STUDY ON THE ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF the THICK SALVIA OFFICINALIS LEAF EXTRACT IN COMBINATION WITH VARIOUS SUBSTANCES IN ORDER TO MAKE A MEDICINE FOR APPLYING IN GYNECOLOGY

Full Text

Актуальность Инфекционно-воспалительные заболевания женских половых органов являются доминирующими в структуре гинекологических заболеваний [1]. Высокую социальную значимость и актуальность изучения данной патологии определяет то, что нередко инфекционно-воспалительные гинекологические заболевания возникают в молодом возрасте, довольно часто принимают хроническое течение, приводят к значительным нарушениям менструальной, половой, репродуктивной функций женского организма [11]. Все воспалительные процессы женских гениталий делят на неспецифические и вызванные инфекциями, передающимися половым путем [3]. Неспецифические воспалительные процессы связаны с условно-патогенными возбудителями (кишечная палочка, грибы Кандида, энтерококки, стафилококки, протеи, стрептококки, синегнойная палочка). В зависимости от характера микрофлоры влагалища, кислотного титра и количества лейкоцитов выделяют четыре степени чистоты влагалища. Первые две степени, которые характеризуются наличием палочек Дедерлейна, эпителиальных клеток, появлением лейкоцитов и граммположительных диплококков (вторая степень), а также кислой средой во влагалище, являются физиологическими. Третья и четвертая степени чистоты влагалища, как правило, свидетельствуют о наличии воспалительного процесса урогенитального тракта, при этом среда во влагалище изменяется на щелочную, происходит значительное увеличение количества лейкоцитов, присоединение патогенных микроорганизмов [2]. Таким образом, можно предположить, что возникновение, степень тяжести, а также интенсивность развития инфекционно-воспалительных гинекологических заболеваний напрямую зависят от качественного и количественного состава микрофлоры. Ключевыми аспектами в лечении рассматриваемых патологий можно назвать эрадикацию патогенной микрофлоры, купирование воспаления и предупреждение поздних осложнений. Немало важным направлением в лечении данных заболеваний является снижение риска нежелательных реакций, таких как резистентность штаммов микроорганизмов, дисбактериоз, аллергические реакции [10]. В настоящее время альтернативой использованию химических антибактериальных препаратов для местного применения является использование природных антимикробных веществ в интравагинальных лекарственных формах. Препараты на растительной основе ценят за ряд преимуществ: физиологичность, эффективность и безопасность при длительном лечении, минимальные побочные эффекты. Среди растительных экстрактов выраженной антимикробной активностью обладает густой экстракт листьев шалфея лекарственного. Сегодня препараты из экстрактов шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) широко применяют при лечении разных заболеваний [8]. Однако в литературе отсутствуют данные об исследованиях и разработке лекарственного препарата на основе густого экстракта листьев шалфея лекарственного для местного применения в гинекологии. Цель исследования - оценка антимикробной активности густого экстракта листьев шалфея лекарственного различной концентрации, а также модельных смесей густого экстракта листьев шалфея лекарственного с различными веществами для дальнейшего обоснования состава суппозиториев вагинальных, применяемых в гинекологической практике. Материалы и методы Густой экстракт листьев шалфея лекарственного для исследования готовили, ссылаясь на методику, разработанную группой ученых НФаУ (г. Харьков) и ЛГМУ (г. Луганск). Стадии получения экстракта включали в себя экстракцию растительного сырья этилацетатом, фильтрацию, упаривание, очищение путем растворения в трехкратном количестве гексана, с добавлением 4 % раствора сульфата цинка и сушкой [4-7]. В качестве источника растительного сырья был использован шалфей лекарственный (Salvia officinalis L.), произрастающий в условиях Донбасса. Листья шалфея лекарственного были собраны и высушены согласно требованиям Государственной фармакопеи [12]. На базе СП «Фармацевтическая фабрика» ГУП ЛНР «Лугмедфарм» было проведено экспериментальное микробиологическое исследование in vitro. Антимикробную активность образцов изучали общепринятым в микробиологической практике методом диффузии в агар в модификации колодцев, основанным на способности активно действующих веществ диффундировать в агаровую среду, которую предварительно засевают микробной культурой. Согласно требованиям нормативной документации в качестве тест-культур использовали стандартные штаммы АТСС (American Type Culture Collection - Американская коллекция типовых культур): Staphylococcus aureus АТСС 6538, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027, Bacillus subtilis АТСС 6633, Сandida albicans AТСС 885-653. На основе 96 % спирта этилового для изучения зависимости антимикробной активности от концентрации активно действующего вещества были приготовлены растворы с различной концентрацией экстракта листьев шалфея лекарственного: 0,25, 0,5, 0,75, 1,0, 1,25 %. С целью исследования синергической зависимости веществ на основе 96 % спирта