Сравнение методов выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

При бактериальном вагинозе Gardnerella vaginalis и Fannyhessea vaginae образуют высокоструктурированные плотные биопленочные консорциумы. Ключевые клетки являются маркерами биопленочной организации бактериальных сообществ.

Цель: Сравнить микробиологические методы выявления биопленочного синдрома при бактериальном вагинозе.

Материалы и методы: Обследованы 28 женщин с жалобами на вагинальные выделения. Клиническим материалом служило отделяемое влагалища. Использовали метод микроскопии препаратов с окраской по Граму и метиленовым синим, а также метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH или РиГинаМ). Для молекулярного исследования использовали тест «Фемофлор».

Результаты: Диагноз бактериального вагиноза при исследовании по Нудженту установлен у 89,3% (25/28) женщин. Как при микроскопической оценке микробиоценоза влагалища с использованием анилиновых красителей, так и при оценке методом РиГинаМ получены одинаковые результаты (отношение Л:Э менее 4:1, обнаружены ключевые клетки). Лишь в трех случаях всеми методами ключевые клетки не были обнаружены. У 25 пациенток с диагностированным бактериальным вагинозом тестом «Фемофлор» во всех клинических материалах были обнаружены G. vaginalis со средним логарифмом 7,55, в 22 случаях были обнаружены F. vaginae. В трех случаях физиологического микробиоценоза влагалища общая бактериальная масса была в основном представлена лактобациллами. У этих женщин обнаружены G. vaginalis, но общая бактериальная масса их была низкой (3,6; 4,1 и 6,8 lg), F. vaginae обнаружена лишь в одном случае (2,1 lg).

Заключение: Ключевые клетки как маркер биопленочного бактериального вагиноза выявляются как при окраске препаратов по Граму, метиленовым синим, так и методом РиГинаМ. Микроскопический метод с окраской анилиновыми красителями не дифференцирует виды бактерий, входящих в состав ключевой клетки; для метода РиГинаМ необходимы специфические зонды, позволяющие определить вид микроорганизма. Метод мультиплексной ПЦР в режиме реального времени может быть использован для диагностики бактериального вагиноза в сочетании с методами микроскопии.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

К. В. Шалепо

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Автор, ответственный за переписку.
Email: 2474151@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3002-3874

к.б.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии

Россия, Санкт-Петербург

Е. В. Спасибова

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: elena.graciosae@gmail.com
ORCID iD: 0009-0002-6070-4651

врач-бактериолог лаборатории клинической микробиологии

Россия, Санкт-Петербург

А. А. Крысанова

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: krusanova.anna@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-4798-1881

к.м.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии

Россия, Санкт-Петербург

Т. А. Хуснутдинова

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: husnutdinovat@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2742-2655

к.м.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии

Россия, Санкт-Петербург

О. В. Будиловская

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: o.budilovskaya@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-7673-6274

к.м.н., с.н.с. группы экспериментальной микробиологии

Россия, Санкт-Петербург

К. В. Сторожева

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: kvstorozheva@mail.ru
ORCID iD: 0009-0005-8954-0234

аспирант

Россия, Санкт-Петербург

Н. И. Тапильская

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: tapnatalia@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-5309-0087

д.м.н., профессор, в.н.с. отдела репродукции

Россия, Санкт-Петербург

А. М. Савичева

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: savitcheva@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-3870-5930

д.м.н., профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующая отделом медицинской микробиологии

Россия, Санкт-Петербург

И. Ю. Коган

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта»

Email: ovr@ott.ru
ORCID iD: 0000-0002-7351-6900

чл.-корр. РАН, д.м.н., профессор, директор

Россия, Санкт-Петербург

Список литературы

  1. Peebles K., Velloza J., Balkus J.E., McClelland R.S., Barnabas R.V. High global burden and costs of bacterial vaginosis: a systematic review and meta-analysis. Sex. Transm. Dis. 2019; 46(5): 304-11. https://dx.doi.org/10.1097/OLQ.0000000000000972
  2. Muzny C.A., Balkus J., Mitchell C., Sobel J.D., Workowski K., Marrazzo J. et al. Diagnosis and management of bacterial vaginosis: summary of evidence reviewed for the 2021 Centers for Disease Control and Prevention Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines. Clin. Infect. Dis. 2022; 74(Suppl. 2): S144-51. https://dx.doi.org/10.1093/cid/ciac021
  3. Yudin M.H., Money D.M. No. 211 – Screening and management of bacterial vaginosis in pregnancy. J. Obstet. Gynaecol. Can. 2017; 39(8): e184-91. https://dx.doi.org/10.1016/j.jogc.2017.04.018
  4. Workowski K.A., Bolan G.A.; Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines, 2015. MMWR Recomm. Rep. 2015; 64(RR-03): 1-137.
  5. Ison C.A., Hay P.E. Validation of a simplified grading of Gram stained vaginal smears for use in genitourinary medicine clinics. Sex. Transm. Infect. 2002; 78(6): 413-5. https://dx.doi.org/10.1136/sti.78.6.413
  6. Coleman J.S., Gaydos C.A. Molecular diagnosis of bacterial vaginosis: an update. J. Clin. Microbiol. 2018; 56(9): e00342-18. https://dx.doi.org/10.1128/JCM.00342-18
  7. Swidsinski A., Mendling W., Loening-Baucke V., Ladhoff A., Swidsinski S., Hale L.P. et al. Adherent biofilms in bacterial vaginosis. Obstet. Gynecol. 2005; 106(5 Pt 1): 1013-23. https://dx.doi.org/10.1097/ 01.aog.0000183594.45524.d2
  8. Hardy L., Jespers V., Dahchour N., Mwambarangwe L., Musengamana V., Vaneechoutte M. et al. Unravelling the bacterial vaginosis-associated biofilm: a multiplex Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae fluorescence in situ hybridization assay using peptide nucleic acid probes. PLOS One. 2015; 10(8): e0136658. https://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0136658
  9. Abou Chacra L., Fenollar F., Diop K. Bacterial vaginosis: what do we currently know? Front. Cell. Infect. Microbiol. 2022; 11: 672429. https://dx.doi.org/10.3389/fcimb.2021.672429
  10. Gardner H.L., Dukes C.D. Haemophilus vaginalis vaginitis: a newly defined specific infection previously classified non-specific vaginitis. Am. J. Obstet. Gynecol. 1955; 69(5): 962-76. https://dx.doi.org/10.1016/ 0002-9378(55)90095-8
  11. Vaneechoutte M., Guschin A., Van Simaey L., Gansemans Y., Van Nieuwerburgh F., Cools P. Emended description Gardnerella vaginalis and description Gardnerella leopoldii sp. nov., Gardnerella piotii sp. nov. and Gardnerella swidsinskii sp. nov., with delineation of 13 genomic species within the genus Gardnerella. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2019; 69(3): 679-87. https://dx.doi.org/10.1099/ijsem.0.003200
  12. Крысанова А.А., Гущин А.Е., Савичева А.М. Значение определения генотипов Gardnerella vaginalis в диагностике рецидивирующего бактериального вагиноза. Медицинский алфавит. 2021; 30: 48-52. [Krysanova A.A., Gushchin A.E., Savicheva A.M. The importance of determining Gardnerella vaginalis genotypes in the diagnosis of recurrent bacterial vaginosis. Medical Alphabet. 2021; 30: 48-52 (in Russian)]. https://dx.doi.org/10.33667/ 2078-5631-2021-30-48-52
  13. Swidsinski A., Doerffel Y., Loening-Baucke V., Swidsinski S., Verstraelen H., Vaneechoutte M. et al. Gardnerella biofilm involves females and males and is transmitted sexually. Gynecol. Obstet. Invest. 2010; 70(4): 256-63. https://dx.doi.org/10.1159/000314015
  14. Swidsinski A., Loening-Baucke V., Swidsinski S., Sobel J.D., Dörffel Y., Guschin A. Clue cells and pseudo clue cells in different morphotypes of bacterial vaginosis. Front. Cell. Infect. Microbiol. 2022; 12: 905739. https://dx.doi.org/10.3389/fcimb.2022.905739
  15. Swidsinski A., Amann R., Guschin A., Swidsinski S., Loening-Baucke V., Mendling W. et al. Polymicrobial consortia in the pathogenesis of biofilm vaginosis visualized by FISH. Historic review outlining the basic principles of the polymicrobial infection theory. Microbes Infect. 2024; 26(8): 105403. https://dx.doi.org/10.1016/j.micinf.2024.105403
  16. Oliveira R., Almeida C., Azevedo N.F. Detection of microorganisms by fluorescence in situ hybridization using peptide nucleic acid. Methods Mol. Biol. 2020; 2105: 217-30. https://dx.doi.org/10.1007/ 978-1-0716-0243-0_13
  17. Савичева А.М. Современные представления о лабораторной диагностике репродуктивно значимых инфекций у женщин репродуктивного возраста. Мнение эксперта. Вопросы практической кольпоскопии. Генитальные инфекции. 2022; (3): 34-9. [Savicheva A.M. Modern ideas about the laboratory diagnosis of reproductively significant infections in women of reproductive age. Expert opinion. Issues of Practical Colposcopy & Genital Infections. 2022; 3: 34-9 (in Russian)]. https://dx.doi.org/10.46393/27826392_2022_3_34
  18. Савичева А.М., Крысанова А.А., Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Будиловская О.В., Хуснутдинова Т.А., Тапильская Н.И., Коган И.Ю., Свидзинский А.В., Свидзинская С. Применение метода флуоресцентной гибридизации in situ в диагностике бактериального вагиноза. Акушерство и гинекология. 2023; 12: 68-77. [Savicheva A.M., Krysanova A.A., Shalepo K.V., Spasibova E.V., Budilovskaya O.V., Khusnutdinova T.A., Tapilskaya N.I., Kogan I.Yu., Swidsinski A.V., Swidsinski S. Application of fluorescent in situ hybridization in the diagnosis of bacterial vaginosis. Obstetrics and Gynecology. 2023; (12): 68-77 (in Russian)]. https://dx.doi.org/10.18565/aig.2023.129
  19. Randjelovic I., Moghaddam A., Freiesleben de Blasio B., Moi H. The role of polymorphonuclear leukocyte counts from urethra, cervix, and vaginal wet mount in diagnosis of nongonococcal lower genital tract infection. Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2018; 2018: 8236575. https://dx.doi.org/10.1155/2018/8236575
  20. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. М.: МИА; 2012. 470 c. [Kira E.F. Bacterial vaginosis. Moscow: MIA; 2012. 470 p. (in Russian)].
  21. Amsel R., Totten P.A., Spiegel C.A., Chen K.C., Eschenbach D., Holmes K.K. Nonspecific vaginitis. Diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations. Am. J. Med. 1983; 74(1): 14-22. https://dx.doi.org/10.1016/ 0002-9343(83)91112-9
  22. Nugent R.P., Krohn M.A., Hillier S.L. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation. J. Clin. Microbiol. 1991; 29(2): 297-301. https://dx.doi.org/10.1128/ jcm.29.2.297-301.1991

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Пациентка Д., отделяемое влагалища: световая микроскопия, многослойный плоский эпителий, поверхностные эпителиальные клетки, Л:Э менее, чем 1:1, превалирует морфотип лактобацилл. Слева - окраска по Граму, ×1000, по центру - окраска метиленовым синим, ×1000, справа - люминесцентная микроскопия, метс РиГинаМ Cy3 EUB 338; Lactobacillus crispatus, x1000

Скачать (717KB)
3. Рис. 2. Пациентка К., отделяемое влагалища: световая микроскопия, многослойный плоский эпителий, поверхностные эпителиальные клетки, Л:Э менее, чем 1:1, «ключевые клетки», Слева - окраска по Граму, × 1000; по центру - окраска метиленовым синим, ×1000; справа - люминесцентная микроскопия, метод РиГинаМ Cy3 EUB 338; Gardnerella vaginalis, × 1000

Скачать (716KB)
4. Рис. 3. Пациентка М., отделяемое влагалища: световая микроскопия, многослойный плоский эпителий, поверхностные эпителиальные клетки, Л:Э менее, чем 1:1, «ключевые клетки». Слева - окраска по Граму, ×1000; по центру - окраска метиленовым синим, × 1000; справа - люминесцентная микроскопия, метод РиГинаМ окраска Cy5 gard, красная флюоресценция, Gardnerella vaginalis; окраска Cy3 ato, желтая флюоресценция, Atopobium vaginac (Fannyhesea vaginae), ×600

Скачать (726KB)

© ООО «Бионика Медиа», 2025