Prognostic usefulness of changes in hemostatic parameters of dogs with parvoviral enteritis
- Authors: Baruzdina E.S.1, Soboleva E.N.1
-
Affiliations:
- Vologda State Dairy Farming Academy named after N.V. Vereshchagin
- Issue: No 4 (2019)
- Pages: 63-66
- Section: Veterinary science
- URL: https://journals.eco-vector.com/2500-2627/article/view/15775
- DOI: https://doi.org/10.31857/S2500-26272019463-66
- ID: 15775
Cite item
Full Text
Abstract
The aim of the work was to study the prognostic usefulness of changes in hemostatic parameters of dogs with parvoviral enteritis.Compared the results of a study of the blood of the dead (n = 4) and the surviving dogs (n = 11) on days 3 and 5 of illness between 2 and 6 months of age among themselves and with the results of blood tests of healthy dogs in the control group (n = 10).On the 3rd day of the disease, we can identify as markers of an unfavorable prognosis a decrease in platelet count to 285,97±14,84х109/L, an increase inMPV to 8,5±1,7 fl and PCT to 0,53±0,02%, an increase in SIAP with ADP to 131,67±9,28% and ristomycin to 127,77±14,71%, a decrease in disaggregation with ADP to1,03±1,03% and ristomycin to 0,08±0,08%, an increase in the amount of fibrinogen to 5,2±0,49 g/l and SFMC to 12,97±1,15 mg/100ml along with a decrease in the activity of antithrombin to 105,3±3,16%.On the 5th day of illness, such parameters as a progressive decrease in platelet count to227±15,64 х109/L are associated with a decrease in the MPV to 5,5±1,2 fl and PCT to 0,21±0,03%, a decrease in SIAP with ADP to 31,67±12,03%, collagen to 15,53±4,26% and ristomycin to14,8±5,6%, reduction of disaggregation with all inductors, lengthening of PT from14,17±0,24 to18,5±2,9 sec., TT from9,07±0,58 to 26,37±1,57 sec. and APTT from18,03±1,54 to 26,37±1,57 sec., increase in SFMC to17,3±1,17mg/100ml, a decrease in fibrinogen to 2,73±0,89g/l and antithrombin activity to 88,63±14,93%.
Full Text
Парвовирусная инфекция плотоядных вызывается ДНК-содержащим вирусом, широко распространена и приводит к тяжелому, угрожающему жизни состоянию [1, 2]. Основное патогенететическое проявление парвовирусной инфекции собак – индуцированная деструкция быстро делящихся клеток, включая клетки эпителия крипт кишечника, тимуса, лимфоузлов и клеток-предшественников костного мозга. Возникающая септицемия и эндотоксемия вызывают системный воспалительный процесс и гиперкоагуляцию, что приводит к мультиорганной дисфункции и смерти [3-5]. Системный воспалительный ответ организма зачастую связан с развитием синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС) [6]. В литературе имеются данные, указывающие на наличие нарушений в системе гемостаза при парвовирусной инфекции у собак, в частности гиперкоагуляции [7, 8]. Гемостазиологические параметры крови относительно постоянны у здоровых животных, поэтому их измерение у больных может информировать врача об ответе пациента на лечение или позволит использовать эти показатели как индикаторы прогноза [9-12].
Методика. Исследования выполняли на базе факультета ветеринарной медицины и биотехнологий Вологодской государственной молочно-хозяйственной академии имени Н.В. Верещагина. Контрольную группу животных составляли клинически здоровые собаки в возрасте от 2 до 6 месяцев (n=10). В опытные группы вошли собаки того же возраста, больные парвовирусным энтеритом (n=15). Из них 4 щенка погибли и составили группу погибших собак, а 11 щенков выжили и составили группу выживших собак. Диагноз ставили с помощью клинического осмотра и выявления антигена парвовируса в фекалиях собак хроматографическим иммунохимическим методом с использованием одношагового экспресс-теста VetExpert CPV Ag. Собакам опытных групп применяли стандартизированную терапию, включающую введение раствора Рингера-Локка 30-60 мл/кг/сут с целью регидратации, дезинтоксикации и восполнения электролитов, ампициллина 20-40 мг/кг каждые 8 ч внутривенно и цефтриаксона 50 мг/кг каждые 24 ч внутримышечно для профилактики бактериальной инфекции. Рвоту купировали с помощью подкожного введения маропитанта цитрата (Серения) в дозе 1 мг/10 кг каждые 24 ч первые 3-5 дней болезни. После купирования рвоты применяли Энтеросгель по 2-5 г 6 раз в сут перорально и диетический рацион Роял Канин Рекавери.
