Частота выявления делеций AZF, мутаций CFTR и длинных аллелей CAG-повтора AR при первичной лабораторной диагностике в гетерогенной группе пациентов с мужским бесплодием


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Введение. В качестве молекулярно-генетических причин бесплодия у мужчин диагностируют микроделеции в области AZF на Y-хромосоме, компаунд-гетерозиготы по тяжелой и мягкой мутациям CFTR, как маркеры предрасположенности - длинные аллели CAG-повтора гена андрогенового рецептора (AR). Зачастую проводят комплексную лабораторную диагностику, при которой одновременно определяют панель биохимических, иммунологических, цито- и молекулярно-генетических маркеров. Целью настоящей работы стало выявление молекулярно-генетических нарушений, которые целесообразно одновременно тестировать у мужчины с неустановленной на текущий момент формой бесплодия для повышения информативности лабораторной диагностики. Материалы и методы. Проведено ретроспективное исследование, в которое вошли 885пациентов с мужским бесплодием. Делеции AZF определяли с помощью мультиплексной ПЦР по 10 STS-маркерам (sY83, sY84, sY86, sY127, sY134, sY143, sY152, sY157, sY254, sY255) и двум контрольным локусам, SRY и AMEL, с детекцией в полиакриламидном геле. Мутации в гене CFTR F508del, CFTRdel2,3(21kb), I507del, 1677delTA, 2143delT, 2184insA, 394delTT, W1282X, G542X, N1303K, R334W и 5Твыявляли методом ПЦР и мини-секвенирования. Для определения длины CAG-повтора AR проводили фрагментный анализ флуоресцентно меченных ПЦР-продуктов на капиллярном секвенаторе 3500xl. Результаты. Делеции AZFвыявлены в 8,2% случаев. Больше всего делеций было обнаружено в субрегионе AZFc - 58,9%, доля делеций AZFa составила 5,5%, AZFb - 12,3%, сочетанных делеций двух и трех субрегионов - 23,3%. Гетерозиготное носительство тяжелых мутаций CFTR обнаружено в 4,7% случаев, самой частой из них была мутация F508del - 83,3%, затем следовали CFTRdel21kb (7,1%) и W1282X(4,8%). Частота мягкой мутации сплайсинга 5Тсоставила 5,3%, а ее встречаемость достоверно превышала таковую в ранее опубликованной контрольной выборке (р=0,002). Генотипирование AR показало, что самым частым аллелем был 21(CAG), доля которого в распределении частот составила 21,5%. Выявлено 7CAG-гетерозигот с синдромом Кляйнфельтера. Длинные аллели с 27 и более CAG-тринуклеотидами были определены в 7,5% случаев мужского бесплодия. Заключение. В гетерогенной группе пациентов с мужским бесплодием при проведении первичной комплексной лабораторной диагностики причин заболевания целесообразно тестировать делеции AZFи наиболее частые мутации CFTR, включающие F508del, CFTRdel21kb, 1677delTA, 2143delT, W1282X и 5Т. Анализ более широкого перечня частых мутаций CFTR оправдан лишь в отношении пациентов с верифицированным обструктивным бесплодием. Перспективно секвенирование панелей ассоциированных с бесплодием генов с помощью NGS-технологий.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Д. С. Михайленко

ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет); Научно-исследовательский институт урологии и интервенционной радиологии им. Н. А. Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России; ФГБНУ «Медико-генетический научный центр»

Email: dimserg@mail.ru
старший научный сотрудник лаборатории медицинской генетики Института молекулярной медицины Научно-технологического парка биомедицины; к.м.н., доц., ведущий научный сотрудник лаборатории патологической анатомии и молекулярной генетики; врач - лабораторный генетик лаборатории молекулярно-генетической диагностики № 2

И. Ю Соболь

Научно-исследовательский институт урологии и интервенционной радиологии им. Н. А. Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России

Email: sobol.lux@yandex.ru
аспирант

Н. Ю Сафронова

Научно-исследовательский институт урологии и интервенционной радиологии им. Н. А. Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России

Email: nisa55@mail.ru
младший научный сотрудник лаборатории патологической анатомии и молекулярной генетики

О. А Симонова

ФГБНУ «Медикогенетический научный центр»

Email: simonova_o.a@mail.ru
врач - лабораторный генетик лаборатории молекулярно-генетической диагностики № 2

Е. А Ефремов

Научно-исследовательский институт урологии и интервенционной радиологии им. Н. А. Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России

Email: konfandrology@rambler.ru
д.м.н., заведующий отделом андрологии

Г. Д Ефремов

Научно-исследовательский институт урологии и интервенционной радиологии им. Н. А. Лопаткина - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России

Email: efremov.gen@yandex.ru
к.м.н., заведующий лабораторией патологической анатомии и молекулярной генетики

Б. Я Алексеев

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр радиологии» Минздрава России

Email: byalekseev@mail.ru
д.м.н., проф., заместитель генерального директора по науке

А. Д Каприн

ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России

Email: contact@nmicr.ru
академик РАН, проф., генеральный директор

М. В Немцова

ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет); ФГБНУ «Медико-генетический научный центр»

Email: nemtsova_m_v@mail.ru
д.б.н., проф., заведующая лабораторией медицинской генетики Института молекулярной медицины

