MORPHOFUNCTIONAL CHANGES OF THYROID GLAND THYROCYTES AND C-CELLS IN HYPOTHYROIDISM INDUCED BY ACTINOMYCIN D ADMINISTRATION

Full Text

В последние десятилетия интерес к изучению структурных и функциональных особенностей желез внутренней секреции неизменно растет, не только в связи с выявлением новых механизмов влияния эндокринной системы на жизненно важные процессы живых организмов, но и из-за ухудшения экологической ситуации в мире, приводящей к тому, что изменяется роль гормонов и гормоноподобных веществ в регуляции метаболических процессов. Известно, что нарушение процессов гормональной регуляции приводит к серьезным последствиям с развитием тяжелых эндокринных заболеваний [1, 2, 3, 4]. Многообразие и сложность эндокринной регуляции и вариабельность патологии делают актуальными исследования в данной области. Материалы и методы Работа выполнена на 20 половозрелых белых нелинейных крысах самцах массой 210-230 г, содержащихся в стандартных условиях вивария. Первой группе животных вводили актиномицин D (АмD) (Renal) четырехкратно в/брюшинно в разовой дозе 0,2 мг/кг с интервалом в 12 часов. Контролем служили крысы, которым вводили в те же сроки растворитель 5% этанол. Второй группе животных на фоне инъекций экзогенного трийодтиронина (Т3) (Sigma) в разовой дозе 100 мкг в течение 7 суток на 6, 7 сутки от начала эксперимента осуществляли введение той же дозы АмD. Контролем служили крысы, которым вводили в те же сроки растворитель 0,025 М NaOH и растворитель 5% этанол. Эвтаназию крыс осуществляли углекислым газом в течение 15-20 мин через 24 часа от последней инъекции [5]. Уровень гормонов исследовался в ЦНИЛ РязГМУ в день забоя. Кровь отбиралась из брюшной аорты и отстаивалась до получения сыворотки. Уровень Т3, Т4, ТТГ измеряли радиоиммунным методом. Для исследования на тканевом уровне изготавливали гистологические препараты, которые окрашивали гематоксилин-эозином. Исследования на клеточном уровне проводили под электронным микроскопом ЭМ-125К. Кусочки щитовидной железы размером 1х1 мм фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида при 4°С 4 часа. Материал обрабатывали по стандартной методике, изготавливали ультра-тонкие срезы и изучали при увеличении 6000, 10000, 15000. Обработку информации для ультра-структурной морфометрии проводили на компьютере с помощью автоматизированной системы для измерения колориметрических, денситометрических и морфометрических параметров медикобиологических объектов [6, 2, 7]. По каждой серии опытов обрабатывали по 10 электронограмм. Определяли среднюю относительную площадь ядра, ядрышка, эухроматина и гетерохроматина. Вычисляли ядрышко-ядерное соотношение и соотношение эухроматина и гетерохроматина в ядре. Ультраструктурную морфомет-рию электронно-плотных гранул проводили на электроннограммах при увеличении 10000. По каждой серии опытов обрабатывали по 10 электронограмм. Результаты исследований обработаны методом вариационной статистики. Вычисления проводились на компьютере с использованием прикладных программ «Statistic», «SigmaPlot». Анализировали характер распределения данных. Применялась параметрическая описательная статистика, рассчитывались: среднее (М) и среднеквадратическая ошибка (m). Достоверность различий определяли по t-критерию Стьюден-та. Вероятность р<0,05 считали достаточной для вывода о достоверности различий между вариационными рядами. 17 Российский медико - биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2016. Т. 24, № 3 Результаты и их обсуждение Радиоиммунологическое исследование уровня тиреоидных гормонов и ти-реотропина в сыворотке крови животных первой и второй группы указывает на то, что введение АмD по описанной схеме вызывает гипофункцию щитовидной железы. Для первой группы наиболее выраженное изменение претерпевает концентрация ТТГ, при этом обнаруживается достоверное понижение уровня гормона на 57,9% по сравнению с контролем. Уровень Т4 снижается на 38,85%, уровень Т3 снижается менее выражено - на 4,54%. Для второй группы уровень ТТГ снижается в 17 раз, уровень Т4 снижается на 49%, уровень Т3 снижается менее выражено -на 52%. Полученные данные свидетельствуют о значительном понижении секреции ТТГ и одновременном выраженном торможении образовании Т3 и Т4 (табл. 1). Таблица1 Изменение тиреоидного статуса крыс при введении актиномицина D и актиномицина D на фоне курсового введения трийодтиронина Серия Масса