У животных опытных групп определяли гематологические и гемостатические показатели на 3-й и 5-й день болезни с момента появления клинических признаков. Уровень тромбокрита (PCT) и среднего объема тромбоцита (MPV) определяли с помощью автоматического гематологического анализатора Exigo 17 (Boule Medical A.B., Швеция). Количество тромбоцитов подсчитывали вручную в мазке крови, окрашенной по Романовскому-Гимзе. Адгезивно-агрегационную активность тромбоцитов определяли количественным методом с применением фотоэлектроколориметра КФК-2 по Howard M.A. [13]. Суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) с индукторами агрегации – АДФ (концентрация 0,1 мг/мл), коллагеном (концентрация 20 мг/мл) и ристомицином (концентрация 15 мг/мл). Величину плазменно-коагуляционного гемостаза определяли на коагулометре Thrombostat производства Behnk Elektronik (Германия) с помощью следующих показателей: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ); протромбиновое время (ПВ); тромбиновое время (ТВ); количественный состав фибриногена и растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК, ортофенантролиновый тест) и активность антитромбина (акт. АТIII).
Полученные в ходе исследования результаты обработаны с помощью программного пакета Statistica 6.1. Значения полученных результатов представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней. Результаты исследования со значением вероятности допущения альфа-ошибки, равные либо менее 5% (р≤0,05), расценивали как статистически значимые. Сравнение независимых выборок проводили с помощью критерия Манна-Уитни, зависимых – с помощью критерия Вилкоксона.
Результаты и обсуждение. Количество тромбоцитов на 3-й день болезни составило 350,12±16,68 х109/л у выживших и 285,97±14,84х109/л у погибших собак, что уже имеет существенные различия (р=0,0017), к 5-му дню в группе погибших собак отмечена тромбоцитопения (227±15,64х109/л, р=0,043), которая обусловила значительные отличия от результатов группы выживших собак (р=0,0015), где количество тромбоцитов слегка увеличилось и составило 366,65±14,6х109/л, и от параметров контрольной группы (р=0,0001). Тромбокрит в группе выживших собак на 3-й день болезни составил 0,41±0,03%, на 5-й день – 0,36±0,05%, что не отличалось от результатов контрольной группы (рис. 1). Средний объем тромбоцитов на 3-й день болезни у выживших животных составил 6,6±1,5 fl, к 5-му дню этот показатель достоверно увеличился до 9,2±2 fl (р=0,0031). В группе погибших собак тромбокрит на 3-й день болезни составил 0,53±0,02%, что достоверно (р=0,0018) отличалось от результатов контрольной группы. На 5-й день заболевания уровень тромбокрита уменьшился до 0,21±0,03% (р=0,0012), что существенно отличалось от результатов как контрольной группы (р=0,015), так и группы выживших собак (р=0,015). На 3-й день болезни у погибших животных средний объем тромбоцита увеличился до 8,5±1,7 fl (р=0,03), к 5-му дню достоверно снизился до 5,5±1,2 fl (р=0,023).
Рис. 1. Морфологические параметры тромбоцитов у погибших и выживших собак: а) – средний объем тромбоцитов, fl, б) – тромбокрит, %.
Функциональная активность тромбоцитов у животных исследуемых групп представлена в табл. 1. На 3-й день болезни агрегационные способности тромбоцитов были выше в группе погибших собак, на что указывает разница в СИАТ с АДФ (р=0,005) и ристомицином (р=0,002) и ИДТ с АДФ (р=0,01) и ристомицином (р=0,02).
На 5-й день в группе погибших собак существенно уменьшились агрегационные свойства тромбоцитов, что выражалось в снижении СИАТ с АДФ (р=0,004), коллагеном (р=0,003) и ристомицином (р=0,004), при этом в группе выживших собак эти параметры незначительно повышались.