Список литературы

  1. Чалый М.Е., Ахвледиани Н.Д., Харчилава Р.Р. Мужское бесплодие. Урология; 2017, 2-s2: 4-19). Doi: 10.18565/ urol.2017.2-supplement.4-19.
  2. Krausz C., Riera-Escamilla A. Genetics of male infertility. Nat Rev Urol. 2018;15(6):369-384. doi: 10.1038/s41585-018-0003-3.
  3. Colaco S., Modi D. Genetics of the human Y. chromosome and its association with male infertility. Reprod Biol Endocrinol. 2018;16(1):14. doi: 10.1186/s12958-018-0330-5.
  4. Souza D.A., Faucz F.R., Pereira-Ferrari L. et al. Congenital bilateral absence of the vas deferens as an atypical form of cystic fibrosis: reproductive implications and genetic counseling. Andrology. 2018;6(1):127-135. doi: 10.1111/andr.12450.
  5. Никифорова А.И., Абрамов Д.Д., Зобкова Г.Ю. и др. Определение мутаций гена CFTR у детей с муковисцидозом. Вестник РГМУ. 2018;3:35-41). doi: 10.24075/vrgmu.2018.037.
  6. Черных В.Б., Степанова А.А., Бескоровайная Т.С. и др. Частота и спектр мутаций и IVS8-T полиморфизма гена CFTR среди российских мужчин с бесплодием. Генетика. 2010;46(6):844-852
  7. Gottlieb B., Lombroso R., Beitel L.K., Trifiro M.A. Molecular pathology of the androgen receptor in male infertility. Reprod Biomed Online. 2005;10(1):42-48.
  8. Flannigan R., Schlegel P.N. Genetic diagnostics of male infertility in clinical practice. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2017;44:26-37. doi: 10.1016/j.bpobgyn.2017.05.002.
  9. Винник Ю.Ю., Борисов В.В. Диагностика мужского бесплодия: современное состояние проблемы. Клиническая лекция. Consilium Medicum. 2017;19(7):65-69). doi: 10.26442/2075-1753_19.7.65-69.
  10. Liu X.G., Hu H.Y., Guo Y.H., Sun Y.P. Correlation between Y. chromosome microdeletion and male infertility. Genet Mol Res. 2016;15(2):gmr.15028426. doi: 10.4238/gmr.15028426.
  11. Aксельрод Э.В., Миронов К.О., Михайленко Д.С. и др. Разработка и апробация методики на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для определения клинически значимых микроделеций в Y-хромосоме. Клиническая лабораторная диагностика. 2018;63(2):124-128). doi: 10.18821/0869-2084-2018-63-2-124-128.
  12. Абрамов Д.Д., Кадочникова В.В., Якимова Е.Г. и др. Высокая частота носительства в Российской Федерации мутаций гена CFTR, ассоциированных с муковисцидозом, и мутаций гена РАН, ассоциированных с фенилкетонурией. Вестник РГМУ. 2015;4:32-35
  13. Yang X., Sun Q., Yuan P. et al. Novel mutations and polymorphisms in the CFTR gene associated with three subtypes of congenital absence of vas deferens. Fertil Steril. 2015; 104(5): 1268-75.e 1 -2. Doi: 10.1016/j. fertnstert.2015.07.1143.
  14. Gelfi C., Perego M., Righetti P.G. et al. Rapid capillary zone electrophoresis in isoelectric histidine buffer: high resolution of the poly-T tract allelic variants in intron 8 of the CFTR gene. Clin Chem. 1998;44(5):906-913.
  15. Соловьева Е.В., Татару Д.А., Преда О.Г. и др. Мутации гена CFTR у мужчин с бесплодием. Медицинская генетика. 2018; 17(5):28-38). doi: 10.25557/2073-7998.2018.05.28-38.
  16. Михайленко Д.С., Бабенко О.В., Кириллова Е.А. и др. Комплексный молекулярногенетический анализ микроделеций области AZF, мутаций гена CFTR и длины CAG-повтора гена AR у мужчин с бесплодием. Проблемы репродукции. 2005;11(6):52-55
  17. Черных В.Б., Руднева С.А., Сорокина Т.М. и др. Влияние CAG-полиморфизма гена андрогенового рецептора (AR) на сперматогенез у мужчин с бесплодием. Андрология и генитальная хирургия. 2015;16(4):55-61). doi: 10.17650/2070-9781-2015-16-4-55-61.
  18. Xiao F., Lan A., Lin Z. et al. Impact of CAG repeat length in the androgen receptor gene on male infertility - a meta-analysis. Reprod BioMed Online. 2016;1-11. doi: 10.1016/j.rbmo.2016.03.012.
  19. Quaynor S.D., Bosley M.E., Duckworth C.G. et al. Targeted next generation sequencing approach identifies eighteen new candidate genes in normosmic hypogonadotropic hypogonadism and Kallmann syndrome. Mol Cell Endocrinol. 2016;437:86-96. doi: 10.1016/j.mce.2016.08.007.
  20. Robay A., Abbasi S., Akil A. et al. A systematic review on the genetics of male infertility in the era of next-generation sequencing. Arab J. Urol. 2018;16:53-64. doi: 10.1016/j.aju.2017.12.003.
  21. Черных В.Б., Яманди Т.А., Сафина Н.Ю. Новые молекулярные технологии в диагностике генетических причин мужского бесплодия. Андрология и генитальная хирургия. 2017;18(1):10-22). doi: 10.17650/2070-9781-2017-18-1-10-22.
  22. Gunes S., Arslan M.A., Hekim G.N., Asci R. The role of epigenetics in idiopathic male infertility. J. Assist Reprod Genet. 2016;33(5):553-569. doi: 10.1007/s10815-016-0682-8.
  23. Santi D., De Vincentis S., Magnani E., Spaggiari G. Impairment of sperm DNA methylation in male infertility: a meta-analytic study. Andrology. 2017;5(4):695-703. doi: 10.1111/andr.12379.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML

© ООО «Бионика Медиа», 2019