Increase of anticoagulant and fibrinolytic activity of rat blood plasma when using products of velvet antler industry

Full Text

Изучение процессов приспособления организма к изменяющимся условиям среды — актуальный вопрос современной физиологии. Система гемостаза является одной из наиболее реактивных систем организма и может участвовать в формировании как эустрессорной, так и дистрессорной реакции организма на различные факторы окружающей среды [1]. Так, авторами показано, что сверхпороговое по силе или длительности стрессорное воздействие вызывает в системе гемостаза дезадаптивные изменения. При генерализованной ответной реакции организма на дистрессорное воздействие система гемостаза универсально отвечает претромбозом: гиперкоагуляцией с признаками тромбинемии на фоне подавления антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови, что объединено общим понятием «состояние тромботической готовности» [2].

Для того чтобы избежать развития состояния тромботической готовности при дистрессорном воздействии, необходимо вести поиск путей повышения устойчивость организма и системы гемостаза. Показано, что повышения уровня адаптированности организма можно достичь как физическими тренировками, так и приёмом адаптогенов.

К адаптогенам животного происхождения относятся продукты пантового оленеводства, которые повышают умственную и физическую работоспособность [3]. Известно, что применение средств на основе пантов обеспечивает более сбалансированную работу энергообеспечивающих механизмов организма, поддерживает стабильность липидного обмена, оказывает благоприятное действие на баланс в системе «прооксиданты-антиоксиданты» [4].

Помимо антиоксидантного эффекта пептидов, выделенных из пантов марала, были изучены также гипогликемические и гиполипидемические эффекты продуктов пантового оленеводства [5]. Показано, что компоненты продуктов пантового оленеводства оказывают иммуномодулирующее действие [6], также был отмечен гемопоэтический эффект [7].

В продуктах пантового оленеводства отсутствуют запрещённые допинговые вещества или близкие к ним аналоги [8]. Причём было отмечено, что препараты, содержащие, помимо крови марала, ещё и гистолизат из половых органов самцов, обладают более выраженным тонизирующим действием за счёт повышения биосинтетической активности в клетках скелетной мускулатуры крыс [9]. Кровь марала, как и панты, содержит множество активных веществ: пептидов, гормонов, факторов роста, так, например, выделен инсулиноподобный фактор роста 1 [10]. Также было показано, что пептид sVAP32, выделенный из пантов марала, предотвращает развитие сердечного фиброза, вызванного перегрузкой давле­нием [11].

Ранее нами было установлено, что предварительный 30-дневный приём концентрата, содержащего кровь и гистолизат половых органов самцов марала, значительно снижает риск развития состояния тромботической готовности у крыс после сверхпороговой физической нагрузки [12]. Однако за счёт каких реакций системы гемостаза и при какой продолжительности приёма концентрата развивается максимальный адаптивный эффект — изучено не было.

Цель работы — оценить реакции системы гемостаза у крыс при различной продолжительности приёма концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, а также исключить возможное адаптивное действие на систему гемостаза добавок (глюкозы, аскорбиновой кислоты, фруктовой эссенции), входящих в состав используемого концентрата.

В качестве материала для исследования использованы 50 половозрелых крыс-самцов линии Wistar с массой тела 200–250 г:

• группа интактных животных (n=10);
• три экспериментальные группы (по 10 животных в каждой), принимавших концентрат в течение 7, 14 и 30 дней;
• группа контроля, принимавшая добавки (глюкозу, аскорбиновую ­кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата, в течение 30 дней (n=10).

Животных содержали в соответствии с требованиями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (2000), Европейской конвенции «О защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных или иных научных целей» (Страсбург, 1986).