В показателях плазменно-коагуляционного гемостаза (табл. 2) на 3-й день болезни в группе погибших собак наблюдали увеличение ПВ (р=0,005) и АЧТВ (р=0,002), уменьшение ТВ (р=0,005), повышение количества фибриногена (р=0,01) и РФМК (р=0,005) и снижение активности антитромбина (р=0,005) относительно группы выживших животных.
Табл. 1. Показатели тромбоцитарного гемостаза
Показатель
| Контроль (n=10) | Выжившие (n=11) | Погибшие (n=4) | ||
3-й день | 5-й день | 3-й день | 5-й день | ||
Агрегация с АДФ | |||||
СИАТ, % | 92,96 ±10,23 | 77,46±6,8 | 86,15±7,34 | 131,67±9,28 | 31,67±12,03 |
СА, мин | 0,01 ± 0,002 | 0,02±0,006 | 0,01±0,003 | 0,01±0,005 | 0,02±0,005 |
ИДТ, % | 5,31 ±1,19 | 7,94±1,02 | 4,97±1,49 | 1,03±1,03 | -1,1±1,1 |
Агрегация с коллагеном | |||||
СИАТ, % | 114,01 ± 12,05 | 95,07±7,83 | 102,48±6,34 | 138,87±20,00 | 15,53±4,26 |
СА, мин | 0,01 ± 0,003 | 0,0126±0,003 | 0,02±0,003 | 0,02±0,005 | 0,0162±0,001 |
ИДТ, % | 7,15 ± 1,52 | 4,92±1,06 | 4,74±0,96 | 1,7±0,90 | 1,73±0,59 |
Агрегация с ристомицином | |||||
СИАТ, % | 110,69 ±12,36 | 81,81±4,95 | 95,04±10,00 | 127,77±14,71 | 14,8±5,60 |
СА, мин | 0,010 ±0,002 | 0,015±0,003 | 0,022±0,008 | 0,008±0,002 | 0,014±0,007 |
ИДТ, % | 5,75 ±1,26 | 5,03±0,87 | 4,08±1,19 | 0,08±0,08 | -1,67±1,79 |
На 5-й день болезни в группе погибших собак выявили увеличение ПВ (р=0,005), ТВ (р=0,043) и АЧТВ (р=0,005), высокое содержание РФМК (р=0, 002) и низкую активность антитромбина (р=0,005), при этом относительно первоначальных значений достоверно увеличились ПВ, ТВ и АЧТВ, а также РФМК, уменьшилось количество фибриногена и активность антитромбина.
Табл. 2. Показатели плазменного гемостаза
Показатель | Контроль (n=10) | Выжившие (n=11) | Погибшие (n=4) | ||
3-й день | 5-й день | 3-й день | 5-й день | ||
ПВ, с | 8,87± 0,75 | 11,41±0,34 | 11,75±0,17 | 14,17±0,24 | 18,5±2,9 |
ТВ, с | 9,86 ± 0,21 | 11,97±0,35 | 11,84±0,25 | 9,07±0,58 | 15,3±2,08 |
Фибриноген, г/л | 2,92 ± 0,30 | 3,31±0,25 | 3,15±0,19 | 5,20±0,49 | 2,73±0,89 |
АЧТВ, с | 12,29±0,94 | 13,84±0,42 | 13,10±0,22 | 18,03±1,54 | 26,37±1,50 |
РФМК, мг/100 мл | 4,35 ± 0,28 | 5,82±0,65 | 5,02±0,42 | 12,97±1,15 | 17,30±1,17 |
Акт. АТIII, % | 146,65 ± 4,30 | 122,39±2,71 | 125,71±2,54 | 105,3±3,16 | 88,63±14,93 |
Для формирования наглядной картины гемостазиологических изменений у погибших и выживших собак провели анализ полученных результатов в динамике, для чего использовали относительные величины, при этом за 100% принимали значение показателей гемостаза у контрольной группы собак. Параметры сосудисто-тромбоцитарного гемостаза (рис. 2) в группе выживших собак на 3-й день болезни были незначительно ниже, а ИДТ с АДФ выше на 49%,чем в контрольной группе, но к 5-му дню болезни различий не наблюдали. В группе погибших собак на 3-й день заболевания агрегационная способность тромбоцитов повышалась на 41% с АДФ, на 21% с коллагеном и на 15% с ристомицином относительно результатов контрольной группы. При этом существенно снижались индексы дезагрегации: на 81% с АДФ, на 77% с коллагеном и на 98,7% с ристомицином.
