On neuroimmune mechanisms of pathogenesis of epileptic paroxisms in children

Full Text

В последние годы все более обоснованно высказывается предположение об аутоиммунной природе эпилепсии и эпилептических синдромов [1, 2, 3]. Правомерность этого подтверждается выявлением у больных эпилепсией аутоантител к нейроантигенам в крови и нарушением у них функции гематоэнцефалического барьера [4].

Одним из компонентов миелина, как известно, является гликолипидный антиген клеточных мембран олигодендроцитов — галактоцереброзид (ГалЦ), специфический компонент мембран миелина и клеток, продуцирующих миелин (олигодендроцитов — в центральной нервной системе и леммоцитов —в периферической нервной системе). Выявление аутоантител к этому антигену может использоваться как для диагностики повреждения клеточных структур ткани мозга, так и для оценки выраженности аутосенсибилизации у детей и взрослых к антигенам нервной ткани [5, 6]. В последнем случае уровень антител к специфическим антигенам мозга, в частности к ГалЦ, у здоровых детей в разные возрастные периоды может значительно отличаться. Это предположение основано на данных литературы о широкой вариабельности показателей гуморального и клеточного иммунитета у здоровых детей разного возраста [7, 8].

Не менее актуальной является диагностика нарушений иммунной системы у детей, считающихся практически здоровыми. Вполне вероятно, что "скрытые", "латентные" иммунологические расстройства могут служить одним из факторов риска развития церебральных осложнений на фоне инфекций, после черепно-мозговых травм, прививок и т.д. [9].

В настоящее время уровень антител к ГалЦ изучен у здоровых и больных взрослых людей [5], а также у небольшого числа здоровых детей, сведения о которых представлены без анализа для каждого возрастного периода [6].

Для обнаружения аутоантител к галакто- цереброзидам в сыворотке крови и ликворе был использован модифицированный метод реакции связывания комплемента, предложенный О.С.Лучаковой и Н.П.Тарановой [10]. В качестве антигена в реакции применяли липидную суспензию экстракта мозга быка. Постановку РСК проводили в стандартных полистироловых панелях. В отдельной панели подбирали рабочую дозу комплемента путем инкубации серии разведений комплемента с суспензией антигена и веронал-мединалового буфера pH 7,4 (все компоненты по 0,02 мл) в течение 45 минут в суховоздушном термостате при 37° С. Затем во все лунки панели добавляли по 0,04 мл гемолитической смеси (равные объемы 0,8% суспензии эритроцитов барана и разведенной гемолитической сыворотки), проводили инкубацию в течение 5 минут при температуре 40° С на водяной бане и визуально учитывали результат с 80—100% гемолиза. Рабочее разведение комплемента для последующего исследования сыворотки больных в РСК устанавливали по предпоследней лунке с полным гемолизом.

Исследуемую сыворотку и ликвор прогревали на водяной бане при температуре 56° С в течение 30 минут для инактивации эндогенного комплемента. Затем готовили серию двукратных разведений на веронал-мединаловом буфере в 0,002 мл в лунках панели. Во все лунки добавляли по 0,04 мл свежеприготовленной смеси, равной по объему суспензии, ГалЦ антигена и рабочего разведения комплемента. На этой же панели располагали контрольные растворы антигена (0,04 мл смеси 40 с 0,02 мл буфера) и сыворотки (по 0,02 мл сыворотки в разведении 1:8 и комплемента в рабочем разведении). Затем панель помещали в суховоздушный термостат при температуре 37° С на 45 минут. После этого во все лунки добавляли по 0,04 мл гемолитической смеси и проводили инкубацию при температуре 40° С на водяной бане до полного гемолиза (около 5 минут) в контрольных лунках. Все результаты учитывали по полному гемолизу в лунках с исследуемой сывороткой. Разведение сыворотки и ликвора, при котором наблюдался полный гемолиз эритроцитов, принимали за титр аутоантител.

В качестве референс-сыворотки использовали лиофилизированную сыворотку кроликов, иммунизированных очищенными ГалЦ, титр которой по РСК составлял 1:64—1:128. Серию разведений референс-сыворотки обрабатывали вместе с сывороткой больных в той же панели.

