Создание методов сравнительного протеомного анализа мочи беременных и небеременных женщин для исследования процессов, протекающих при беременности


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Цель исследования. Получение экспериментальных данных о протеоме мочи беременных при физиологической беременности для повышения диагностической значимости выявляемых в моче маркеров различных заболеваний. Материал и методы. Для стандартизации протокола сбора мочи были отобраны образцы мочи 10 небеременных женщин в возрасте от 24 до 34 лет. Выбрана вторая утренняя моча как объект исследования и время 20 минут как рекомендуемое время хранения образца на льду до предварительной обработки. Для стандартизации протокола сбора мочи беременных для последующего протеомного анализа были отобраны образцы мочи 10 женщин на 15-17-й неделе беременности в возрасте от 23 до 35 лет, с нормально протекающей беременностью с общим содержанием белка в моче не выше 100 мкг/мл (отсутствие протеинурии). Пробы мочи анализировались на базе нанопоточного высокоэффективного жидкостного хроматографа (нано-ВЭЖХ, nano-HPLC) Agilent 1100 (Agilent, США) и масс-спектрометра FinniganLTQ FT(ThermoElectron, Бремен, Германия). Результаты. Разработан и стандартизирован протокол выделения белковых экстрактов из проб мочи, включающий процедуру первичного отбора проб мочи у пациенток и экстрагирование белковых смесей из проб мочи. В ходе исследования показана высокая воспроизводимость и информативность протеомных данных состава мочи беременных, что позволяет нам предложить данный протокол для определения изменений протеома мочи, связанных с беременностью, определения характерных качественных изменений белкового профиля мочи при беременности, исследования возможности использования выявленных белковых молекул в качестве биомаркеров для ранней диагностики различных заболеваний, связанных с беременностью.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Наталия Леонидовна Стародубцева

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова; ФБУН Институт энергетических проблем химической физики РАН

Email: proteom.oparina4@gmail.com
к.б.н., зав. лабораторией протеомики репродукции человека; научный сотрудник лаборатории ионной и молекулярной физики

Ольга Владимировна Вавина

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова

Email: o_vavina@oparina4.ru
врач акушер-гинеколог, родильное отделение

Зульфия Сагдуллаевна Ходжаева

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова

Email: z_khodzhaeva@oparina4.ru
д.м.н., профессор г.н.с. 1-го отделения акушерского патологии беременности

Алексей Сергеевич Кононихин

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова; ФБУН Институт энергетических проблем химической физики РАН

Email: konoleha@yandex.ru
к.ф-м.н, научный сотрудник лабораторией протеомики репродукции человека; с.н.с. лаборатории ионной и молекулярной физики

Игорь Алексеевич Попов

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова; ФБУН Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Email: hexapole@gmail.com
к.ф-м.н., с.н.с. лаборатории масс-спектрометрии биомакромолекул

Анна Евгеньевна Бугрова

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова; ФБУН Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

с.н.с. лаборатории нейрохимии

Зилия Ильдаровна Усманова

ФБУН Институт энергетических проблем химической физики РАН; Московский физико-технический институт

Email: ziliya.usmanova@gmail.com
студент лаборатории ионной и молекулярной физики; студент

Юрий Иродионович Костюкевич

ФБУН Институт энергетических проблем химической физики РАН; Московский физико-технический институт

Email: yura542@gmail.com
научный сотрудник лаборатории ионной и молекулярной физики

Михаил Юрьевич Высоких

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова

Email: m_vysokikh@oparina4.ru
к.б.н., зав. лабораторией митохондриальной медицины

Наталья Енкыновна Кан

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова

Email: n_kan@oparina4.ru
д.м.н., главный врач

Евгений Николаевич Николаев

ФБУН Институт энергетических проблем химической физики РАН; ФБУН Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Email: ennikolaev@rambler.ru
д.ф-м.н., зав. лабораторией масс-спектрометрии биомакромолекул, зав. лабораторией ионной и молекулярной физики

