Ecological geneticsEcological geneticsЭкологическая генетика1811-09322411-9202Eco-Vector240110.17816/ecogen13110-15ArticlesСтатьиResearch ArticleCreation of new pichia pastoris strains for recombinant protein productionНовые штаммы дрожжей pichia pastoris - продуценты гетерологичных белковMuzaevDmitriy MikhaylovichМузаевДмитрий Михайлович

master, Dept. Genetics and Biotechnology

магистр, кафедра генетики и биотехнологии

dmmuzaev@yandex.ruRumyantsevAndrey MikhaylovichРумянцевАндрей Михайлович

master, Dept. Genetics and Biotechnology

магистр, кафедра генетики и биотехнологии

rumyantsev-am@mail.ruSambukElena ViktorovnaСамбукЕлена Викторовна

Dr. Sci. Biol, professor, Dept. Genetics and Biotechnology

д. б. н., профессор, кафедра генетики и биотехнологии

esambuk@mail.ruPadkinaMarina VladimirovnaПадкинаМарина Владимировна

Dr. Sci. Biol, professor, Dept. Genetics and Biotechnology

д. б. н., профессор, кафедра генетики и биотехнологии

mpadkina@mail.ruSaint Petersburg State UniversityСанкт-Петербургский государственный университет15032015131VOL 13, NO1 (2015)ТОМ 13, №1 (2015)101530032016Copyright ©; 2015, Muzaev D.M., Rumyantsev A.M., Sambuk E.V., Padkina M.V.Copyright ©; 2015, Музаев Д.М., Румянцев А.М., Самбук Е.В., Падкина М.В.2015Muzaev D.M., Rumyantsev A.M., Sambuk E.V., Padkina M.V.Музаев Д.М., Румянцев А.М., Самбук Е.В., Падкина М.В.http://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://journals.eco-vector.com/ecolgenet/article/view/2401

Pichia pastoris yeasts are widely used as a production platform for heterologous proteins. Wide biotechnological use of these yeasts is determined by simplicity of cultivation, cheap media and ability to provide posttranslational modifications. Basic approaches for enhancement of the recombinant protein outcome constitue increasing number of gene copies, which encode target protein, as well as co-expression of supporting factors for protein folding, processing and secretion. Development of relevant plasmids and auxotrophic strains is essential for solving these tasks. In this study, we report plasmids and strains collection, whichwill allow to conduct integration of multiple foreign genes in P. pastoris genome

Дрожжи Pichia pastoris используются для синтеза множества рекомбинантных белков. Широкое применение этого вида дрожжей в биотехнологии обусловлено относительной простотой культивирования, дешевизной используемых сред и возможностью осуществления посттрансляционных модификаций белков. Основными способами повышения выхода рекомбинантного белка являются увеличение числа копий генов, кодирующих исследуемый белок, а также коэкспрессия вспомогательных факторов, участвующих в фолдинге, созревании и секреции белка. Необходимым условием для применения этих подходов является расширение коллекции ауксотрофных мутантов. В ходе данной работы была создана коллекция плазмид и штаммов, позволяющая осуществлять множественную интеграцию чужеродных генов в геном P. pastoris.

Pichia pastorisPichia pastorisrecombinant proteinsgenes expressiongene engineeringрекомбинантные белкиэкспрессия геновгенная инженерияBrierley R. A. (1998) Secretion of recombinant human insulin-like growth factor (IGF-1). Methods in Molecular Biology: Pichia Protocols, Humana Press, Totowa, NJ. V. 103: P. 149-177.Cregg J. M., Cereghino J. L., Shi J. Y., Higgins D. R. (2000) Recombinant protein expression in Pichia pastoris. Mol Biotechnol. V. 16: P. 23-52.Darby R. A., Cartwright S. P., Dilworth M. V., Bill R. M. (2012) Yeast Species Shall I Choose? Saccharomyces cerevisiae Versus Pichia pastoris (Review). Recombinant Protein Production in Yeast: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. V. 866: P. 11-23.Guthrie C., Fink G. R. (1991) Guide to yeast genetics and molecular biology. Academic Press. V. 3: P. 194-933.Higgins D. R., Busser K., Comiskey J., Whittier P. S., Purcell T. J., Hoeffler J. P. (1998) Small vectors for expression based on dominant drug resistance with direct multicopy selection. Methods in Molecular Biology: Pichia Protocols, Humana Press, Totowa, NJ. V. 103: P. 41-53.Littlewood B. S. (1972) A method for obtaining antibiotic-sensitive mutants in Saccharomyces cerevisiae. Genetics. V. 71 (2): P. 305-308.Scorer C. A., Clare J. J., McCombie W. R., Romanos M. A., Sreekrishna K. (1994) Rapid selection using G418 of high copy number transformants of Pichia pastoris for high-level foreign gene expression. BioTechnology. V. 12: P. 181-184.Sambrook J., Russel D. W. (2001) Molecular cloning: A laboratory manual, 3d edition. New York: Cold Spring Harbour Laboratory Press.Sherman F. (1997) Yeast genetics. The encyclopedia of molecular biology and molecular medicine. V. 6: P. 302-325.Sunga A. J., Cregg J. M. (2004) The Pichia pastoris formaldehyde dehydrogenase gene (FLD1) as a marker for selection of multicopy expression strains of P. pastoris. Gene. V. 330: P. 39-47.GenBank. Komagataella pastoris GS115. Reference genome sequence. Cited 19.12.2014. URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/338?genome_assembly_id=28698.Pichia pastoris Genome Browser. Genome Database of the Pichia pastoris. Cited 19.12.2014. URL: http://www.pichiagenome.org/.Lin Cereghino G. P., Lin Cereghino J., Sunga A. J., Johnson M. A., Lima M., Gleeson M. A. G., Cregg J. M. (2000) New selectable marker/auxotrophic host strain combinations for molecular genetic manipulation of Pichia pastoris. Gene. V. 263: P. 159-169.Scherer S., Davis R. W. (1979) Replacement of chromosome segments with altered DNA sequences constructed in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. V. 76: P. 4951-4955.