АНАЛИЗ ПОЛИВИНИЛПИРРОЛИДОНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

Аннотация

Данная статья посвящена подбору под- вижной и неподвижной фазы для иденти- фикации поливинилпирролидона в составе лекарственных форм методом тонкослойной хроматографии.

Полный текст

Хроматография - это физико-химический метод разделения смесей, в которых разделяемые компоненты распределены между двумя фазами: одна из этих фаз неподвижная, а другая постоянно движется в определенном направлении. Для идентификации веществ методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) анализ проводился при одновременном хроматографировании одинакового количества анализируемого вещества и стандартного образца на одной и той же хроматограмме. Если вещества идентичны, то соответствующие им хроматографические зоны имеют одинаковую форму, интенсивность поглощения или окраски, а также равные величины Rf (отношение расстояния от линии старта до центра пятна к расстоянию от линии старта до фронта подвижной фазы) [1, 2]. Поливинилпирролидон (ПВП) - первичный продукт полимеризации N-винилпирролидона, относится к высокомолекулярным линейным полимерам с молекулами линейной структуры длиной около 100 мкм, которые в низких концентрациях способны снижать гидролитическое сопротивление. При введении в кровоток ПВП благоприятно воздействует на системную гемодинамику и микроциркуляцию. По своим физиологическим свойствам ПВП аналогичен альбумину и способен заменять его [3]. В фармацевтической практике нашли применение как растворимые, так и нерастворимые марки ПВП (рис. 1). ПВП входит во множество современных лекарственных форм, в т.ч. лиофилизированных, в связи с этим актуальной задачей является разработка метода его идентификации. Достаточно простым методом для идентификации веществ является метод ТСХ-анализа, который включен в Российскую и зарубежные фармакопеи. Материалы и методы. Поливинилпирролидон (BASF, Германия), ЛХС-1208, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 9 мг, ормустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 125 мг (ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России), различные органические растворители: аммиак водный 25%, о.с.ч.; ацетон, ч.д.а.; бензол, ч.д.а., н-гексан, х.ч., метанол, х.ч.; пропанол-2, о.с.ч.; хлороформ, х.ч.; этилацетат, х.ч.; этиловый эфир, ч.д.а. (Химмед, Россия); н-бутанол, ч.д.а. (ЗАО Экос-1, Россия); ледяная уксусная кислота (ЛУК), х.ч. (ЗАО «Мосреактив», Россия); спирт этиловый 95% (ЗАО «Брынцалов-А» Ферейн, Россия); йод кристаллический, ч.д.а. (Химмед, Россия); хроматографические пластинки Sorbfi ПТСХ-АФ-А, 10×15 см (Россия); Silica gel 60 F 254, 10×10 см со стеклянной подложкой (Merck, Германия); стеклянная камера с крышкой для ТСХ-анализа. Методика ТСХ-анализа. Подвижную фазу готовили в отдельной емкости путем смешивания выбранных растворителей и переливали в камеру, выложив внутренние стенки фильтровальной бумагой, смоченной в элюенте. Плотно закрывали камеру крышкой и оставляли на 25-30 мин. для насыщения камеры парами элюента. На линию старта хроматографической пластинки наносили по 5 мкл исследуемых образцов лиофилизатов ормустина и ЛХС- 1208 и водный раствор стандартного образца вещества свидетеля (СОВС). После подсушивания на воздухе пластинку с нанесенными пробами помещали в хроматографическую камеру с элюэнтом, плотно закрывали крышкой и хроматографировали восходящим способом. После достижения фронтом элюента линии финиша (пробег 12 см для пластинки Sorbfi и 7 см для Silica gel 60 F), пластинку вынимали из камеры и высушивали в потоке теплого воздуха до полного удаления запаха растворителя. Для обнаружения ПВП пластинку помещали в камеру, насыщенную парами йода, и выдерживали около 1 мин до появления ярко-желтых пятен. Проявившиеся пятна в образцах идентифицировали относительно пятна СОВС и характеризовали по величине удерживания R . 1. Приготовление СОВС: точную навеску субстанции ПВП - 300 мг растворяли в 5 мл воды для инъекций (концентрация 60 мг/мл). 2. Приготовление раствора ЛХС-1208: флакон с лиофилизированной лекарственной формой ЛХС-1208 растворяли в 10 мл воды для инъекций (концентрация ПВП - 60 мг/мл). 3. Приготовление раствора ормустина: флакон с лиофилизированной лекарственной формой ормустина растворяли в 5 мл воды для инъекций (концентрация ПВП - 60 мг/мл). 4. Приготовление йодной камеры: на дно эксикатора устанавливали тигель, в который насыпали кристаллы йода 1,0 г, оставляли на 15 мин для возгонки йода. Результаты и их обсуждение. В ходе эксперимента на двух пластинках (Sorbfil и Silica gel 60 F) осуществляли подбор подвижной фазы для хроматографического эксперимента с использованием различных систем растворителей. Значения R ПВП в различных системах растворителей представлены в таблице 1. По данным таблицы 1 видно, что ПВП на пластинке Silica gel 60 F на 22 исследуемых системах не обладает какой-либо хроматографической подвижностью, возможно, это связано с высокой сорбционной способностью исследуемого вещества. Применение пластинок Sorbfi на 30 различных системах растворителей показало, что лишь в двух случаях удалось оторвать ПВП от стартовой линии: пропанол-2: 25% аммиак (3:2) и этанол-2: 25% аммиак (3:2). Приделы обнаружения в этих системах были практически одинаковы и составили около 0,3 мкг/мл. Именно эти системы выбраны для идентификации ПВП в составе лиофилизированных лекарственных форм ормустина и ЛХС-1208. Выводы С целью определения ПВП в лиофилизатах осуществлен выбор подвижной и неподвижной фаз по результатам проведенного исследования. Данные проведенного исследования можно использовать в качестве экспресс-метода определения исследуемого вещества в различных лекарственных формах.