этилового приготовили 1 и 0,5 % растворы бензойной и лимонной кислот, а также модельные смеси экстракта листьев шалфея лекарственного с данными кислотами в различных комбинациях. В слое питательного агара готовили лунки с помощью стерильного пробойника диаметром 8 мм. Испытуемые образцы вносили по 0,2 мл в лунки с помощью стерильных одноразовых шприцев. После внесения препаратов чашки Петри выдерживали при комнатной температуре в течение 1 часа, а затем помещали в термостат и инкубировали в течение 18 часов при температуре 35 °С. Об уровне антимикробной активности экспериментальных образцов судили по диаметру зоны задержки роста микроорганизмов вокруг лунки после окончания инкубации [9]. Результаты и их обсуждение Результаты определения антимикробной активности исследуемых образцов отражены в таблице. Результаты эксперимента свидетельствуют о том, что наиболее чувствительны к исследуемым образцам Staphylococcus aureus и Bacillus subtilis. Как видно (табл., п. 1-5), при увеличении концентрации экстракта в растворе отмечено усиление антимикробной активности. Выраженную антимикробную активность оказывает экстракт листьев шалфея лекарственного в 1 % разведении. Однако дальнейшее повышение концентрации действующего вещества нецелесообразно, так как повышение антимикробного эффекта незначительно. В ходе эксперимента была изучена синергическая зависимость экстракта листьев шалфея лекарственного, лимонной и бензойной кислот. Исследования 1 и 0,5 % растворов данных кислот показали отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов (табл., п. 12-15). Также из таблицы видно (п. 7-10), что добавление лимонной или бензойной кислот не усиливает антимикробный эффект исследуемого экстракта. Однако совместное использование 1 % спиртового раствора экстракта листьев шалфея лекарственного, 1 % растворов лимонной и бензойной кислот проявляет самую высокую активность в отношении Staphylococcus aureus и Candida albicans (табл., п. 11), а значит, данное сочетание веществ является наиболее перспективным для введения в состав суппозиториев вагинальных с антибактериальным и противогрибковым эффектами. Выводы 1. Проведенными исследованиями подтверждено наличие синергической совместимости между исследуемыми веществами: экстрактом листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.), лимонной и бензойной кислот. 2. Определенны оптимальные концентрации активно действующих веществ для введения в состав вагинальных суппозиториев с целью достижения максимальной антимикробной и противогрибковой активности. Конфликт интересов отсутствует. Таблица / Table Антимикробная активность исследуемых образцов (р < 0,05; n = 6) Antimicrobial activity of the test samples (р < 0,05; n = 6) № образца Состав образца Наименование микроорганизмов Staphylococcus aureus ATCC 6538 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella abony NCTC 6017 Candida albicans ATCC 885-653 Bacillus subtilis ATCC 6633 Зона задержки роста, мм 1 Экстракт листьев шалфея лекарственного 0,25 % 16,2 ± 0,8 8,0 ± 0,1 - - 9,0 ± 0,2 19,8 ± 0,3 2 Экстракт листьев шалфея лекарственного 0,5 % 17,3 ± 0,4 10,2 ± 0,1 - - 9,5 ± 0,6 20,0 ± 0,1 3 Экстракт листьев шалфея лекарственного 0,75 % 19,4 ± 0,3 9,0 ± 0,3 - - 10,8 ± 0,2 20,0 ± 0,1 4 Экстракт листьев шалфея лекарственного 1 % 20,7 ± 0,4 9,2 ± 0,3 - - 10,0 ± 0,3 20,2 ± 0,6 5 Экстракт листьев шалфея лекарственного 1,25 % 19,6 ± 0,5 10,2 ± 0,5 - 9,1 ± 0,1 11,1 ± 0,2 20,2 ± 0,1 6 Спирт этиловый 96 % - - - - - - 7 Экстракт листьев шалфея лекарственного 1 % Лимонная кислота 1 % 19,0 ± 0,2 8,1 ± 0,1 8,3 ± 0,2 - 9,1 ± 0,3 15,2 ± 0,2 8 Экстракт листьев шалфея лекарственного 1 % Лимонная кислота 0,5 % 20,1 ± 0,4 8,4 ± 0,1 9,0 ± 0,3 8,4 ± 0,1 9,9 ± 0,1 20,0 ± 0,3 9 Экстракт листьев шалфея лекарственного 1 % Бензойная кислота 1 % 19,0 ± 0,2 8,0 ± 0,1 - - 11,2 ± 0,3 17,0 ± 0,1 10 Экстракт листьев шалфея лекарственного 1 % Бензойная кислота 0,5 % 18,1 ± 0,3 8,1 ± 0,1 8,0 ± 0,1 8,2 ± 0,1 12,3 ± 0,2 20,1 ± 0,2 11 Экстракт листьев шалфея лекарственного 1 % Лимонная кислота 1 % Бензойная кислота 1 % 25,3 ± 0,3 11,0 ± 0,3 11,2 ± 0,3 13,1 ± 0,1 16,5 ± 0,4 16,4 ± 0,3 12 Лимонная кислота 1 % - - - - - - 13 Бензойная кислота 1 % - - - - - - 14 Лимонная кислота 0,5 % - - - - - - 15 Бензойная кислота 0,5 % - - - - - - Примечание. Исходный инокулум по стандарту Мак-Фарланда на денсиляметре - 2,0, концентрация микроорганизма 6 · 108; диаметр зоны задержки роста микроорганизма меньше 14-15 мм - устойчивый штамм; 15-18 мм - слабо чувствительный штамм; более 18 мм - чувствительный штамм; «-» отсутствие зоны задержки роста. Окончание табл. / End of table

About the authors

Ye A Perederii

Lugansk State Medical University n.a. Saint Luke

Email: oef.kafedra@yandex.ru
Candidate of Pharmacy, Associate Professor, Head of Department of Drug Technology, Organization and Economics of Pharmacy Lugansk, Lugansk People’s Republic

I A Yunusova

Lugansk State Medical University n.a. Saint Luke

Email: i.a.tokovaya@gmail.com
Postgraduate student, Department of Drug Technology, Organization and Economics of Pharmacy Lugansk, Lugansk People’s Republic

References

Supplementary files