Геннадий Тихонович Сухих

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова

Email: g_sukhikh@oparina4.ru
д.м.н., академик РАН, профессор, директор

Список литературы

  1. Schaub S., Wilkins J., Weiler T., Sangster K., Rush D., Nickerson P. Urine protein profiling with surface-enhanced laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry. Kidney Int. 2004; 65(1): 323-32.
  2. Theodorescu D., Wittke S., Ross M.M., Walden M., Conaway M., Just I. et al. Discovery and validation of new protein biomarkers for urothelial cancer: a prospective analysis. Lancet Oncol. 2006; 7(3): 230-40.
  3. Candiano G., Musante L., Bruschi M., Petretto A., Santucci L., Del Boccio P. et al. Repetitive fragmentation products of albumin and alphai-antitrypsin in glomerular diseases associated with nephrotic syndrome. J. Am. Soc. Nephrol. 2006; 17(11): 3139-48.
  4. Fliser D., Wittke S., Mischak H. Capillary electrophoresis coupled to mass spectrometry for clinical diagnostic purposes. Electrophoresis. 2005; 26: 2708-16.
  5. Mischak H., Apweiler R., Banks R.E., Conaway M., Coon J., Dominiczak A. et al. Clinical proteomics: A need to define the field and to begin to set adequate standards. Proteomics Clin. Appl. 2007; 1(2): 148-56.
  6. Pisitkun T., Shen R.F., Knepper M.A. Identification and proteomic profiling of exosomes in human urine. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004; 101: 13368-73.
  7. Saetun P., Semangoen T., Thongboonkerd V. Characterizations of urinary sediments precipitated after freezing and their effects on urinary pro tein and chemical analyses. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2009; 296: F1346-54.
  8. Агрон И.А., Автономов Д.М., КононихинА.С., Попов И.А., Мошковский С.А., Николаев Е.Н. База данных по точным массово-временным меткам для хромато-масс-спектрометрического анализа протеома мочи. Биохимия. 2010; 25(4): 598-605. [Agron I.A., Avtonomov D.M., Kononikhin A.S., Popov I.A., Moshkovsky S.A., Nikolaev E.N. Database of accurate mass-timestamp for gas chromatography-mass spectrometry analysis of urine proteome. Biochemistry. 2010; 25 (4): 598-605. In Russ.]
  9. Стародубцева Н.Л., Попов И.А., Николаев Е.Н., Иванец Т.Ю., Алексеева М.Л., Логинова Н.С., Николаева А.В., Вавина О.В., Сухих Г.Т. Поиск воспроизводимых биомаркеров для диагностики преэклам-псии. Акушерство и гинекология. 2013; 2: 10-7. [Starodubtseva N.L., Popov I.A., Nikolaev E.N., Ivanets T.Yu., Alekseeva M.L., Loginova N.S., Nikolaeva A.V., Vavina O.V., Sukhikh G.T. Search of reproducible biomarkers for the diagnosis of pre-eclampsia. Obstetrics and gynecology. 2013; 2: 10-7. In Russ.]
  10. Conrads T.P., Anderson G.A., Veenstra T.D., Pasa-Tolic L., Smith R.D. Utility of accurate mass tags for proteome-wide protein identification. Anal. Chem. 2000; 72(14): 3349-54.
  11. Belov M.E., Rakov V.S., Nikolaev E.N., Goshe M.B., Anderson G.A., Smith R.D. Initial implementation of external accumulation liquid chromatography/ electrospray ionization Fourier transform ion cyclotron resonance with automated gain control. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2003; 17(7): 627-36.
  12. Shen Y., Tolić N., Masselon C., Pasa-Tolić L., Camp D.G. 2nd, Hixson K.K. et al. Ultrasensitive proteomics using high-efficiency on-line micro-SPE-nanoLC-nanoESI MS and MS/MS. Anal. Chem. 2004; 76(1): 144-54.
  13. Zubarev R.A., Hakansson P., Sundqvist B. Accuracy requirements for peptide characterization by monoisotopic molecular mass measurements. Anal. Chem. 1996; 68: 4060-3.
  14. Song Q., Chao J., Chao L. High level expression of human tissue kallikrein in the circulation induces hypotension in transgenic mice. Immunopharmacology. 1996; 32: 105-7.
  15. Carretero O.A. Vascular remodeling and the kallikrein-kinin system. J. Clin. Invest. 2005; 115: 588-91.
  16. Thebault S., Alexander R.T., Tiel Groenestege W.M., Hoenderop J.G., Bindels R.J. EGF increases TRPM6 activity and surface expression. J. Am. Soc. Nephrol. 2009; 20: 78-85.
  17. Christensen B., Petersen T.E., Sorensen E.S. Post-translational modification and proteolytic processing of urinary osteopontin. Biochem. J. 2008; 411: 53-61.
  18. Schmid M., Prajczer S., Gruber L.N., Bertocchi C., Gandini R., Pfaller W. et al. Uromodulin facilitates neutrophil migration across renal epithelial monolayers. Cell. Physiol. Biochem. 2010; 26(3): 311-8.
  19. Barratt J., Topham P. Urine proteomics: the present and future of measuring urinary protein components in disease. Can. Med. Assoc. J. 2007; 177: 361-8.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© ООО «Бионика Медиа», 2014

Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах