Bone marrow brain death-donor as a potential source for allogenic cell products

Аннотация

Толық мәтін

По приблизительным данным в России в трансплантации алогенного костного мозга нуждается 7000-10000 человек в год. Наличие банка костного мозга позволяет упростить процедуру поиска донора для онкогематологических больных и снизить стоимость операции. Показано, что мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК), выделенные из костного мозга, обладают иммуносупресивными свойствами, что делает возможным их применение при различных патологических состояниях, в том числе для профилактики РТПХ при аллогенной трансплантации костного мозга (ТКМ). Учитывая острую нехватку доноров и системы биобанков типированных образцов костного мозга, представляется актуальным использование в качестве потенциального источника КМ и ММСК материал, полученный от трупных доноров. Цель исследования: охарактеризовать жизнеспособность костного мозга, полученного от доноров со смертью головного мозга и возможность экспансии ММСК для создания банка аллогенных материалов, типированных по HLA. Материал и методы. Костный мозг был получен путем пункции подвздошных костей у доноров с диагностированной смертью мозга при сохранении кровотока. Объем аспирированного костного мозга составлял от 300 до 500 мл. Доноры были обследованы на наличие инфекций и типированы по HLA. Костный мозг трупного донора доставляли в ЦМБТ ФГБУ ГНЦ ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА России в течение 4-6 ч после забора биоматериала. Жизнеспособность клеток костного мозга была 87-92%. Для определения возможности банкирования и дальнейшего применения в онкогематологии для аллогенной ТКМ, 400 мл костного мозга подвергали криоконсервированию по стандартной методике. Оценка жизнеспособности и биологической активности клеток будет проводится через 3,6 и 12 мес. Выделение ММСК проводили по стандартной методике в градиенте плотности. Экспансию ММСК проводили на среде MesenCult (StemCell Technology, США) с добавлением 2 мМ L-глутамина (StemCell Technology, США), 100 ед./мл пенициллина и 100 мг/мл стрептомицина (StemCell Technology, США) и 10% добавки для культивирования клеток MesenCult (StemCell Technology, США). Смену среды проводили каждые 3-4 дня. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере 5% СО2. Иммунофенотипирование культивированных ММСК проводили на проточном цитометре BD FACS Canto II (США). Для идентификации и характеристики культивируемых клеток был использован набор моноклональных антител CD90, CD73, CD105, CD54, CD44, CD116, CD13, CD34, CD117, CD45, CD14 (BD Bioscience, США), которые являются маркерами, характерными для ММСК. Морфологически клетки в полученных культурах имели фибробластоподобную форму, активно пролиферировали. Жизнеспособность культур ММСК составляла более 92%. Результаты проведенного иммунофенотипирования показали, что культивируемые ММСК экспрессировали CD90, CD73, CD105, CD54, CD44, CD116, CD13 (BD Bioscience, США) и не экспрессировали маркеры, характерные для эндотелиальных и гемопоэтических клеток - CD34, CD117, CD45, CD14 (BD Bioscience, США). Таким образом, следует сделать вывод о том, что нами были получены жизнеспособные культуры адгезивных клеток костного мозга, экспрессирующие спектр поверхностных маркеров, характерный для ММСК. Полученные данные являются подтверждением возможности использования КМ доноров со смертью мозга для получения жизнеспособных ти-пированных трансплантатов и клеточных продуктов на основе аллогенных ММСК.