Том 26, № 3 (2023)

В настоящее время для фармацевтической разработки как оригинальных, так и воспроизведенных лекарственных препаратов применяется системный научно обоснованный подход для создания модельных составов и технологии лекарственной формы. Использование данного подхода выражается в парадигме качества путем разработки или проектирования (Quality-by-Design, QbD) и применении методов управления рисками для качества (Quality risk management, QRM). Использование данных концепций и их глубокая интеграция между собой обусловлены наличием свойств неопределенности в проявлении рисков, имеющих различную степень тяжести последствий, вероятности появлений и их обнаруживаемости. В случае использования оригинальных фармацевтических субстанций, инновационных методов или лекарственных форм неопределенность возрастает, а с ними необходимость использования методов оценки, анализа, контроля, принятия и информирования о рисках. Цель работы – анализ возможностей внедрения системы QRM в процесс фармацевтической разработки, определение проектного поля и критических показателей качества и процесса, а также анализ особенностей и систематизации начальных методов оценки риска, в частности идентификации риска. Продемонстрированы возможные методы оценки и управления рисками в фармацевтической разработке на примере твердых лекарственных форм по таким ключевым характеристикам, как полиморфизм, размер частиц, растворимость фармацевтических субстанций, их взаимодействие со вспомогательными веществами и т.д. При рассмотрении методов идентификации риска, таких как: мозговой штурм, метод «Делфи», интервью, обзор документации, применение контрольных списков и построение диаграмм причинно-следственных связей и других, оценены преимущества и недостатки подходов и основных проблем, характерных для всех методов QRM.

Актуальность. Установление подлинности измельченного растительного сырья (РС) является актуальной задачей в связи с наличием сходных по морфологии видов, а также с возможной межвидовой гибридизацией. Характеристика спектров поглощения извлечений и их хроматографический профиль – один из значимых показателей подлинности РС.

Цель исследования – сравнительный анализ методами тонкослойной хроматографии (ТСХ) и спектрофотометрии водно-спиртовых извлечений из травы тимьяна Маршалла (Thymus marshallianus Willd.) (ТМ) и тимьяна ползучего (Thymus serpyllum L.) (ТП).

Материал и методы. Водно-спиртовые извлечения получали из 1,0 г сырья (точная навеска) двумя способами: экстрагент – 70%-ный этанол, нагревание на кипящей водяной бане; экстрагент – 50%-ный этанол, 20–22 °C. Спектры поглощения регистрировали в диапазоне 200–500 нм. Для хроматографирования использовали элюент этилацетат : муравьиная кислота безводная : вода (70:15:15). Детектирование зон адсорбции проводили после обработки 5%-ным спиртовым раствором AlCl₃ при 365 нм. В качестве стандартных образцов использовали рутин, кверцетин и цинарозид.

Результаты. С помощью микроскопического анализа установлены анатомо-диагностического признака листа ТМ и ТП – волоски различных типов. Спектры поглощения водно-спиртовых извлечений из ТМ и ТП, полученные 50%-ным и 70%-ным этанолом, имеют два выраженных максимума. При добавлении AlCl₃ наблюдается батохромный сдвиг длинноволновых полос поглощения. На хроматограммах этих извлечений обнаружена зона желтого цвета на уровне цинарозида, а также выявлены различия в количестве и окраске зон адсорбции извлечений ТМ и ТП.

Выводы. Спектры поглощения водно-спиртовых извлечений имеют два выраженных максимума, для ТП одинаковых по интенсивности, для ТМ – различающихся. Интенсивность дифференциальных спектров поглощения водно-спиртовых извлечений ТМ выше, что свидетельствует о большем содержании флавоноидов в его экстрактах. В экстрактах ТМ и ТП методом ТСХ обнаружен цинарозид, при этом на хроматограмме извлечений из травы ТМ различимы 11 зон адсорбции, а из ТП – 9.

Актуальность. Мезенхимные подобные стволовым стромальные клетки (МСК) представляют перспективный материал для терапии восстановления или регенерации костной и хрящевой тканей в лечении пациентов с повреждениями и заболеваниями опорно-двигательного аппарата. Использование гидрогелей для культивирования МСК позволит их защитить после введения в организм из-за потенциально «враждебной» среды поврежденных или больных тканей. На сегодняшний день недостаточно изучены свойства МСК в культивировании их на матрицах на основе природных и синтетических материалов.

Цель работы – оценить токсичность и адгезивные свойства гидрогелей на основе поливинилпирролидона (ПВП), полученных по двум технологиям, для МСК из жировой ткани (ЖТ) человека in vitro.

Материал и методы. В эксперименте использовали четыре стерильных ПВП-гидрогеля, различающихся технологией приготовления, наличием или отсутствием антибиотиков. Токсичность оценивали по числу витальных клеток (окраска 0,1%-ным раствором трипанового синего) после добавления суспензии МСК к гелям через 24 ч. Адгезивную способность МСК ЖТ человека по отношению к поверхности матриц определяли путем подсчета не прикрепившихся клеток через 24 ч. Поведение МСК ЖТ изучали в динамике (на 2-е и 5-е сутки культивирования) по скорости и качеству формируемого клеточного монослоя. Морфологический анализ клеток, состояние хроматина в ядре и наличие цитоплазматических включений проводили в образцах, окрашенных красителем Гимза.

