармакопейным методом, заявленным для корневищ и корней лапчатки прямостоячей [2]. По результатам перманганатометрии рассчитанное количество составило от 7,08% до 7,55%. Заниженный результат содержания дубильных веществ в корневищах и корнях лапчатки прямой, определенных методом спектрофотометрии, предположительно связан со стадией отстаивания перед фильтрацией приготовленного извлечения, в процессе которой часть дубильных веществ выпадает в осадок. Метод перманганатометрии в свою очередь дает завышенные результаты в связи с тем, что наряду с дубильными веществами в комплексе определяются другие окисляемые фенольные соединения. Следовательно, указанные методы требуют модификации с целью обоснования целесообразности использования в анализе изучаемого сырья. Заключение Таким образом, был изучен фенольный состав подземных и надземных органов лапчатки прямой (Potentilla recta L.) методами тонкослойной хроматографии, спектрофотометрии и титриметрии. Было рассчитано количественное содержание флавоноидов и дубильных веществ в изучаемом растении. В процессе исследования было обнаружено несоответствие в рассчитанных результатах содержания дубильных веществ в подземных органах, полученных методами спектрофотометрии и перманганатометрии. Это свидетельствует о необходимости модификации методик с учетом особенностей сырья.