тела, г М±т Масса железы, г М±т Концентрация гормонов в сыворотке крови Т3, нмоль/л М±т Т4, нмоль/л М±т ТТГМЕД/л М±т Контроль(n=10) 207±3,28 30,4±0,92 1,977±0,044 28,86±1,253 1,524±0,015 АмБ (n=10) 191,8±2,44 р<0,01 28±1,23 1,098±0,07 р<0,001 17,66±2,049 р<0,05 0,14±0,03 р<0,001 АмБ+ Т3 (n=10) 181,5±5,07 р<0,01 25,8±1,65 0,958±0,09 р<0,001 14,68±1,09 р<0,01 0,09±0,01 р<0,001 Гипофункциональное состояние щитовидной железы подтверждается при гистологическом исследовании. На препаратах щитовидной железы животных первой и второй группы отмечается преобладание мелких фолликулов, с выраженной резорбцией коллоида. Сеть капилляров в рыхлой волокнистой соединительной ткани, окружающей фолликулы, хорошо развита. С-клетки локализованы в центральных участках железы, в прослойках соединительной ткани между фолликулами, или в стенке фолликулов и имеют типичную полигональную или вытянутую форму. Средняя площадь С-клеток достоверно не изменяется. При морфометрическом исследовании щитовидной железы животных первой группы отмечается достоверное уменьшение высоты тиреоидного эпителия приблизительно на 25%. Показатель функциональной активности щитовидной железы - индекс накопления достоверно увеличивается на 36%. Наиболее существенные изменения, свидетельствующие о гипофункции щитовидной железы, отмечаются при проведении соответствующих исследований для животных второй группы. Отмечается достоверное уменьшение высоты тиреоидного эпителия приблизительно на 32%, индекс накопления достоверно увеличивается на 68% (табл. 2). Таблица 2 Морфометрическая характеристика функциональной активности фолликула щитовидной железы при экспериментальной гипофункции Серия Средняя площадь фолликула, мкм2 М±т Высота эпителия фолликула, мкм М±т Индекс накопления М±т Контроль(n=10) 1701,2±15,498 1,3±2,058 1,76±0,068 АмБ (n=10) 1556,1±10,651 0,95±1,581 2,40±0,272 р<0,05 р<0,01 АмБ+ Т3 (n=10) 1510,3±12,851 0,89±1,595 2,96±0,083 р<0,05 р<0,01 18 Российский медико - биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2016. Т. 24, № 3 При электронно-микроскопическом исследовании в тироцитах и С-клетках у животных на фоне введения АмБ ядра приобретают извилистые, неровные контуры. Отмечается расширение перинуклеарного пространства. Возрастает количество ком-пактизированного хроматина, который в виде глыбок располагается под кариолем-мой. По данным морфометрии величина соотношения площадей эухроматина и гетерохроматина в тироцитах и С-клетках статистически достоверно уменьшается почти в два раза (табл. 3). Наружная мембрана кариолеммы практически лишена рибосом. Ядрышки уменьшены в размерах, утрачивают ячеистую структуру, приобре Сходные ультраструктурные изменения обнаружены при изучении ультраструктуры гепатоцитов крыс и клеток гипо-кампа при введении данного препарата [4, 8]. По-видимому, причиной прекращения синтеза РНК, а в следствие этого и биосинтеза белка в клетке с одной стороны может служить отделение хроматина от ядрышка. С другой - способность АмБ образовывать комплексы с гуанин содержащими участками ДНК клеток, что подавляет матричную активность последней. Подавляющее действие на РНК обусловлено ингибированием РНК-полимеразы посредствам связывания поверхностей матрицы. На ультраструктурном уровне в цитоплазме тироцитов первой группы жи тают вид гомогенных телец овальной или округлой формы. При этом статистически достоверно на 30% уменьшается ядерноядрышковое соотношение. Полученные результаты указывают на то, что точкой приложения токсического эффекта АмБ является ядерный аппарат тироцитов и С-клеток. Эти ультраструктурные изменения в ядерном аппарате тироцитов влияют на вакуолярно-лизосомальную систему, нарушают биосинтез и транспорт йодтиронинов, в С-клетках нарушается синтез олигопеп-тидных гормонов [8]. Однако, сочетанное ведение Т3, по-видимому, не оказывает дополнительного действия на ядерный аппарат как тироцитов, так и С-клеток. вотных определяется уменьшение гранулярной эндоплазматической сети с уменьшением плотности расположения рибосом на ее мембранах. В ряде тироци-тов обнаруживаются митохондрии с частично редуцированными кристами. Комплекс Гольджи представлен отдельными диктиасомами и единичными микропузырьками, расположенными в цитоплазме в виде мелких групп и окруженными свободными рибосомами. Уменьшается количество и величина микроворсинок на апикальной поверхности. Коллоидные капли