NATURE OF METABOLIC AND FUNCTIONAL CONDITION OF CELLULAR FACTORS OF CONGENITAL IMMUNITY IN RHINOSURGICAL PATIENTS IN EARLY POST-OPERATIVE PERIOD

Full Text

Введение По данным большинства оториноларингологов, занимающихся ринохирургией, девиация носовой перегородки (НП) регистрируется у 68-90% взрослого населения и достигает 25% от общей назальной патологии [1]. Нередко выраженные искривления НП, вызывая нарушение носового дыхания, приводят к морфологическим изменениям и функциональным нарушениям факторов антимикробной защиты слизистой оболочки полости носа [2]. Наблюдаемый дисбаланс мукоцилиарного клиренса сопровождается дополнительно цефалгиями различной степени, повышает риск возникновения синуситов [3]. При этом значимые патологические проявления искривлений НП связаны с нарушением аэродинамики полости носа [4]. Изменения потока воздушной струи препятствуют нормальному функционированию слизистой оболочки полости носа, эвакуации назального секрета, дисфункции евстахиевых труб и предопределяют возможность возникновения острых и хронических синуситов и отитов [5]. В этом контексте коррекция смещенной носовой перегородки востребована и является одним из самых распространенных хирургических вмешательств в практике врачей-оториноларингологов. Как правило, риносептопластика дополняется коррекцией вторично видоизмененных носовых раковин (подслизистая вазотомия, частичная конхотомия, кон-хоплексия и т.д.) и требует наложения тампонов [6]. Длительное нахождение тампонов в носу приводят к неконтролируемым патофизиологическим изменениям слизистой оболочки полости носа [7]. Создаются благоприятные условия для бактериального инфицирования, снижаются факторы колонизационной резистентности и антимикробной защиты слизистых оболочек, отмечается дисфункция функционально-метаболического статуса нейтрофильных гранулоцитов (НГ) в назальном секрете [8]. Роль нейтрофильных гранулоцитов в послеоперационном периоде особенно важна, поскольку доказана их ключевая роль в развитии воспаления слизистых оболочек полости носа и перехода в хронические формы [9]. Реализация протективных функций клеточной популяции обеспечивается механизмами внутри и вне клеточной бактерицидности. В ходе реализации фагоцитарной реакции включается захват и поглощение чужеродных объектов с выделением содержимого биоцидных гранул во внеклеточное пространство и формируются нейтро-фильные внеклеточные ловушки [10]. Дисфункции НГ определяют вектор развития инфекционного процесса на слизистых оболочках носа в ранний послеоперационный период [11]. ■ цель Изучить функционально-метаболический статус клеточных факторов врожденного иммунитета назального секрета ринохирургических больных в ранний послеоперационный период с тампонадой полости носа 24 часа и более. ■ материал и методы Период проведения исследования с января 2017 по июнь 2017 г. на базе городской клинической больницы №1. Для проведения исследования были сформированы группы, стратифицированные между собой по возрасту. 30 пациентов в возрасте 35,21 ±4,28 лет были прооперированы по поводу искривления носовой перегородки. В качестве группы сравнения использованы показатели назального секрета 30 здоровых в возрасте 36,11±3,38 лет, которым риносептопластика не проводилась. Исследование иммунного статуса назального секрета включало подсчет качественного и количественного состава лейкоцитов, анализ фагоцитарной активности НГ назального смыва, кисло-родзависимый метаболизм НГ в тесте нитросинего тетразоля(НСТ-тест). Назальный смыв, помещенный в 1,0 мл физиологического раствора, перемешивался, затем 0,2 мл полученной смеси помещали в одноразовую пробирку с 0,02 мл 1% раствором трипанового синего с целью определения общего количества лейкоцитов и процента их жизнеспособности. Общее количество лейкоцитов в назальном секрете нами был определен следующим образом: Х= (А х 4000х106хВ) /n, где X - количество лейкоцитов в 1 л; n - количество малых квадратов счетной камеры Горяева; A - количество лейкоцитов назального смыва в n квадратах; B - частное от деления суммы объемов назального смыва и физиологического раствора (1,0 мл) на объем назального смыва. Для иммунологических исследований использовали концентрацию нейтрофиль-ных гранулоцитов -1х106/мл. Жизнеспособность НГ определяли с помощью окраски клеток 1% раствором трипанового синего. Для чего 0,2 мл взвеси НГ в физиологическом растворе (концентрация 5х106 клеток/мл) смешивали с 0,02 мл 1% раствора трипанового синего, клетки ресуспензировали и помещали в камеру Горяева, где исследовали в световом микроскопе. Оценивали трипанонегативные живые (прозрачные) и трипано-позитивные нежизнеспособные (фиолетовые) НГ. Подсчет производили на 100 НГ, результат выражали в процентах. Способность нейтрофилов, находящихся в назальном смыве к участию в фагоцитарной реакции проводили на модели поглощения частиц латекса. Для этого 0,2 мл суспензии нейтрофильных гранулоцитов назального смыва смешивали с 0,02 мл взвеси моно-дисперсного латекса диаметром 1,7 мкм (10 частиц/ мл), (С-Петербург). Исследование внутриклеточного кислородзависимого метаболизма проводили, используя НСТ-тест. В исследовании определяли способность нейтрофилов отвечать повышением метаболической активности на стимуляцию частицами латекса. От пациентов было получено письменное добровольное информированное согласие на проведение оперативного вмешательства и участие в исследовании. План обследования соответствовал