В качестве контрольной группы нами обследованы 206 человек (14 женщин в межродовом периоде, 12 родильниц и 180 детей в возрасте от 4 дней до 3 лет). По данным анамнеза и клинического осмотра, у этих лиц не было каких-либо отклонений со стороны нервной системы, и на момент обследования все они считались соматически здоровыми.

Результаты обследования показали, что у здоровых женщин в межродовом периоде аутоантитела к ГалЦ либо не выявляются, либо обнаруживаются в очень низких титрах (до 1:4), не превышающих верхнюю границу нормы, ранее установленную для здоровых взрослых [И]. В то же время у всех женщин в послеродовом периоде и у их новорожденных обнаруживаются аутоантитела к ГалЦ в высоких титрах — от 1:32 до 1:512. Эти данные позволяют предположить, что аутоантитела к ГалЦ у новорожденных появляются вследствие их трансплантарного переноса из крови матери. Наличие антител к ГалЦ у новорожденных нельзя отнести за счет их продукции собственной иммунной системой плода, так как при нормальном течении внутриутробного периода продукция антител В-клетками вообще отсутствует [12].

Выявление высокого уровня аутоантител к специфическому антигену нервной ткани у практически здоровых женщин в послеродовом периоде и у здоровых новорожденных является совершенно новым, неожиданным фактом, поскольку у здоровых взрослых людей антитела с такими титрами обычно не обнаруживаются [5, 11, 13]. Это можно объяснить, по-видимому, активацией адаптационнозащитных механизмов, возникающих вследствие гибели части клеток нервной ткани плода в ходе ее интенсивной дифференцировки в последние месяцы внутриутробного периода [7].

Интерес представляло также изучение динамики изменения уровня антител к ГалЦ в сыворотке крови здоровых детей в зависимости от возраста. Установлено, в частности, что уровень антител у большинства здоровых детей резко снижается уже в первые 3 месяца жизни. Титры антител к ГалЦ 1:16 составляют у них только 13,3%, титры 1:32 — 3,3%, а более высокие титры не выявляются совсем. К шестимесячному возрасту титры антител к ГалЦ приближаются у здоровых детей к границе нормы взрослых.

У большинства части детей в возрасте от 6 месяцев до 3 лет титры антител, превышающие норму взрослых, не обнаруживаются, и лишь примерно у 12% детей к 2-3 годам выявляются титры антител, которые в 2 раза выше нормы взрослых и поэтому не считаются диагностически значимыми.

Таким образом, наличие антител к гликолипидному антигену мозга (ГалЦ) у здоровых новорожденных, как и элиминация антител в течение первого года жизни являются вполне закономерными и должны учитываться при использовании показателей противогалактоцереброзидных аутоантител в качестве диагностического теста, подтверждающего повреждение клеточных структур нервной ткани при различных поражениях нервной системы. Не исключено также, что способность антител фиксироваться на мембранах олигодендроцитов, нарушая тем самым нейрон-глиальные взаимоотношения [10, 13, 14], вносит свой вклад в развитие заболеваний нервной системы, в том числе и в патогенез судорожных состояний в раннем детском возрасте.

Значительная роль аутоагрессии в патогенезе эпилепсии, особенно ее злокачественных форм у детей, подтверждена некоторыми иммунологическими исследованиями [2, 3, 15, 16, 17, 18, 19], которые нередко проводились с использованием не строго специфических для нервной ткани методик. Кроме того, полученные результаты не сопоставлялись у больных с разными формами заболевания и с иммунологическими показателями у матерей.

Нами проведено обследование 162 детей с эпилептическими и неэпилептическими пароксизмами и 102 матерей больных детей на наличие аутоантител к ГалЦ. Группа больных с эпилептическими пароксизмами состояла из 150 детей: у 33 из них была эпилепсия, у 103 — эпилептические синдромы, у 14 — эпилептические реакции. Обследованы 12 детей с неэпилептическими судорогами. У 90 матерей дети страдали эпилептическими припадками (у 13 — эпилепсия, у 70 — эпилептические синдромы, у 7 — эпилептические реакции), у 12 — неэпилептическими судорогами. Как и ранее, при анализе результатов иммунологических исследований в качестве диагностически значимых титров антител принимались такие, значения которых превышали контрольные данные в 4 и более раз.

При анализе данных о наличии аутоантител к ГалЦ в сыворотке крови у больных с эпилептическими пароксизмами установлено, что у 33,3% из них этот показатель соответствовал отвечающим возрасту контрольным цифрам, а у 66,7% детей выявлены диагностически значимые титры. Среди последних в возрасте до одного года было 29% детей, от одного года до 2 лет — 14% и старше 2 лет — 57%. Диагностически значимые титры аутоантител к ГалЦ чаще выявлялись у больных с эпилептическими синдромами (80,6%), чем с эпилепсией (57,6%) и эпилептической реакцией (35,7%). У всех детей с неэпилептическими пироксизмами титры антител к ГалЦ совпадали с возрастными контрольными данными или их увеличение не имело диагностического значения.

У 94 детей с эпилептическими пароксизмами состояние иммунной системы оценивали в динамике, причем повторно титр антител к ГалЦ определяли через 3—4 недели после первого исследования. У 40 (42,6%) из этих детей при первом обследовании титры антител соответствовали возрастной норме, при повторном — оставались нормальными у 36 (90%); у 4 (10%) детей выявлены диагностически значимые титры. Первое исследование показало диагностически значимые титры у 54 (57,4%) детей, повторное — их нормализацию у 16 (29,7%) детей с клинической ремиссией. У 38 (79,4%) больных диагностически значимые титры сохранялись. Снижение диагностически значимых титров аутоантител наблюдалось у 75% больных, получавших гормональное лечение.

У детей с неэпилептическими пароксизмами ни при первом, ни при повторном исследованиях диагностически значимых титров антител к ГалЦ не выявлено.

Полученные данные свидетельствуют о наличии серьезных нарушений в иммунной системе у детей с эпилептическими пароксизмами, причем наиболее отчетливо они выражены у больных с эпилептическими синдромами. По всей видимости, тяжесть и прогредиентность течения заболевания во многом определяются длительностью процесса развития иммунологических изменений и степенью их необратимости.

Состояние иммунной системы матери может существенно влиять как на формирование иммунной системы у ребенка, так и на ее функционирование в течение длительного периода жизни [7, 20]. Именно поэтому интерес представляло изучение уровня антител к ГалЦ не только у детей с различными пароксизмальными расстройствами сознания, но и у их матерей.

Изучение уровня антител к ГалЦ у матерей, чьи дети страдали пароксизмальными расстройствами сознания, показало, что диагностически значимые титры отсутствовали у всех женщин, имевших детей с неэпилептическими пароксизмами, и у 29 (32,2%) матерей, у чьих детей эпилептические пароксизмы протекали более доброкачественно. У 61 (67,8%) матери выявлены диагностически значимые титры аутоантител к ГалЦ. У детей этих матерей в 85,2% случаев установлены эпилептические синдромы, в 11,5% — эпилепсия, в 3,3% — эпилептические реакции, и заболевания у них протекали значительно тяжелее, чем у других детей с аналогичным диагнозом. Детей с синдромом Веста, например, имели 42 (68,9%) матери, с синдромом Леннокса— Гасто — 5 (8,2%) матерей.

Таким образом, выявленные изменения в иммунной системе у матерей коррелируют с тяжестью течения заболевания у их детей. Это связано, вероятно, с таким влиянием иммунной системы организма матери на плод, которое в периоде новорожденности препятствует катаболизму антител, а в дальнейшем способствует стимуляции процессов сенсибилизации к собственной нервной ткани.

Полученные результаты не только подтверждают важную роль иммунной системы в патогенезе тяжелых форм эпилептических пароксизмов у детей раннего возраста, но и позволяют в комплексе с клинико-биохимическими данными осуществлять их раннюю диагностику, прогнозировать течение заболевания и способствовать своевременному назначению патогенетического, в частности, иммунокорригирующего лечения.

About the authors

V. I. Guzeva

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg

References

Supplementary files