КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ТРАВЕ ШАЛФЕЯ МУЧНИСТОГО (SALVIA FARINACEA BENTH.)

Полный текст

Род Сальвия (Salvia L.) - крупный род многолетних травянистых растений и кустарников семейства яснотковые (Lamiaceae L.). Все виды этого рода являются эфирно- масличными; ряд из них вошли в культуру как лекарственные: шалфей лекарственный (Salvia officinalis L.), шалфей мускатный (Salvia sclarea L.), шалфей эфиопский (Salvia aethiopis L.) [5, 12]. Шалфей мучнистый не является лекарственным растением, в литературе имеются ограниченные сведения о его химическом составе и количественном содержании некоторых биологически активных веществ (БАВ). В народной медицине отвары и настои из шалфея мучнистого широко используются при головной боли, для лечения простуд, отравлений [12, 13]. Шалфей мучнистый (Salvia farinacea Benth.) - неприхотливое долгоцветущее многолетнее травянистое растение высотой до 1 м. Листья продолговато-яйцевидные, с острой или тупой верхушкой, клиновидным основанием, волнистые или цельнокрайние, голые, слегка опушенные лишь по жилкам. Соцветия длиной 15-20 см, на высоких цветоносах. Ось соцветия и чашечки густо опушены темно-синими, реже светло-серыми, короткими волосками. Венчик темно-синий, редко белый. Цветет с середины августа до поздней осени. Декоративную ценность представляют живописные кусты с рыхлыми соцветиями лилово-синей гаммы, служащие фоном для других однолетних культур в групповых посадках. В природе они живут несколько лет, но в более суровом климате в открытом грунте не зимуют, поэтому выращиваются как летники. Длительный период от прорастания до цветения (около 100 дней) обусловливает обязательность рассадного способа выращивания. Родиной шалфея мучнистого являются тропики и влажные субтропики Америки, Техас, Новая Мексика [5, 13, 15]. Сведения о содержании в траве шалфея мучнистого фенольных соединений и их качественном составе в научной литературе отсутствуют. Поэтому целью настоящего исследования являлось изучить качественный состав фенольных соединений травы шалфея мучнистого и определить количественное содержание суммы флавоноидов в сырье [8, 11]. Экспериментальная часть Образцы сырья (траву) шалфея мучнистого заготавливали в ботаническом саду Пятигорского медико-фармацевтического института в 2011-2013 годах на экспериментальных участках в фазу цветения, где растение интродуцировано из семян. Семена получали из Ставропольского НИИ Сельского хозяйства, сорт «Голубой иней». Сырье сушили воздушно-теневым способом. Качественные реакции на присутствие в сырье флавоноидов проводили с извлечением, полученным согласно методике, описанной в ГФ XI вып.2 , в частной статье «Трава зверобоя». К 1 мл извлечения прибавляли 2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% этаноле и 7 мл 95% этанола; раствор окрашивался в зеленовато-желтый цвет. К 2 мл извлечения добавляли 0,5 г цинковой пыли и 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной. Постепенно при нагревании на водяной бане появлялось розовое окрашивание (цианидиновая проба) [3, 4, 6]. Для установления качественного состава фенольных соединений из травы шалфея мучнистого получали извлечения с использованием спирта этилового 40% и 70%, соотношение сырья и экстрагента составляло 1:10, процесс проводили на водяной бане при температуре 60-70ºС в течение часа. Качественный состав фенольных соединений исследовали с помощью бумажной и тонкослойной хроматографии. На линию старта хроматографической бумаги с помощью микрошприца наносили в виде точки 0,1 мл 40% и 70% спиртовых извлечений и 0,05% спиртовые растворы рутина, кверцетина, гиперозида, феруловой и галловой кислот. Бумагу с нанесенными пробами высушивали на воздухе и помещали в камеру со смесью растворителей: н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:5), предварительно насыщенную в течение часа и хроматографировали восходящим способом. Хроматографирование проводили в течение 18-20 часов. После достижения фронтом растворителей линии финиша, бумагу вынимали, высушивали и просматривали в УФ-свете. Результаты хроматографирования представлены в таблице 1. Методом бумажной хроматографии в извлечениях идентифицировали рутин, кверцетин, галловую и феруловую кислоты [1, 7, 10, 14]. Для тонкослойной хроматографии использовали пластинки «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» и «Силуфол УФ». На линию старта пластинок с помощью микрошприца в виде точки наносили по 0,05 мл 40% и 70% спиртового извлечения шалфея мучнистого и спиртовые растворы стандартных образцов. Пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 10 минут, помещали в камеру со смесью растворителей бутанол: кислота уксусная ледяная: вода (4:1:5), предварительно насыщенную в течение 40 минут и хроматографировали восходящим способом. После прохождения фронтом растворителей 10 см пластинку вынимали, высушивали в вытяжном шкафу в течение 20 минут и просматривали в УФ-свете. На хроматограмме наблюдали пятна (коричневое - рутин, желтое - кверцетин). После обработки 2% спиртовым раствором алюминия хлорида и нагревания в течение 3 минут в сушильном шкафу при температуре 100-105 ºС, пятна фенольных соединений при- обрели желтую окраску в видимом и желто-зеленую флуоресценцию в УФ-свете [6, 7, 15]. Таким образом, методами хроматографического