Результаты. Установлено, что МСК ЖТ человека способны прикрепляться к поверхности всех четырех матриц, представленных физико-химически модифицированным искусственным материалом на основе ПВП. Все четыре гидрогеля не токсичны и пригодны для краткосрочного культивирования клеток. МСК ЖТ на ПВП-гидрогелях с добавлением антибиотиков демонстрировали более медленный рост при этом наблюдались морфологические изменения в виде вакуолей в протоплазме и пикноза в хроматине ядра клеток.

Выводы. Полученные результаты могут быть использованы для дальнейшего исследования и совершенствования методов анализа цитотоксичности разрабатываемых препаратов.

Актуальность. В последние 10 лет происходит активное изучение системы сопряжения метаболизма макроорганизма и его микробиома. Микробиотическая конверсия триптофана в биологически активные сигнальные молекулы представляет собой потенциальный регуляторный механизм, с помощью которого кишечная микробиота может изменять метаболизм как клеток кишечника, так и всего макроорганизма. Однако до сих пор остается не изученным содержанием метаболитов триптофанового обмена у пациентов с метаболически здоровым (МЗО) и метаболически нездоровым ожирением (МНЗО), а также взаимосвязь данных метаболитов с адипокинами и миокинами.

Цель исследования – изучить содержание метаболитов триптофана в сыворотке крови пациентов с ожирением и оценить взаимосвязь содержания адипокинов и миокинов с содержанием метаболитов триптофанового обмена бактериального и небактериального происхождения в сыворотке крови у пациентов с МЗО и МНЗО.

Материал и методы. Обследовано 266 пациентов: 138 здоровых добровольцев, не имеющих ожирения, и 128 пациентов с ожирением, из которых сформировали две группы: 30 пациентов с МЗО и 41 пациент с МНЗО. Концентрации метаболитов в крови и кале определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Количественный анализ адипокинов и миокинов проводили методом мультиплексного иммуноферментного анализа. Содержание метаболитов обмена триптофана в сыворотке крови оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.

Результаты. У пациентов с ожирением выявлено повышение сывороточной концентрации кинуренина, кинуреновой и хинолиновой кислот, индол-3-лактата, индол-3-бутирата и индол-3-ацетата. Пациенты с МЗО и МНЗО статистически значимо различались только по показателю концентрации триптамина в сыворотке крови. Вне зависимости от наличия/отсутствия метаболических нарушений у пациентов с ожирением установлено, что ксантуреновая и хинолиновая кислоты взаимосвязаны с концентрацией в сыворотке крови миостатина. При этом для пациентов с МЗО показано, что сывороточная концентрация доминантного катаболита индольного пути – индол-3-ацетата, взаимосвязана с содержанием в сыворотке крови инсулина и лептина, тогда как у пациентов с МНЗО лептинемия согласована с высокой концентрацией антраниловой кислоты в сыворотке крови, а гиперинсулинемия, напротив, связана с низкой концентрацией индол-3-пропионата в сыворотке крови.

Актуальность. Sequoia sempervirens (D.Don) Endl. – самые высокие реликтовые растения-долгожители, характеризующиеся ограниченным ареалом произрастания. Ценная древесина секвойи способна накапливать уникальные вторичные метаболиты, не имеющие синтетических аналогов. Создать стрессоустойчивые и высокопродуктивные растения можно с использованием методов клеточной биотехнологии, в частности, клеточной селекции in vitro, которая проводиться на каллусной культуре. Поэтому необходимо разрабатывать технологию in vitro быстрого получения хорошо пролиферирующей каллусной ткани с повышенным содержанием вторичных метаболитов.

Цель исследования – изучить влияние минерального состава питательной среды, фотопериода и эндогенных полифенолов на формирование каллусной ткани секвойи (Sequoia sempervirens (D.Don) Endl.) in vitro.

Материал и методы. Объект исследования – растения Sequoia sempervirens (D.Don) Endl.  Каллусную ткань получали из сегментов хвои и междоузлий стебля, которые изолировали из интактных растений. Экспланты культивировали на питательной среде МС и WPM, содержащей 2,5 мг/л БАП и 2,5 мг/л 2,4-Д. Локализацию фенольных соединений изучали в хвое, стеблях, апикальных почках растений секвойи, а также в каллусной ткани, полученной на питательной среде с разным минеральным составом и при различных режимах освещения. Для этого применяли гистохимические методы: на сумму фенольных соединений материал окрашивали 0,08% растром реактива Fast Blue, для изучения локализации флаванов (катехины и проантоцианидины) использовали реакцию с ванилиновым реактивом в парах соляной кислоты.