немногочисленны. Обнаруживается уменьшение количества первичных лизо-сом с преимущественной их локализацией в среднем отделе цитоплазмы (в контроле Таблица 3 Ультроструктурная морфометрия ядерного аппарата клеток щитовидной желеы при введении актиномицина D и актиномицина D на фоне курсового введения трийодтиронина Тироциты С-клетки Серия Ядрышко-ядерное соотношение, М±т Соотношение площадей эу- и гетерохроматина, М±т Ядрышко -ядерное соотношение, М±т Соотношение площадей эу- и гетерохроматина, М±т Контроль (n=10) 0,048±0,05 1,697±0,155 0,038±0,002 1,712±0,05 АмБ 0,033±0,004 0,88±0,05 0,028±0,05 0,81±0,05 (n=10) р<0,05 р<0,001 р<0,05 р<0,001 АмБ+ Т3 0,027±0,002 0,806±0,062 0,029±0,01 0,809±0,01 (n=10) р<0,01 р<0,01 р<0,01 р<0,01 19 Российский медико - биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2016. Т. 24, № 3 в апикальном отделе). Увеличивается количество вторичных лизосом с гомо- и гетерогенным содержимым. Данные изменения в вакуолярно-лизосомальной системе свидетельствуют о нарушении процессов гормонального синтеза. Базальная мембрана содержит незначительное число инвагинаций. Цитоплазма эндотелиальных клеток сосудов микроцирку-ляторного русла практически лишена пи-ноцитозных пузырьков, что свидетельствует о низкой пиноцитозной активности. При исследовании кальцитониноцитов первой группы животных отмечается частичная редукция гранулярной эндоплаз-матической сети, Комплекс Гольджи частично редуцирован. Число митохондрий в клетке практически не изменяется. Отмечается уменьшение числа электронноплотных гранул в цитоплазме на - 17,8%, но их содержимое остается мелкозернистым и гомогенным как в норме. В тироцитах второй группы животных наблюдаются более выраженные ги-пофункциональные изменения. Отмечается практическое отсутствие гранулярной эн-доплазматической сети, а агранулярная эндоплазматическая сеть вакуолизирована. Свободные рибосомы в цитоплазме тиро-цитов немногочисленны. Комплекс Голь-джи практически редуцирован. Между ва-куолизированными канальцами эндоплаз-матической сети обнаруживаются очаговые скопления мелких митохондрий с неплотно упакованными кристами. Степень активности трансцеллюлярного обмена вешеств между фолликулами щитовидной железы и компонентами микроциркуля-торного русла находится на весьма низком уровне, о чем свидетельствует гладкий рельеф базальной мембраны большинства фолликулов и незначительное число пино-цитозных пузырьков в цитоплазме эндотелиальных клеток. Полученные результаты указывают на наличие синергизма в действии АмБ и Т3, что весьма вероятно, если принимать во внимание способность дан ного гормона ингибировать синтез ТТГ на уровне транскрипции. В С-клетках второй группы животных гипофункциональные изменения не усиливаются по сравнению с первой группой. На фоне частичной редукции гранулярной эндоплазматической сети уменьшается число и плотность распределения рибосом на ее мембранах по сравнению с контролем. В околоядерной зоне отмечаются хорошо выраженные канальцы гладкой эндоплазматической сети. Комплекс Г ольджи частично редуцирован. Число митохондрий в клетке практически не изменяется, распределение их в цитоплазме равномерно. Отмечается уменьшение числа секреторных гранул, аргофилия и метахро-матизация цитоплазмы снижается. Выводы Введение актиномицина D вызывает в ядрах клеток щитовидной железы увеличение доли инертного гетерохроматина и сегрегацию ядрышек. Эти ультраструктурные изменения в ядерном аппарате тироцитов влияют на вакуолярно-лизосома-льную систему, нарушают биосинтез и транспорт йодтиронинов и, в конечном итоге, ведут к гипофункции щитовидной железы, характеризующейся понижением гормонального уровня в крови экспериментальных животных. При сочетанном введении актиноми-цина D и трийодтиронина отмечается тенденция к усилению гипофункциональных изменений, что может свидетельствовать о наличии синергизма в действии этих веществ на тироциты. Введение актиномицина D вызывает сходные изменения в ядерном аппарате С-клеток. Происходит ингибирование биосинтеза белка на уровне транскрипции, которое нарушает биосинтез кальцитонина и сомато-статина, нарушается синтез, накопление и декарбоксилирование различных биогенных аминов, которые способны к местной регуляции кальцитонина. При сочетанном введении актиномицина D и трийодтиронина в С-клетках не отмечается тенденция к усилению гипофункциональных изменений.

References

Supplementary files