Оптимизация протокола тестирования металлических образцов на культуре фибробластов

Аннотация

Полный текст

В настоящее время стандартные протоколы тестирования отсутствуют, каждый исследователь составляет свой план тестирования для каждого конкретного случая. Нами усовершенствован и оптимизирован протокол тестирования in vitro изделий медицинского назначения, имеющих металлические детали. Протестировать целиком готовые изделия, применяемые в травматологии, ортопедии, стоматологии, на культурах клеток невозможно. Образцы, необходимые для исследования изготавливают определенной формы и размеров, структура их поверхности соответствует структуре поверхности самого готового изделия, образцы стерильны. Первоначальная задача состоит в получении достаточного количества качественных линий клеток, полученных из первичных эксплантатов. Перед исследованием проверяют культуру на жизнеспособность и пролифера-тивный потенциал (индекс пролиферации, время удвоения, индекс адгезии). Затем приступают непосредственно к тестированию. Рекомендуемые в ГОСТ ISO 10993, ч. 5 метод непрямого контакта используется только для качественной оценки цитотоксичности. Для возможности применения еще и количественных методов, мы предложили использовать 24-луночные планшеты со вставками. При появлении явной цитотоксичности образцов на первом этапе (окрашивание клеток в синий цвет 0,4% раствором трипанового синего), дальнейшее исследование проводить нецелесообразно. При слабой цитотоксичности и ее отсутствии следующий этап включает комплекс общеморфологических и биохимических методов (МТТ и ЛДГ). При проведении исследования на адгезивную способность клеток к поверхности материала необходимо, чтобы образец полностью закрывал дно лунки в планшете, и суспензия клеток вносилась только на поверхность образца, иначе произойдет потеря клеток и будет получен недостоверный результат. Предложенный нами протокол показал свою пригодность для тестирования новых изделий медицинского назначения, которые найдут широкое применение в регенеративной медицине.