Применение ВЭЖХ-масс-спектрометрии для количественного определения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата в плазме крови крыс
- Авторы: Попов Н.С1, Егорова Е.Н1, Петрова М.Б1, Андрианова Е.В1, Шикунова О.А1
-
Учреждения:
- ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России»
- Выпуск: Том 24, № 10 (2021)
- Страницы: 45-51
- Раздел: Статьи
- URL: https://journals.eco-vector.com/1560-9596/article/view/112891
- DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2021-10-06
- ID: 112891
Цитировать
Полный текст
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Доступ платный или только для подписчиков
Аннотация
Актуальность. Исследования эффективности применения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния №ацетил-6-аминогексаноата (ацексамата) в виде мази для лечения ожоговых ран у животных показали перспективность его использования в качестве регенеранта и репаранта. Одним из важных этапов фармакологического изучения наружных лекарственных форм является оценка резорбции. Эти исследования требуют внедрения точных и воспроизводимых биоаналитических методик. Цель исследования. Разработка и валидация хромато-масс-спектрометрической методики количественного определения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния №ацетил-6-аминогексаноата в плазме крови крыс для последующей оценки резорбции вещества из лекарственных форм для наружного применения. Материал и методы. Объектом исследования явился 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния №ацетил-6-аминогексаноата, количественное определение которого в плазме крови крыс осуществляли с помощью ВЭЖХ Agilent Technologies 1260 Infinity II и масс-спектрометра AB Sciex 3200MD. Хроматограммы 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина, ацексамовой кислоты и сульфацета-мида (внутренний стандарт) были построены в режиме MRM. Хроматографическое разделение аналитов проводили с использованием колонки Phenomenex Synerdgi C18 4 мкм, 2x50 мм, элюирование осуществляли в градиентном режиме смесью воды и абсолютного метанола. Анализировали калибровочные стандарты, образцы контроля качества и холостые образцы. Для разработанной методики определяли аналитический диапазон, предел детектирования, нижний предел количественного определения, линейность. Методику валидировали по показателям: селективность, матричный эффект, степень извлечения, перенос вещества, точность и прецизионность, стабильность. Разработанная методика была использована для оценки резорбции 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния №ацетил-6-аминогексаноата из мази после однократного нанесения на поверхность ожоговых дефектов кожи крыс. Результаты. Через 2 ч после нанесения мази концентрации 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина и ацексамовой кислоты в плазме крови крыс составили соответственно 18,05±0,96 и 21,62± 1,12 нг/мл в пересчете на 2-этил-6-метил-3-гидрокси-пиридиния №ацетил-6-аминогексаноата. Полученные результаты свидетельствуют о незначительной резорбции исследуемого вещества через поверхность ожогового дефекта. Выводы. Разработанная методика количественного определения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния №ацетил-6-аминогекса-ноата в плазме крови крыс является селективной, точной, прецизионной, линейной и по всем параметрам соответствует требованиям к валидации биоаналитических методик.
Полный текст
Об авторах
Н. С Попов
ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России»к.фарм.н., зав. научно-исследовательской лабораторией г. Тверь, Россия
Е. Н Егорова
ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России»д.м.н., зав. кафедрой биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики г. Тверь, Россия
М. Б Петрова
ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России»д.б.н., профессор, зав. кафедрой биологии г. Тверь, Россия
Е. В Андрианова
ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России»ассистент, кафедра биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики г. Тверь, Россия
О. А Шикунова
ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России»
Email: education@tvgmu.ru
ассистент, кафедра фармации г. Тверь, Россия
Список литературы
- Iismaa S.E., Kaidonis X., Nicks A.M., Bogush N., Kikuchi K., Naqvi N., Harvey R.P., Husain A., Graham R.M. Comparative regenerative mechanisms across different mammalian tissues. NPJ Regen. Med. 2018; 23 (3): 6. doi: 10.1038/s41536- 018-0044-5.
- Макаревич П.И., Ефименко А.Ю., Ткачук B.A. Биохимическая регуляция регенеративных процессов факторами роста и цитокинами: основные механизмы и значимость для регенеративной медицины. Биохимия. 2020; 85 (1): 15-33. doi: 10.31857/S0320972520010029.
- Пахомов Д.В., Блинова Е.В., Шимановский Д.Н., Кильмяшкина М.Ф., Казаева М.А., Блинов Д.С., Нелипа М.В., Николаев А.В., Алхататнех Б.А., Скачилова С.Я., Богоявленская Т.А., Кытько О.В. Доказательные аспекты стимулирования заживления неосложненной раны при локальном применении серебряной соли ацексамовой кислоты. Оперативная хирургия и клиническая анатомия. 2020; 4 (1): 19-25. doi.org/10.17116/operhirurg2020401119.
- Блинова Е.В., Миронов М.А., Блинов Д.С. Регенерация инфицированной кожной раны на фоне топического воздействия солями №ацетил-6- аминогексановой кислоты. Здоровье и образование в XXI веке. 2018; 20 (7): 80-83.
- Popov N.S., Demidova M.A., Malygin A.S. Assessment of pharmacological activity and bioavailability of the new derivative 1,3,4-thiadiazole. Research Results in Pharmacology. 2018; 4 (2): 27-46. doi: 10.3897/rrpharmacology4.27582.
- Скачилова С.Я., Ермакова Г.А., Блинова E.B. и dp. Мазь для лечения ожогов 1-3 степени. Патент на изобретение № 2731175 зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 31.08.2020 г.
- Андрианова Е.В., Егорова Е. Н., Петрова М.Б., Пахомов М.А. Биохимические аспекты прорегенераторного действия 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаоната. Вестник биотехнологии и физикохимической биологии имени Ю.А. Овчинникова. 2021; 17(1): 12-16.
- Guidance for Industry: Analytical procedures and method validation (draft). U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and Research (CDER). U.S. Government Printing Office: Washington, DC, 2000.
- Guideline on validation of bioanalytical methods (draft). European Medicines Agency. Committee for medicinal products for human use: London, 2009.
- Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издание. М., 2015; 1: 1470
- Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М.: Гриф и К., 2012.
Дополнительные файлы