Рис. 2. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз у погибших и выживших собак (показатели контрольной группы приняты за 100%): а) – на 3-й день болезни, б) – на 5-й день болезни.
На 5-й день болезни в группе погибших собак по сравнению с показателями контрольной группы резко снизились все величины агрегации тромбоцитов – СИАТ с АДФ на 66%, СИАТ с коллагеном и ристомицином на 87%. При этом дезагрегация под действием АДФ и ристомицина отсутствовала полностью, а дезагрегация с коллагеном уменьшилась на 87%.
На 3-й день болезни в группе выживших собак показатели плазменно-коагуляционного гемостаза (рис. 3) незначительно отличались от контрольной группы, за исключением увеличения ПВ на 28% и концентрации РФМК на 33%, тогда как в группе погибших собак изменения были более выражены – ПВ увеличилось на 59%, АЧТ – на 46%, фибриноген – на 78% и РФМК – на 198%, а также снизилась активность антитромбина на 29%.
Рис. 3. Плазменно-коагуляционный гемостаз у погибших и выживших собак (показатели контрольной группы приняты за 100%) :а) – на 3-й день болезни, б) – на 5-й день болезни.
К 5-му дню болезни коагуляционные показатели в группе выживших собак практически не отличались от контрольной группы, сохранилось только увеличенное на 32% ПВ. В группе погибших собак отмечены серьезные изменения – увеличение ПВ на 108%, ТВ – на 55%, АЧТВ – на 114%, РФМК – на 297%, вместе с понижением активности антитромбина на 40%.
Таким образом, изменения в параметрах крови при парвовирусной инфекции возникают у всех заболевших собак, но у некоторых животных эти изменения выражены сильнее, что к 5-му дню болезни приводит к летальному исходу. В группе выживших собак присутствуют гемостазиологические отклонения, но к 5-му дню заболевания они достигают уровня, присущего здоровым животным, за счет компенсаторных процессов. В группе погибших собак уже на 3-й день болезни присутствует тромбоцитопения вместе с повышением тромбоцитарной функции и устойчивости образованных агрегатов, количество фибриногена и РФМК увеличиваются вместе с понижением активности антитромбина. К 5-му дню болезни у этих животных не происходит улучшения – усугубляются морфологические изменения клеточного состава крови, снижается тромбоцитарная функция, достоверно увеличиваются ПВ, ТВ и АЧТВ, РФМК, уменьшаются уровень фибриногена и активность антитромбина, что свидетельствует о наличии лабораторных признаков синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания. Этот синдром с преобладанием сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза служит закономерным итогом генерализованного поражения стенок сосудов при первичном воздействии на тромбоциты различных инфекционных агентов. При этом обнажаются субэндотелиальные структуры, которые активируют тромбоциты и внутреннюю систему свертывания крови через контактный фактор XII (фактор Хагемана) [14]. Повреждение вирусами и их токсинами эндотелия и других слоев сосудистой стенки, клеток крови при парвовирусном энтерите ведет к активации свертывающей системы и ухудшению тканевого кровотока, что способствует развитию осложнений и увеличивает вероятность неблагоприятного исхода.
На 3-й день болезни в качестве маркеров неблагоприятного прогноза можно выделить понижение количества тромбоцитов до 285,97±14,84х109/л, увеличение среднего объема тромбоцита до 8,5±1,7 fl, тромбокрита – до 0,53±0,02%, СИАТ с АДФ – до 131,67±9,28% и ристомицином – до 127,77±14,71%; снижение дезагрегации с АДФ до 1,03±1,03% и ристомицином до 0,08±0,08%, увеличение количества фибриногена до 5,2±0,49 г/л и РФМК до 12,97±1,15 мг/100мл вместе с понижением активности антитромбина до 105,3±3,16%. На 5-й день болезни с риском летального исхода связаны такие параметры, как прогрессирующее снижение количества тромбоцитов до 227±15,64 х109/л вместе с уменьшением среднего объема тромбоцита до 5,5±1,2 fl и тромбокрита до 0,21±0,03%, уменьшение СИАТ с АДФ до 31,67±12,03%, с коллагеном – до 15,53±4,26% и ристомицином – до 14,8±5,6%, а также дезагрегации на 81% с АДФ, на 77% – с коллагеном и на 98,7% – с ристомицином, увеличение ПВ с 14,17±0,24 до 18,5±2,9 с, ТВ – с 9,07±0,58 до 15,3±2,08 с, АЧТВ – с 18,03±1,54 с до 26,37±1,57 с, РФМК – до 17,3±1,17 мг/100 мл, уменьшение фибриногена до 2,73±0,89 г/л и активности антитромбина до 88,63±14,93%.