Три группы экспериментальных животных принимали концентрат, содержащий кровь и гистолизат половых органов самцов марала, выпускаемый под торговым названием «Пантогематоген (Лубяньгем)» (ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт пантового ­оленеводства» ФАНО России, г. Барнаул) по 4,5 мл в сутки в течение 7, 14 и 30 дней соответственно. Доза 4,5 мл в сутки для крыс с массой тела 200–250 г соответствует 30 мл в сутки для человека (c массой тела 80 кг), то есть 2 столовые ложки, что рекомендовано производителем в качестве суточной дозы. Расчёт дозы концентрата для крыс проводили с учётом коэффициентов межвидового пересчёта [13].

Экспериментальные животные содержались в индивидуальных клетках и принимали водный раствор концентрата перорально из индивидуальных поилок. Раствор приготавливали путём добавления 4,5 мл концентрата в воду, доводя раствор до общего объёма 40 мл (суточная норма потребления воды для данных крыс, выявленная нами до начала эксперимента).

Интактные животные принимали воду в том же объёме, что и экспериментальные животные. Контрольная группа животных принимала добавки (глюкозу, аскорбиновую кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата, в объёме 1,7 мл в сутки в течение 30 дней. Данный объём рассчитывали из процентного содержания компонентов концентрата: 37% — добавки (35% — глюкоза, 1% — аскорбиновая кислота, 1% — фруктовая эссенция), 31,5% — цельная кровь марала, 31,5% — гистолизат репродуктивных органов марала. Объём 1,7 мл добавок концентрата разводили водой до 4,5 мл: предполагаемое действующее вещество (кровь и гистолизат половых органов самцов марала) было заменено водой в соответствующих пропорциях.

Кровь для исследования забирали в объёме 6 мл из печёночного синуса крыс в полистироловый шприц с широкой иглой, содержащий 0,11 М (3,8%) раствор натрия цитрата (соотношение крови и цитрата 9:1), под наркозом. Использование крыс в экспериментах осуществляли в соответствии с Европейской конвенцией и директивами по охране позвоночных животных, используемых в эксперименте [14].

Параметры системы гемостаза оценивали на коагулометрах «Минилаб» (Россия) и «Trombostat-2» (Германия) с помощью диагностических наборов фирмы «Технология-Стандарт» (Россия), согласно рекомендациям З.С. Баркагана и А.П. Момота [15]. Оценка состояния системы ­гемостаза включала исследование сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза, внутреннего и внешнего путей активации плазменного гемостаза, конечного этапа свёртывания крови, антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови.

Индуцированную агрегацию тромбоцитов проводили на агрегометре «Биола», при этом в качестве индуктора использовали раствор аденозиндифосфата (АДФ). При исследовании агрегации тромбоцитов для возможности измерения на агрегометре богатую тромбоцитами плазму крови крыс разводили в соотношении 1:1 с «собственной» бедной тромбоцитами плазмой крови.

Поскольку полученные признаки не подчинялись нормальному распределению, статистическую значимость различий оценивали при помощи непараметрического U-критерия Манна–Уитни. Различия считали достоверными при уровне статистической значимости p <0,05.

Полученные в ходе исследования результаты представлены в таблицах в виде (m [25–75%]), где m — медиана в выборочной совокупности; [25–75%] — 25-й и 75-й перцентили.

Данные исследования состояния системы гемостаза интактных животных и трёх экспериментальных групп животных, принимавших концентрат в дозе 4,5 мл/сут в течение 7, 14 и 30 дней, представлены в табл. 1.

 

Таблица 1. Состояние системы гемостаза у интактных и экспериментальных животных, принимавших препарат в течение 7, 14 и 30 дней (m [25–75%])

