Разработка метода селективной оценки микробицидной активности комплемента в сыворотке крови человека

Актуальность. Способность сыворотки крови ингибировать жизнедеятельность микроорганизмов в первую очередь обусловлена присутствием в ней группы катионных факторов (лизоцим, р-лизин и др.) и белков системы комплемента. Напрямую комплемент способен вызывать лизис только некоторых грамотрицательных бактерий, в то время как катионные факторы преимущественно активны в отношении грамположительных бактерий. Изучение вклада индивидуальных антимикробных компонентов сыворотки и их сочетанного действия в её микробицидность поможет расширить понимание молекулярных механизмов врожденного иммунитета. Цель исследования. Разработка метода селективного истощения сыворотки по катионным факторам с сохранением функциональной активности системы комплемента. Материал и методы. В качестве исходного материала использовали пулированную сыворотку крови здоровых доноров. Истощение сыворотки осуществляли в процессе ее инкубации с суспензией карбоксиметилцеллюлозы. Для поиска оптимальных условий связывания катионных белков и пептидов варьировали либо концентрацию NaCI в пробе, либо объем вносимой суспензии полимера. Удаление катионных факторов из сыворотки оценивали по остаточной ферментативной активности лизоцима, функциональную активность комплемента - по гемолитической активности сыворотки в отношении эритроцитов кролика. Проведено сравнение микробицидностинативной и истощённой сыворотки в отношении грамположительной бактерии Listeria monocytogenes EGD. Результаты. Инкубация сыворотки с равным объемом суспензии карбоксиметилцеллюлозы в присутствии 0,1 М NaCI позволяет эффективно удалять катионные полипептиды, при этом функциональная активность комплемента существенно не меняется. Истощение сыворотки по катионным факторам значительно ослабляет ее антимикробную активность по сравнению с нативной сывороткой. Выводы. Разработан метод, позволяющий избирательно удалять катионные факторы из сыворотки крови. Благодаря этой процедуре становится возможной селективная оценка микробицидной активности комплемента без влияния со стороны антимикробных катионных полипептидов сыворотки.

врожденный иммунитет, система комплемента, лизоцим, в-лизин