About the authors
E. S. Baruzdina
Vologda State Dairy Farming Academy named after N.V. Vereshchagin
Author for correspondence.
Email: ENSobol@yandex.ru
Russian Federation, Vologda
E. N. Soboleva
Vologda State Dairy Farming Academy named after N.V. Vereshchagin
Email: ENSobol@yandex.ru
кандидат ветеринарных наук
Russian Federation, VologdaReferences
- Власов Н.А., Уласов В.И., Черняева И.С., Элизбарашвили Э.И., Вахрамеева В.В., Васильев Д.А. Парвовирусы плотоядных и вызываемые ими болезни. – Ульяновск, 2000. – 35 с.
- Houston D.M., Ribble C.S., Head L.L. Risk factors associated with parvovirus enteritis in dogs: 283 cases (1982-1991) // J. Am. Vet. Med. Assoc. – 1996. – 208(4). – Р.542-546.
- Сулимов А.А., Уласов В.И. Парвовирусные инфекции плотоядных // Российский Ветеринарный Журнал. Мелкие Домашние Животные – 2008. – №2. – С.40- 45.
- Mathios E., Mylonakis, Iris Kalli, Timoleon S. Rallis Canine parvoviral enteritis: an update on the clinical diagnosis, treatment, and prevention // Veterinary Medicine: Research and Reports. – 2016. – P.91-100.
- Goddard A., Leisewitz A.L Canine parvovirus // Vet. Clin. North Am. Small Anim. Pract. – 2010. – №40(6). – Р.1041-1053.
- Gauthier V. Effects of Tetrastarch Administration on Hemostatic, Laboratory, and Hemodynamic Variables in Healthy Dogs and Dogs with Systemic Inflammation // A Thesis presented to The University of Guelph. - Guelph, Ontario, Canada. – 2013. - 164 рр.
- Баруздина Е.С. Возрастные особенности плазменно-коагуляционного гемостаза у собак, больных парвовирусной инфекцией// Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – 2018. – №2 (38). – С.4-10.
- Otto C.М., Riеsеr Т.M., Brooks М.B. Еvidеnсе of hipеrсoagulability in dogs with рaгvоviral еntеritis // J. Am. Vеt. Mеd. Assoс. – 2000. – №21(7). – Р. 1500-1504.
- Kocaturk M.S., Martinez O., Eralp A., Tvarijonaviciute J., Ceron Z., Yilmaz Prognostic value of serum acute phase proteins in dogs with parvoviral enteritis // J. Small Anim. Pract. – 2010. – №51(9). – Р.478-483.
- Goddard A., Leisewitz A.L., Christopher M.M., Duncan N.M., Becker P.J. Prognostic Usefulness of Blood Leukocyte Changes in Canine Parvoviral Enteritis // Journal of Veterinary Internal Medicine. – 2008. – №22(2). – Р.309–316.
- Schoeman J.P., Goddard A., Leisewitz A.L. Biomarkers in canine parvovirus enteritis // N.Z. Vet. J. – 2013. – №61(4). – Р.217-222.
- Баруздина Е.С., Ошуркова Ю.Л. Особенности функционирования системы гемостаза у здоровых собак в возрасте от двух до шести месяцев // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – 2016. – №3(31). – С.8-12.
- Балуда В. П., Баркаган З. С., Гольдберг Е.Д.. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. – Томск, 1980. – 304 с.
- Девяткин А. В. Клиническое значение нарушений микроциркуляции и гемореологии при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях у больных с осложнениями и сопутствующими заболеваниями. – Дисс. … д. мед. наук: 14.00.10. М., 2003. – 272 с.