Метод исследования	Интактные животные (n=10)	Ежедневный приём концентрата в дозе 4,5 мл/сут
		7 дней (n=10)	14 дней (n=10)	30 дней (n=10)
Тромбоциты, ×109/л	569,5 [562, 0–572, 5]	603,0 [576, 8–625, 3] р=0,086	584,0 [573, 8–592, 3] р=0,348	570,0 [558, 0–587, 0] р=0,940
Индуцированная АДФ агрегация тромбоцитов, максимальные значения	29,1 [28, 6–29, 8]	29,0 [28, 3–30, 0] р=0,624	29,6 [27, 3–32, 2] р=0,568	30,0 [29, 3–31, 1] р=0,070
Силиконовое время, с	310,0 [298, 0–321, 0]	300,5 [286, 3–306, 0] р=0,133	310,0 [280, 0–320, 0] р=0,653	329,0 [279, 0–340, 0] р=0,903
АПТВ, с	21,4 [20, 6–22, 3]	22,0 [21, 5–22, 7] р=0,903	20,8 [19, 6–22, 1] р=0,290	23,7 [22, 0–25, 4] р=0,041
Протромбиновое время, с	26,2 [25, 2–27, 0]	26,7 [26, 4–27, 2] р=0,270	24,9 [24, 2–26, 2] р=0,058	26,9 [26, 2–27, 4] р=0,405
Тромбиновое время, с	44,9 [43, 1–46, 2]	44,8 [43, 6–45, 2] р=1,000	44,0 [42, 3–45, 0] р=0,364	44,9 [44, 2–46, 7] р=0,273
РФМК, мг/100 мл	3,5 [3, 5–3, 9]	3,5 [3, 5–4, 0] р=0,624	4,0 [3, 5–4, 0] р=0,325	3,5 [3, 5–4, 5] р=0,344
Содержание фибриногена, г/л	2,2 [1, 9–2, 6]	2,1 [1, 9–2, 1] р=0,391	1,8 [1, 5–1, 9] р=0,016	1,7 [1, 5–1, 9] р=0,010
Антитромбин III,%	95,7 [94, 7–97, 3]	98,8 [96, 4–99, 8] р=0,094	119,4 [118, 6–120, 2] р <0,001	120,5 [119, 3–123, 1] р <0,001
Спонтанный эуглобулиновый фибринолиз, мин	530,0 [506, 3–560, 0]	562,5 [511, 3–602, 5] р=0,347	570,0 [555, 0–580, 0] р=0,064	470,0 [450, 0–475, 0] р=0,017
Примечания: АДФ — аденозиндифосфат; АПТВ — активированное парциальное тромбопластиновое время; РФМК — растворимые фибрин-мономерные комплексы; р — уровень статистической значимости различий экспериментальных групп с интактными животными.

 

По истечении недельного приёма концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов самцов марала, ни один из показателей системы гемо­стаза не отличался от таковых у интактных животных.

По истечении 14 дней приёма концентрата у крыс отмечено снижение содержания фибриногена в крови на 18% (р=0,016) по сравнению с интактными животными, а также повышение антикоагулянтной активности плазмы крови — повышение содержания антитромбина III на 25% (р <0,001).

После 30 дней приёма концентрата сохранялась гемостазиологическая картина, выявленная на 14-й день приёма концентрата: снижение содержания фибриногена уже на 23% (р=0,010) по сравнению с интактными животными, повышение концентрации антитромбина III на 26% (р <0,001). Кроме того, были зарегистрированы гипокоагуляция по внутреннему пути активации плазменного гемостаза [удлинение активированного парциального тромбопластинового времени на 11% (р=0,041) по сравнению с интактными животными] и повышение фибринолитической активности плазмы крови [укорочение времени спонтанного лизиса эуглобулинового сгустка на 11% (р=0,017)].

Можно предположить, что именно активация фибринолитической и антикоагулянтной систем крови, а также снижение содержания фибриногена в крови приводит к повышению уровня адаптивности системы гемостаза и не даёт развиться состоянию тромботической готовности при стрессорных воздействиях, таких как сверхпороговая физическая нагрузка.

Данные исследования состояния системы гемостаза интактных животных и контрольной группы, принимавшей добавки (глюкозу, аскорбиновую кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата, в дозе 4,5 мл/сут в течение 30 дней, представлены в табл. 2.

