CLINICAL AND MORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS AND PROGNOSTIC SIGNIFICANCE OF THE CONTENTS OF PD-ECGF, TGF-β, KI67 IN ENDOMETRIUM AT LARGE UTERINE LEIOMYOMA

Full Text

Введение Лейомиома матки (ЛММ) больших размеров - доброкачественная опухоль с уницентричным и мультицентричным характером роста, при которой размеры матки достигают 12-недель- ной беременности и более, что может быть опре- делено пальпаторно. При этом объем матки с узлами ЛММ составляет не менее 450 см3 по данным УЗИ, а при солитарных узлах их диа- метр превышает 6 см [1]. Развитие и рост ЛММ обусловлены множе- ством факторов, в том числе теми, которые про- дуцируются клетками эндометрия. В генезе ЛММ важную роль играют изменения иммуно- логической реактивности организма, особенно при наличии хронических очагов инфекции, изменении гормонального фона и цитокино- вых воздействий [1]. Рост ЛММ также зависит от уровня гормонов яичников [3]. Кроме того, в росте ЛММ участвуют такие факторы, как цитокины и факторы роста, через которые гормоны яичников и эндометрий могут оказывать сти- мулирующее воздействие на рост ЛММ [5], что может быть установлено по экспрессии в ткани эндометрия биомаркеров, например, таких как Ki67, ТGFβ, PD-ECGF и других [2]. Эстроген и прогестерон могут регулировать экспрессию генов ряда цитокинов и факторов роста, кото- рые в свою очередь могут изменять транскрип- цию других генов. Результатом такой аномаль- ной продукции цитокинов и факторов роста может быть увеличение пролиферации клеток, накопление внеклеточного матрикса, или ком- бинация этих явлений [4]. Взаимодействие между ЛММ, миометрием и аутологичным эндометрием также осуществля- ется на основании продукции цитокинов этими тканями, таких как факторы роста, их рецепторы, пролиферация, ангиогенез. По данным лите- ратуры, у пациенток с ЛММ обнаруживается гиперплазия эндометрия в 10-15% случаев [2]. При этом, как ЛММ может стимулировать изме- нение эндометрия, так и эндометрий может вли- ять на рост и развитие ЛММ [6]. Таким образом, патогенез ЛММ сложен и недостаточно изучен, что не позволяет осущест- влять прогнозирование развития ЛММ боль- ших размеров. Эндометрий может быть наибо- лее удобным объектом такого прогнозирования, так как является доступным объектом в диагно- стике заболеваний матки, изменений его цито- кинового профиля, взаимосвязанного с ростом ЛММ. Цель исследования: прогнозирование раз- вития ЛММ больших размеров на основании иммуногистохимического исследования Ki67, ТGF-β, PD-ECGF в эндометрии. Материал и методы исследования В исследование включены 54 пациентки, обра- тившиеся в ФГБУ «Научный центр акушерства и гинекологии, перинатологии им. В.И. Кулакова» г. Москва в период с 2012 по 2014 год. Средний возраст больных при исследовании колебался от 25 до 57 лет и составил 41,86±8,1 год. При обращении в клинику всем пациентам проводили общеклиническое обследование, уль- тразвуковое исследование органов малого таза с определением размеров и расположения узлов миомы. Пациенткам был проведен различный объем оперативного лечения в зависимости от возраста, сопутствующей генитальной и экстра- генитальной патологии (экстирпация матки с и без придатков, миомэктомия различными досту- пами) с последующей морфологической вери- фикацией диагноза, дополненной иммуноги- стохимическим исследованием маркеров. Полу- ченный в результате оперативных вмешательств материал исследовали в отделении патоморфо- логии №1 ФБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинаталогии им. В.И. Кула- кова», под руководством проф. Е.А. Коган. Все пациентки были разделены на две группы; основная - с ЛММ больших размеров, миома- тозные узлы больше 6 см в диаметре и контроль- ная - с ЛМ малых размеров, менее 4 см в диаме- тре. Каждая группа была разделена на две под- группы по возрасту: женщины моложе 45 лет и пациентки от 46 лет (I а,б, II а,б). Критерием исключения явилось наличие указаний на пато- логию эндометрия у пациенток (гиперплазия эндометрия, хронический эндометрит и полипы эндометрия). Материал фиксировался в 10% забуференном формалине, заливался в пара- фин. Серийные парафиновые срезы толщиной 4 мкм окрашивались гематоксилином и эозином, а также использовались для иммуногистохими- ческих реакций. Имунногистохимически определяли экс- прессию Кi67 (Dako в разведении 1:100), PD-ECGF (клон P-GF.44C в разведении 1:100, Abcam), TGF-β (клон TB21) в разведении 1:100, Abcam). Демаскировка антигенов проводилась в ретривере с цитратным буфером с pН=6,0, при температуре - 120С0 в течение 20 минут. Результаты реакций PD-ECGF и TGF-β были оценены полуколичественным методом от 1 до 6 баллов по общепринятой методике. Оценка экспрессии Ki-67 с расчетом индекса пролифе- рации (ИП) осуществлялась при подсчете про- цента позитивных клеток на 3000 клеток дан- ного типа. Статистическая обработка получен- ных данных проведена с помощью электрон- ных таблиц Microsoft Excel и прикладных про- грамм статистика для Windows v. 7.0. Для срав- нения числовых данных использовали метод t-критерий Стьюдента. Попарное сравнение осуществляли с помощью критерия Манна- Уитни. Результаты собственных исследований и обсуждение Клиническая характеристика ЛММ и эндометрия В нашем материале узлы ЛММ локализова- лась следующим образом: субсерозные - 67% Рис. 1. Экспрессия биомаркеров в A Б эндометрии ЛММ больших размеров у женщин перименопаузального возраста: Ki67 Б. TGF В., Г. PDECGF. В Г (36 случаев); интрамуральные - 20% (11 слу- чаев); субмукозные - 11% (6 случаев) и их раз- личное сочетание в 2% (1 случай). Жалобы больных на нарушение менструальной функ- ции - маточные кровотечения в виде мено- и метроррагий отмечали 48 пациенток (89%), из них сопровождались анемией в 7 случаях (12%). Наряду с маточными кровотечениями, миомы матки сопровождались болевым синдромом у 30 больных (57%). Как правило, боли локали- зовались в нижних отделах живота и пояснице. Нарушения функции смежных органов (моче- вого пузыря, прямой кишки), чаще наблюдались при межсвязочном, подбрюшинном и шеечном расположении узлов. Морфологическая характеристика ЛММ и эндометрия При морфологическом исследовании эндоме- трия у пациенток ЛММ больших размеров сли- зистая соответствовала преимущественно ста- дии пролиферации (85%), и лишь в 15 % ста- дии секреции (Рис. 1). ЛММ больших размеров в диаметре больше 6 см на разрезе имеют волокни- стое или мелкодольчатое строение, в центре часто с более мягкой консистенцией, а нередко с участ- ками некроза и всегда с четкими границами. При микроскопическом исследовании простая лей- омиома выявлена у 44 женщин (81% случаев), из них 26 пациенток (49 %) входили в основную группу и 28 (51%) в контрольную. В ткани простых ЛММ отмечались вторичные изменения опухоли в виде дистрофии лейомиоцитов, очагов гиалиноза, некроза и отека стромы. Эндометрий у 90% женщин был в фазе пролиферации и у 10 % секреции. Различий при морфологическом иссле- довании эндометрия I группы по подгруппам а и б отмечено не было. ЛММ малых размеров составляли в диаме- тре менее 4 см. Нередко ЛММ малых размеров были множественные (узлы от 2 до 5), волок- нистого строения, серого цвета. Консистенция в центре узла и на периферии практически не отличалась, лишь в одном случае в центре узла диаметром 3 см определялся очаг дистрофиче- ского обызвествления. При микроскопическом исследовании в ткани малых ЛММ обнаружи- вались дистрофические изменения, гиалиноз и отек стромы. Иммуногистохимическая характеристика ЛММ и эндометрия При ИГХ исследовании экспрессии Ki67 в эндометрии у пациенток с ЛММ выявлялась ядерная окраска как в железах, так и в строме эндометрия (Рис.1а). ИП по Ki67 был самым высоким в основной группе пациенток с ЛММ больших размеров моложе 45 лет (Iа) и соста- вил 25-30%, а