ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ЦВЕТКОВ КАЛЕНДУЛЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ

Полный текст

Известно, что флавоноиды играют ведущую роль в формировании важ-нейших фармакотерапевтических эффектов лекарственных растений: антимикробного, диуретического, противовоспалительного, противовирусного, желчегонного, спазмолитического и др. [1, 2]. Благодаря наличию в календуле лекарственной (ноготки) (Calendula officinalis L.) флавоноидов как важнейшей группы действующих веществ, сырье данного растения официнально применяется как антисептическое и противовоспалительное средство [2, 3]. Для широко известных фитопрепаратов на основе календулы лекарственной («Фитогепатол», «Грудной сбор № 4», «Калефлон», «Фитонефрол», «Ротокан», мазь «Календула», свечи «Кален- дула», «Настойка календула») отмечается терапевтическая эффективность и относи- тельная безопасность. Именно по этой причине, на наш взгляд, в настоящее время наблюдается новый виток активности исследований по изучению антимикробных свойств календулы лекарственной [4-9]. Многочисленные современные публикации зарубежных авторов свидетельствуют об антимикробных свойствах растения образцов календулы лекарственной, произрастающих в Бразилии, Пакистане, Индии, Ираке [4-9]. Обнаружено, что водное извлечение календулы проявляет выраженную антибактериальную активность против таких энтеропа-тогенных бактерий, как Salmonella, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei и Escherichia coli, особенно в концентрации 100 μг/мл [7]. Указанные возбудители были взяты в концентрациях 25 μг/мл, 50 μг/мл и 100 μг/мл. Объектом сравнения (контролем) являлся антибиотик «Цефотан» в дозе 10 μг/мл. Важно указать, что Shigella sonnei была наиболее чувствительна во всех изучаемых концентрациях, проявив максимально высокую зону задержки роста (23 мм) в концентрации 100 μг/мл на фоне «Цефотана» (зона задержки роста 16 мм), взятого в значении 10 μг/мл. Концентрация 25 μг/мл выявила менее выраженную активность против всех бактериальных изолятов, исключая Shigella sonnei, которая даже в указанном количестве показала зону задержки роста в 20 мм. Интересно, что антимикробная активность для всех возбудителей в концентрации 50 μг/мл также оказалась сопоставимой к таковым эффектам антибиотика «Цефотана». Значения зоны задержки роста в концентрации 50 μг/мл для Salmonella, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei и Escherichia coli составили 10 мм, 13 мм, 15 мм, 21 мм, 15 мм соответственно на фоне контрольного антибиотика в дозе 10 μг/мл (9 мм, 17 мм, 22 мм, 16 мм, 18 мм соответственно) [7]. В этой связи, можно рекомендовать препараты календулы при лечении кишечных инфекций данной этиологии. Изучение водного, ацетонового и метанольного извлечений свежих цветков ноготков в отношении пяти бактерий: Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli, Klebsiella spp. и Pseudomonas aeruginosa показали достаточно высокую антибактериальную активность в результате торможения зоны роста в чашках с посевным материалом [4]. Важно отметить, что некоторыми исследователями была показана перспективность комплексного применения растения. Так, на антимикробную активность исследованы метанольные и водные извлечения листьев, корней, цветков и стеблей календулы. Наилучшие результаты были обнаружены в отношении Escherichia coli и Salmonella typhi для метанольного извлечения корней ноготков. В плане мультирезистентных микроорганизмов эффективнее себя проявила композиция извлечений, полученных из различных органов растения [9]. Некоторые ученые указывают на высокую антимикробную активность стеблей календулы лекарственной [8]. Кроме того, была обнаружена антигрибковая активность метанольных и водных извлечений листьев, корней, цветков и стеблей календулы в отношении Aspargillus niger, Candida albicans [9]. Другие исследователи установили преимущество метанольного экстракта из цветков календулы по сравнению с извлечением этиловым спиртом в плане антимикробной активности на группу микроорганизмов, выделенных у пациентов [5]. Однако при этом была выявлена равноценная активность обоих извлечений по отношению к грибам рода Candida и рода Aspergillus, сопоставимая с таковой препарата «Флуконазол» [9]. Бразильские ученые указывают на перспективность гомеопатических препаратов на основе календулы с точки зрения проявления антимикробной активности [6]. Была проанализирована настойка календулы промышленного производства (Бразилия, аптека готовых лекарственных форм). Разведение настойки проводилось от значения 1:1 (исходная форма) через концентрации 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 к значению 1:64 в 70% этиловом спирте, на основе которого создан данный препарат. Данный подход был использован с целью оценки возможного положительного влияния спирта на антибактериальную активность настойки. Известно, что 70% этиловый спирт традиционно применяется для получения фитопрепаратов в форме настойки. Для теста были использованы несколько бактериальных штаммов. Хлоргекседин был использован как положительный контроль, а вода очищенная как отрицательный контроль. Антибактериальная активность настойки календулы обнаружена при максимальном разведении в отношении Streptococcus oralis 1:16 (зона задержки роста 6,5 мм), в отношении Streptococcus mutans и Streptococcu salivarius 1:32 (зона задержки роста 7,0 и 7,5 мм соответственно), в отношении Enterococcus faecalis и Eikenella corrodens 1:64 (зона задержки роста 6,0 и 6,5 мм соответственно). При этом спирт этиловый 70% не выявил какую-либо антибактериальную активность против исследуемых бактериальных штаммов [6]. Таким образом, многочисленные данные литературы свидетельствуют о перспективности изучения антимикробных свойств растения в плане дальнейшего расширения возможностей применения календулы лекарственной. Целью исследования являлось скрининговое изучение антибактериальной активности извлечений