 

Таблица 2. Состояние системы гемостаза у интактных крыс и контрольной группы животных, принимавших добавки (глюкозу, аскорбиновую кислоту, фруктовую эссенцию), входящие в состав исследуемого концентрата (m [25–75%])

Метод исследования	Интактные животные (n=10)	Плацебо, 4,5 мл в течение 30 сут (n=10)
Тромбоциты, ×109/л	569,5 [562, 0–572, 5]	579,0 [569, 0–590, 0] p=0,345
Индуцированная АДФ агрегация тромбоцитов, максимальные значения	29,1 [28, 6–29, 8]	28,6 [27, 9–29, 5] p=0,186
Силиконовое время, с	310,0 [298, 0–321, 0]	320,0 [310, 0–335, 0] p=0,377
АПТВ, с	21,4 [20, 6–22, 3]	21,1 [19, 9–22, 0] p=0,308
Протромбиновое время, с	26,2 [25, 2–27, 0]	25,5 [25, 1–26, 1] p=0,227
Тромбиновое время, с	44,9 [43, 1–46, 2]	44,2 [42, 9–44, 6] p=0,345
РФМК, мг/100 мл	3,5 [3, 5–3, 9]	4,0 [3, 5–4, 0] p=0,473
Содержание фибриногена, г/л	2,2 [1, 9–2, 6]	2,1 [1, 9–2, 3] p=0,678
Антитромбин III,%	95,7 [94, 7–97, 3]	95,2 [94, 5–96, 6] p=0,364
Спонтанный эуглобулиновый фибринолиз, мин	530,0 [506, 3–560, 0]	510,0 [490, 0–520, 0] p=0,326
Примечания: АДФ — аденозиндифосфат; АПТВ — активированное парциальное тромбопластиновое время; РФМК — растворимые фибрин-мономерные комплексы; р — уровень статистической значимости различий контрольной группы с интактными животными.

 

По итогам 30-дневного приёма добавок (глюкозы, аскорбиновой кислоты, фруктовой эссенции), входящих в состав исследуемого концентрата, показатели системы гемостаза у крыс не отличались от таковых у интактных животных. Следовательно, можно предположить, что действующими компонентами концентрата, повышающими адаптивность системы гемостаза за счёт активации антикоагулянтной и фибринолитической систем крови у крыс, а также снижения содержания фибриногена в крови, служат активные вещества, содержащиеся в крови и гистолизате из репродуктивных органов маралов.

Выводы

1. Повышение адаптированности системы гемостаза при приёме концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, заключается в повышении антикоагулянтной и фибринолитической активности плазмы крови, а также в снижении содержания фибриногена в крови крыс.

2. Действующими компонентами используемого концентрата «Пантогематоген (Лубяньгем)», повышающими адаптивные свойства системы гемостаза у крыс, служат активные вещества, содержащиеся в крови и гистолизате из репродуктивных органов самцов марала.

3. Максимальная адаптивная эффективность концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, достигается на 30-й день приёма.

 

Авторы декларируют отсутствие конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Источник финансирования: «Грант ректора АГМУ» (договор №1-гр от 21.02.2017).

Авторы выражают признательность ФГБНУ «Всероссийский НИИ пантового оленеводства» ФАНО России (г. Барнаул) в лице директора, профессора В.Г. Луницына за предоставленный концентрат «Пантогематоген (Лубяньгем)» и составные компоненты концентрата.

About the authors

A A Blazhko

Altai State Medical Universit

Author for correspondence.
Email: blazhko_1990@mail.ru
Barnaul, Russia

I I Shakhmatov

Altai State Medical Universit; Scientific Research Institute of Physiology and Basic Medicine

Email: blazhko_1990@mail.ru
Barnaul, Russia; Novosibirsk, Russia

A Yu Zharikov

Altai State Medical Universit; Scientific Research Institute of Physiology and Basic Medicine

Email: blazhko_1990@mail.ru
Barnaul, Russia; Novosibirsk, Russia

V I Kiselyov

Altai State Medical Universit; Scientific Research Institute of Physiology and Basic Medicine

Email: blazhko_1990@mail.ru
Barnaul, Russia; Novosibirsk, Russia

References

Supplementary files