положениям Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации (ВМА) последнего пересмотра (Сеул, 2008), с учетом разъясняющего примечания к пункту 29, внесенного Генеральной Ассамблеей ВМА (Вашингтон, 2002). Функционально-метаболический статус нейтрофильных гранулоцитов назального секрета был исследован в иммунологическом отделе НИИ иммунологии ФГБОУ ВО ЮУГМУ г. Челябинска. ■ статистические исследования Статистический анализ данных проводился с использованием непараметрических критериев Манна- Уитни, при помощи пакета статистических программ STATISTICA 12.5, статистически достоверными считались значения p <0,05. ■ результаты и обсуждение В назальном секрете прооперированных больных преобладающими клеточными элементами были НГ, содержание которых практически вдвое превышало показатели непрооперированных людей (р <0,05): Клеточный состав назального секрета Прооперированные пациенты (n=30) Контрольная группа (n=30) % % Нейтрофильные гранулоциты 95,15±0,15* 27,31±0,4 Лимфоциты 2,18±0,16* 3,05±0,04 Эпителиальные клетки 2,19±0,05* 24,18±0,42 Макрофаги 4,44±0,03* 1,28±0,11 Эозинофилы 0,08±0,02* 0,01±0,01 Примечание: * - статистически значимые отличия между показателями группы прооперированных пациентов и не прооперированных (р <0,05), Таблица 1. Содержание клеточных факторов назального секрета пациентов в раннем послеоперационном периоде 95,5±0,1% и 27,1 ±0,4% соответственно. По нашему мнению, данный процесс связан с физиологической ролью НГ в очаге воспалительной реакции, на фоне хирургического вмешательства (таблица 1). При изучении функционально-метаболического статуса НГ по их способности поглощать микросферы латекса были выявлены выраженные нарушения поглотительной способности и функции переваривания, проявляющиеся в снижении активности (р<0,05) и интенсивности фагоцитоза (р<0,05) у прооперированных пациентов. Исследование биоцидных возможностей НГ в НСТ-тесте выявило снижение показателей спонтанного НСТ-теста НГ в абсолютных и относительных величинах по сравнению с показателями здоровых людей (таблицы 2, 3). Таким образом, у ринохирургических больных, прооперированных по поводу искривления носовой перегородки, в ранний послеоперационный период с тампонадой 24 часа и более наблюдаются нарушения функциональной активности НГ. Они выражаются в увеличении относительного содержания НГ, повышении абсолютного и относительного содержания жизнеспособных НГ и их лизосомальной активности, снижении биоцидных показателей НСТ-тесте, активности и интенсивности фагоцитоза. Это говорит о наличии выраженных дисфункций клеточных факторов местной противоинфекционной защиты и, по нашему мнению, является свидетельством истощения адаптационно-приспособительных механизмов НГ, снижения их резистентности и способности к осуществлению противомикробной защиты, что в конечном итоге может приводить к развитию длительного отека и бактериальной патологии. Показатели функциональной активности НГ назального секрета Прооперированные пациенты (n=30) Контрольная группа^=30) Лизосомальная активность НГ, у.е. 59,65±098* 29,40±0,23 Активность фагоцитоза НГ, % 41,36±0,24* 53,49±0,15 Интенсивность п П7С . 1,67±0,04* 2,36±0,076 фагоцитоза НГ, у.е. Примечание: * - статистически значимые отличия между показателями группы прооперированных пациентов и не прооперированных (р <0,05). Таблица 2. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов назального секрета пациентов в раннем послеоперационном периоде (M±m) Показатели функциональной активности НГ назального секрета в НСТ-тесте Прооперированные пациенты (n=30) Контрольная группа^=30) НСТ-тест НГ спонтанный, % 22,18±0,24* 28,18±0,12 НСТ-тест НГ спонтанный, у.е. 0,15±0,01* 0,35±0,003 НСТ-тест НГ индуцированный, % 29,94±0,11* 54,67±0,13 НСТ-тест НГ индуцированный, у.е. 0,36±0,01* 0,66±0,01 Примечание: * - статистически значимые отличия между показателями группы прооперированных пациентов и не прооперированных (р<0>05), НСТ-тест-тест восстановления нитросинего тетразолия, Таблица 3. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов назального секрета пациентов в раннем послеоперационном периоде в НСТ-тесте ■ вывод На ранних стадиях послеоперационного периода, у пациентов, перенесших внутриносовые хирургические вмешательства, в назальном секрете изменяется функционально-метаболический статус клеточных факторов врожденного иммунитета. Регистрируется повышение количества жизнеспособных нейтрофильных гранулоцитов в 1,24 раза, усиление их лизосомальной активности в 3,95 раза, снижение активности в 1,25 раза и интенсивности фагоцитоза в 1,65 раз, угнетение биоцидных свойств в 2,35 раза (по данным спонтанного НСТ-теста), в 2,2 раза (по данным индуцированного НСТ-теста).

About the authors

A M Korkmazov

South Ural State Medical University

Email: korkmazov09@gmail.com
research assistant at the Department of Otorhinolaryngology of South Ural State Medical University. South-Ural State Medical University, 64 Vorovskogo st., Chelyabinsk, Russia, 454092

O A Gizinger

South Ural State Medical University

PhD, Associate Professor, professor at the Department of Microbiology, Virology, Immunology and Clinical Laboratory Diagnostics of South Ural State Medical University.

M Yu Korkmazov

South Ural State Medical University

Email: korkmazov74@gmail.com
PhD, Professor, Head of the Department of Otorhinolaryngology of South Ural State Medical University.

References

Supplementary files