цветков календулы лекарственной. Материалы (объекты) и методы. Объектами исследования являлись извлечения календулы лекарственной: водное извлечение (настой) цветков календулы (1:20); настойка цветков календулы (1:5) (70% спирт) (разработка кафедры фармакогнозии СамГМУ); настойка цветков календулы (1:10) на 70% спирте (ООО «Тульская фармацевтическая фабрика», препарат «Календулы настойка», серия 91214 годен до 1217); жидкий экстракт цветков календулы (1:2) на 40% спирте; жидкий экстракт цветков календулы (1:2) на 70% спирте. Сырьем во всех случаях являлся воздушно-сухой образец цветков календулы высокопродуктивного сорта «Кальта», промышленно культивируемого в Самарской области (ЗАО «Самаралектравы»). В качестве тестовых культур для определения антимикробной активности водных и спиртовых извлечений нами были использованы следующие микроорганизмы: Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus cereus, Candida albicans. Определение минимальной ингибирующей концентрации проводили методом двойных серийных разведений в бульоне в соответствии с МУК 4.2.1890-04 [10]. Питательную среду готовили из сухой среды промышленного производства в соответствии с инструкцией изготовителя. Для приготовления инокулюма из бульонной культуры отбирали несколько однотипных изолированных колоний, петлёй переносили незначительное количество материала в пробирку с 4,0-5,0 мл жидкой неселективной среды. Затем ее доводили до оптической плотности 0,5 единиц по МакФарланду путем добавления стерильного бульона или изотонического раствора натрия хлорида. Для проведения исследования использовали микрометод, тестирование проводили при величине конечного объема 0,2 мл. При помощи многоканальных пипеток 96-луночный стерильный планшет для иммунологических исследований (с плоским дном) с крышкой заполняли двойными серийными разведениями исследуемых извлечений. После приготовления разведений инокулировали приготовленной суспензией исследуемого микроорганизма. Инкубацию проводили в обычной атмосфере при температуре 35ºС. При проведении инкубации планшет закрывали крышкой для предотвращения высыхания содержимого лунок. Учет результатов проводили визуально. Для определения наличия роста микроорганизма лунки с посевами просматривали в проходящем свете. Минимальное подавляющее рост разведение определяли по лунке, в которой подавлялся видимый рост микроорганизмов. Для оценки влияния на результаты исследования антимикробного действия спирта в исследовании дополнительно определяли его действие на тестовые культуры микроорганизмов методом двойных серийных разведений (положительный контроль). Результаты и обсуждение. В процессе микробиологического анализа были получены следующие результаты. Для настоя цветков календулы наблюдалась достаточно высокая активность в отношении всех изученных штаммов. В частности, настой оказывает антимикробное действие в отношении Escherichia coli до разведения в 4 раза, в отношении Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus и Bacillus cereus до разведения в 8 раз, и в отношении Candida albicans до разведения в 32 раза (табл. 1). Промышленный образец Тульской фармацевтической фабрики, настойка (1:10) на 70% спирте, проявил антибактериальную активность в отношении всех указанных штаммов, кроме кишечной палочки. В частности, настойка оказывает антимикробное действие в отношении Staphylococcus aureus до разведения в 8 раз, в отношении Pseudomonas aeruginosa до разведения в 16 раз, а также в отношении Bacillus cereus и Candida albicans до разведения в 64 раза (табл. 2). По результатам анализа для настойки цветков календулы (1:5) на 70% спирте выявлена антибактериальная активность в отношении таких возбудителей, как Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus до разведения в 8 раз, а также в отношении Bacillus cereus до разведения в 256 раз (табл.3). В сравнительном аспекте жидкий экстракт цветков календулы (1:2) 40% по сравнению с жидким экстрактом (1:2) 70% имеет наиболее широкий спектр воздействия на микроорганизмы, а именно: на Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus и Candida albicans. В отношении Staphylococcus aureus жидкий экстракт на 70% спирте не оказывает антимикробное действие. Однако жидкий экстракт на 70% спирте оказывает наиболее интенсивную антимикробную активность на Bacillus cereus до разведения в 256 раз, в то время как жидкий экстракт на 40% спирте оказывает наиболее интенсивную антимикробную активность на Candida albicans до разведения в 16 раз. В отношении Pseudomonas aeruginosa у обоих экстрактов проявляется одинаковая антимикробная активность до разведения в 8 раз (табл. 4, 5). Интересно, что жидкий экстракт цветков календулы (1:2) на 70% спирте проявляет наибольшую антимикробную активность среди всех исследуемых извлечений календулы лекарственной. Выводы Проведено скрининговое исследование антибактериальной активности извлечений цветков календулы лекарственной. Выявлено, что наиболее широким спектром антибактериальной активности обладает настой цветков календулы. В отношении Pseudomonas aeruginosa наиболее активным извлечением является настойка (1:10) на 70% спирте, в отношении Escherichia coli единственным извлечением, проявившим антимикробную активность, является настой цветков календулы (1:20), в отношении Bacillus cereus наибольшую активность проявили настойка цветков календулы (1:5) на 70% спирте и жидкий экстракт (1:2) на 70% спирте, в отношении Candida albicans наибольшую активность проявила настойка (1:10) на 70% спирте.

Об авторах

П. В Афанасьева

Самарский государственный медицинский университет

г. Самара

А. В Куркина

Самарский государственный медицинский университет

г. Самара

В. А Куркин

Самарский государственный медицинский университет

г. Самара

А. В Лямин

Самарский государственный медицинский университет

г. Самара

А. В Жестков

Самарский государственный медицинский университет

г. Самара

Список литературы

Дополнительные файлы