Получение регуляторных дендритных клеток из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток мыши для их использования в моделях трансплантации тканей

Аннотация

Полный текст

Трансплантация органов и тканей является широко востребованным методом лечения различных заболеваний человека. Главным условием успешной пересадки тканей является индукция у реципиента иммунологической толерантности к аллогенным тканям донора. Ключевым звеном иммунной системы, обеспечивающим иммунологическую толерантность, являются регуляторные дендритные клетки (Regulatory dendritic cells - DCregs). В отличие от зрелых дендритных клеток, инициирующих иммунный ответ, DCreg клетки через активацию регуляторных Т-клеток подавляют T клеточный ответ на антигены трансплантата. Данные клетки имеют большую значимость в трансплантологии, а также в разрабатываемой технологии тканезаместительной терапии на основе плюрипотентных стволовых клеток (ПСК). Однако, на современном этапе использование DCreg затруднено, в связи с сложной технологией их получения и поддержания. Целью данного исследования была отработка и стандартизация метода получения DCreg из индуцированных ПСК мыши. Нами была использована трехстадийная методика по получению обогащенной популяции DCreg клеток из иПСК мыши (Cai et al., 2017, Zhang et al., 2014). иПСК, полученные из фибробластов линии C57BL/6J, культивировали на фидерной подложке из клеток OP-9, через 7 дней добавляли колониестимулирующий фактор (GM-CSF), и на последней стадии дополнительно - интерлейкин-10 (IL-10) и трансформирующий ростовой фактор (TGF-b). Общее время дифференцировки иПСК в незрелые DCreg клетки составляло 14 дней. Помимо морфологических особенностей, DCreg клетки обладают характерным профилем экспрессии клеточных маркеров. Популяции клеток, полученные на каждой стадии дифференцировки, анализировали с помощью проточной цитометрии, на наличие экспрессии специфических маркеров: CD34, CD45R, Cd80, CD86 CD11c,b. Цитометрический анализ показал, что полученная популяция клеток соответствует профилю экспрессии клеточных маркеров характерных для DCreg клеток. Так, количество клеток, позитивных на CD80 и CD86 уменьшается, а позитивных на CD45R и CD11c увеличивается, по мере дифференцировки. Отработанная методика позволяет получить достаточное количество DCreg клеток (линии C57BL/6J) для первичного анализа индукции иммунологической толерантности данными клеткам аллогенной линии мышей линий BALB/C, оцениваемая их способностью долговременного приживления трансплантатов кожи, а также иПСК, пересаженных от донорской линии C57BL/6J .