The study of protein functioning in a cell cannot be performed by analyzing their content in the cell. The most commonly used method of analysis, western blotting, cannot always be used due to the impossibility of obtaining antibodies that specifically recognize the protein of interest. At the same time, western blotting is a semi-quantitative method of analysis and does not allow determining the exact content of protein in the cell. In this work, we used the protein complementation method for the qualitative and quantitative assessment of the hTERP protein content in the cell. Using genome editing, a HiBiT appendage was introduced to the C-terminus of the hTERP protein, the complementation of which with LgBiT restores active luciferase. As a result, we determined the hTERP protein content in the HEK293T cell line.
Изучение функционирования белков в клетке невозможно без анализа их содержания в клетке. Наиболее используемый метод анализа вестерн-блоттингом не всегда может быть использован из-за невозможности получить антитела, специфично узнающие белок интереса. В то же время вестерн-блоттинг является полуколичественным методом анализа и не позволяет определить точное содержание белка в клетке. В данной работе мы применили метод комплементации белков для качественной и количественной оценки содержания белка hTERP в клетке. При помощи редактирования генома на С-конец белка hTERP был введен довесок HiBiT, комплементация которого с LgBiT восстанавливает активную люциферазу. В результате мы определили содержание белка hTERP в клетке линии НЕК293Т.