QUANTITATIVE DETERMINATION OF ROUTINE IN CHOLAGOGIC MIXTURE USING CAPILLARY ELECTROPHORESIS

Abstract

Cholagogic mixtures are effectively used for the treatment of liver diseases. We conducted a study of the mixture of the following composition: flores Helichrysi arenarii 1, herba Hyperici perforate 1, folia Urticae dioicae 1. The aim of this study is quantitative definition of rutin in cholagogic mixture by capillary electrophoresis. As a result, we have found that the cholagogic mixture contains 0,61 ± 0,02% rutin.

Full Text

Фитотерапия заболеваний печени является актуальной задачей современной медицины [1, 6]. Для ее осуществления предложен желчегонный сбор следующего состава: бессмертника песчаного цветков 1 ч., зверобоя продырявленного травы 1 ч., крапивы двудомной листьев 1 ч. Проблема стандартизации сбора на основе лекарственных растений связана с тем, что наличие большого количества биологически активных веществ затрудняет выделение и анализ каждого из них [3, 4]. Так, количественное определение рутина в сборе желчегонном методом спектрофотометрии оказалось невозможно, поскольку отсутствует пик при длине волны 410 нм. Целью данного исследования стало количественное определение рутина методом капиллярного электрофореза. Компоненты желчегонного сбора - бессмертника песчаного цветки, зверобоя продырявленного трава и крапивы двудомной листья - были приобретены в аптеках г. Пятигорска. Сырье соответствовало требованиям нормативных документов. В работе использовался стандартный образец рутина (Merck). Метод капиллярного электрофореза уже достаточно широко используется в анализе растительного сырья [2, 5, 7]. Анализ проводили с использованием системы капиллярного электрофореза «Капель-105М» (ООО «Люмэкс-Маркетинг», г. Санкт-Петербург) с кварцевым капилляром диаметром 75 мкм, общей длиной 60 см и эффективной длиной 50 см. Для подготовки капилляра проводили его последовательную промывку водой, раствором хлористоводородной кислоты 1М, водой, раствором натрия гидроксида 0,5М, водой, раствором ведущего электролита. Детектирование осуществляли спектрофотометрически при длине волны 365 нм. Анализ проводили при 20 кВ и температуре 20 °C. В качестве ведущего электролита использовали раствор натрия тетрабората 0,01 М. Аналитическую пробу сбора измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 3,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, добавляли 100 мл спирта этилового 70%. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок колбы. Горячее извлечение фильтровали через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. После охлаждения объем извлечения доводили спиртом этиловым 70% до метки и перемешивали. Перед вводом раствор центрифугировали при 7000 мин-1 в течение 5 мин. Приготовление раствора стандартного образца рутина: около 0,005 г (точная навеска) рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135 °С в течение 3 ч, растворяли в 85 мл спирта этилового 70% в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждали, доводили объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивали. Содержание рутина в сборе желчегонном в процентах (Х) вычисляли по формуле (1): (1) где С - концентрация рутина в испытуемом растворе, в мг/л; С0 - концентрация СО рутина, в мг/л; m - масса сбора, в г; m0 - масса СО рутина, в г; W - потеря в массе при высушивании сбора, в %. Результаты анализа раствора стандартного образца рутина и извлечения из исследуемого сбора представлены на рисунке 1 и в таблице1. Рисунок 1 - Электрофореграмма раствора стандартного образца рутина (1) и извлечения из желчегонного сбора (2) Таблица 1 - Содержание рутина в желчегонном сборе Содержание рутина, % Метрологические характеристики 0,60 = 0,61 S = 0,0216 = 0,0088 = 0,02 ε = 3,56% 0,64 0,59 0,62 0,61 0,58 Таким образом, содержание рутина в сборе желчегонном составляет 0,61±0,02%. Выводы В результате проведенного исследования было впервые установлено, что количественное содержание рутина в желчегонном сборе составляет 0,61±0,02%. Исследование извлечения, которое включает в себя большое количество биологически активных веществ, было успешно проведено методом капиллярного электрофореза.