анализа в спиртовых извлечениях шалфея мучнистого установлено наличие рутина, кверцетина, гиперозида, а также галловой и феруловой кислот. Для более детального изучения фенольных соединений травы шалфея мучнистого использовали метод ВЭЖХ [2, 9]. Исследование проведено на факультете химии и высоких технологий Кубанского государственного университета. Для исследования использовали извлечение, полученное с помощью спирта этилового 70%. Спиртовое извлечение перед хроматографированием разбавляли (1:10) смесью ацетонитрил-фосфатный буфер (1:1). Исследование проводили методом обращенно-фазной жидкостной хроматографии, обеспечивающим высокое разрешение и чувствительность. Условия хроматографирования подобраны с учетом физико-химических свойств биологически активных веществ в растительном сырье, варьируя со- став элюента и длину волны детектирования. Анализ проведен на хроматографе Shimadzu LC 20 Prominence с последующей компьютерной обработкой результатов исследования в среде программы LC Soluton. Диодно-матричное детектирование в УФ-области спектра позволило оценить спектральные характеристики разделенных компонентов по хроматограмме и получить дополнительную информацию для их идентификации. Оптимальные результаты элюирования были получены в бинарной градиентной системе: ацетонитрил-водный раствор калия дигидрофосфата (0,04 М), подкисленный кислотой фосфорной до pH 2,8. Хроматографирование проводили на колонке Zorbax SB С18, размерами 150×2,1 мм, заполненной частицами сорбента 5 мкм (Agilent). Скорость потока элюента составила 0,25 мл/мин, температура термостата и ячейки детектора - 35 °С. Объем пробы - 5 мкл. При проведении анализа использовали градиентный ступенчатый режим поступления элюента (табл. 2). Детектирование веществ проводили при трех длинах волн (280 нм, 322 нм, 370 нм), идентифицировали по времени удерживания и спектрам поглощения растворов стандартных образцов, предварительно хроматографируя каждый из них в отдельности. Результаты качественного анализа спиртового извлечения из травы шалфея мучнистого представлены на рисунке 1 и в таблице 3. С помощью метода ВЭЖХ в траве шалфея мучнистого обнаружено 20 веществ фенольной природы, из них идентифицировано 4 фенолокислоты (кофейная, п-кумаровая, феруловая и коричная) и три флавоноида (рутин, гиперозид и кверцетин). Количественное определение флавоноидов проводили по методике, описанной в ГФ XI вып.2, в частной статье «Трава зверобоя» [4]. Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляли 30 мл 40% спирта. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей бане в течение 30 минут, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтровали через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Вату помещали в колбу для экстрагирования и прибавляли 30 мл 40% спирта. Экстракцию повторяли еще дважды в описанных выше условиях, фильтруя извлечение в ту же мерную колбу. После охлаждения объем извлечения доводили 40% спиртом до метки и перемешивали (раствор А). В мерную колбу вместимостью 25 мл помещали 1 мл раствора А, 1 мл раствора алюминия хлорида в 95% спирте этиловом и доводили объем раствора 95% спиртом этиловым до метки. Через 40 минут измеряли оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали раствор, состоящий из 1 мл извлечения, 1 капли кислоты уксусной и доведенный 95% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл. Расчет содержания флавоноидов проводили в пересчете на рутин. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандартного образца (СО) рутина. Содержание суммы флавоноидов в траве шалфея мучнистого составило 0,55-0,60%. Расчет вели в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (Х%) по формуле: Приготовление раствора стандартного образца (СО) рутина: около 0,05 г (точная навеска) СО рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135 ºС в течение 3 ч, растворяют в 85 мл 95% спирта этилового в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают [4]. Динамику накопления флавоноидов определяли в сырье шалфея мучнистого, заготовленном в 2011-2013 гг. Было установлено, что наибольшее накопление флавоноидов в надземной части происходило в траве шал- фея лекарственного, заготовленного на более инсолированных опытных участках, эти растения характеризовались наибольшей олиственностью и величиной куста. Содержание суммы флавоноидов в 2011 году варьировало от 0,55% до 0,58%, в 2012 году - 0,56-0,60%, в 2013 году - 0,55-0,60%. Выводы Таким образом, методами хроматографического анализа в траве шалфея мучнистого идентифицировано 9 веществ фенольной природы: флавоноиды - рутин, кверцетин, гиперозид; и 5 фенолкарбоновых кислот: кофейная, п-кумаровая, феруловая, галловая и коричная. Количественное содержание суммы флавоноидов в шалфее мучнистом составляет 0,55-0,60%. Проведенные исследования позволили расширить научные данные о фенольных соединениях шалфея мучнистого и предложить методику анализа шалфея мучнистого травы в фармации и медицине.

Об авторах

О. И Попова

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России

г. Пятигорск

А. С Никитина

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России

Email: lina_nikitina@mail.ru
г. Пятигорск

Е. А Азрякова

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России

г. Пятигорск

Список литературы

Дополнительные файлы