также в группе больных с ЛММ больших размеров старше 46 лет (Iб) и соста- вил 20-25%. В эндометрии у пациенток с ЛММ малых размеров ИП составил 3%-15% (Табл.1). Экспрессия Кi 67(ИП) в исследованных группах Таблица 1 группа эндомет- рий ЛММлейомио- циты окружаю- щий миоме- трий ЛММ ( Iа) 3,00 балла 0,90 балла 0,90 балла ЛММ (Iб) 3,00 балла 0,78 балла 0,78 балла ЛММ (IIа) 0,86 балла 0,50 балла 0,80 балла ЛММ (IIб) 1,38 балла 0,88 балла 1,50 балла Средние значения TgFβ в изучаемых группах Таблица 2 группа эндомет- рий ЛММлейомиоциты окружающий миометрий ЛММ ( Iа) 25-30% 1,38% 0,38% ЛММ (Iб) 20-25% 0,00% 0,00% ЛММ (IIа) 5-15% 0,63% 0,25% ЛММ (IIб) 3-15% 0,13% 0,00% При ИГХ исследовании TGFβ выявлялся в виде коричневого окрашивания цитоплазмы кле- ток покровного эпителия и желез, а также макро- фагальных и фибробластических элементов стромы эндометрия (Рис.1б). У женщин с ЛММ больших размеров экспрессия белка TGF-β в эндометрии в среднем составила -3 балла, а в эндометрии у пациенток с ЛММ малых разме- ров от 0,86 и 1,38 балла в обеих возрастных под- группах (Табл. 2). При ИГХ исследовании PD-ECGF выявля- лась цитоплазматическим окрашиванием эпите- лиальных клеток эндометрия и фибробластичес- ких элементов стромы эндометрия (Рис.1в,г). Уровень экспрессии PD-ECGF был самым высо- ким в основной группе ЛММ больших размеров Экспрессия PD-ECgF группа эндомет- рий ЛММлейомио- циты прилежащий миометрий ЛММ ( Iа) 3,67 балла 1,33 балла 0,25 балла ЛММ (Iб) 3,29 балла 2,75 балла 1,33 балла ЛММ (IIа) 1,50 балла 5,00 балла 2,00 балла ЛММ (IIб) 1,60 балла 2,00 балла 1,75 балла в исследованных группах Таблица 3 в обеих возрастных подгруппах и составил соот- ветственно 3,67 балла и 3,29 балла. В эндометрии у пациенток с ЛММ малых размеров уровень экспрессии PD-ECGF составил 1,5 и 1,6 баллов (Табл. 3). Резюмируя полученные нами данные, сле- дует отметить, что между ЛММ больших разме- ров и эндометрием может существовать взаимос- вязь на уровне цитокиновых взаимодействий. Так, нами установлено, что ЛММ больших раз- меров отличаются особенностями молекуляр- ного профиля эндометрия, который характери- зуется более высоким уровнем экспрессии Ki67, TGF-β и PD-ECGF, что может быть использо- вано в прогнозировании их развития. Из лите- ратуры известно, что эндометрий и миометрий матки находятся не только в тесном анатоми- ческом взаимодействии, но и оказывают вли- яние друг на друга и на молекулярном уровне [7]. Кроме того, данные о влиянии эндометрия на рост ЛММ посредством факторов роста опи- саны и другими авторами [2, 5]. Описанные вза- имодействия на молекулярном уровне, вероят- нее всего, и лежат в основе развития сочетанной патологии эндо- и миометрия [8]. Развитие ЛММ больших размеров может вызывать патологию эндометрия или, напротив, молекулярные изменения в эндометрии могут носить первичный характер и инициировать раз- витие ЛММ больших размеров. Заключение Эндометрий может быть наиболее удобным объектом исследования в целях прогнозирова- ния развития ЛММ, так как является доступным объектом в диагностике заболеваний матки. ИП Ki-67 в эндометрий пациенток с ЛММ больших размеров выше, чем у пациенток с ЛММ малых размеров и составляет 25-30%. Экспрессия ТGFβ и PD-ECGF в эндометрии у пациенток с боль- шими ЛММ составила в среднем 3.5 балла, по сравнению с контрольной группой, составляю- щей 1.5 балла. Иммуногистохимическое выявле- ние высокой экспрессии Ki67, TGFβ, PD-ECGF в эндометрии позволяет прогнозировать раз- витие лейомиом больших размеров. Исходя из вышеизложенного, следует подчеркнуть, что ИГХ определение высокой экспрессии Ki-67, ТGFβ, PD-ECGF позволяет прогнозировать раз- витие ЛММ больших размеров.

About the authors

S I Askolskaya

E A Kogan

Email: koganevg@gmail.com

Yu V Popov

Email: yury.popoff@gmail.com

M A Solomakhina

Email: masolomahina@yandex.ru

N M Fayzullina

References

Supplementary files