Prognostic usefulness of changes in hemostatic parameters of dogs with parvoviral enteritis

Cover Page

Abstract


The aim of the work was to study the prognostic usefulness of changes  in hemostatic parameters of dogs with parvoviral enteritis.Compared the results of a study of the blood of the dead (n = 4) and the surviving dogs (n = 11) on days 3 and 5 of illness between 2 and 6 months of age among themselves and with the results of blood tests of healthy dogs in the control group (n = 10).On the 3rd day of the disease, we can identify as markers of an unfavorable prognosis a decrease in platelet count to 285,97±14,84х109/L, an increase inMPV to 8,5±1,7 fl and PCT to 0,53±0,02%, an increase in SIAP with ADP to 131,67±9,28% and ristomycin to 127,77±14,71%, a decrease in disaggregation with ADP to1,03±1,03% and ristomycin to 0,08±0,08%, an increase in the amount of fibrinogen to 5,2±0,49 g/l  and SFMC to 12,97±1,15 mg/100ml along with a decrease in the activity of antithrombin to 105,3±3,16%.On the 5th day of illness, such parameters as a progressive decrease in platelet count to227±15,64 х109/L  are associated with a decrease in the MPV to 5,5±1,2 fl  and PCT to 0,21±0,03%, a decrease in SIAP with ADP to 31,67±12,03%, collagen to 15,53±4,26%  and ristomycin to14,8±5,6%, reduction of disaggregation with all inductors, lengthening of PT from14,17±0,24  to18,5±2,9 sec., TT from9,07±0,58  to 26,37±1,57 sec. and APTT from18,03±1,54 to 26,37±1,57 sec., increase in SFMC to17,3±1,17mg/100ml, a decrease in fibrinogen to 2,73±0,89g/l  and antithrombin activity to 88,63±14,93%.


Full Text

Парвовирусная инфекция плотоядных вызывается ДНК-содержащим вирусом, широко распространена и приводит к тяжелому, угрожающему жизни состоянию [1,2]. Основное патогенететическое проявление парвовирусной инфекции собак – индуцированная деструкция быстро делящихся клеток, включая клетки эпителия крипт кишечника, тимуса, лимфоузлов и клеток-предшественников костного мозга. Возникающая септицемия и эндотоксемия вызывают системный воспалительный процесс и гиперкоагуляцию, что приводит к мультиорганной дисфункции и смерти [3-5]. Системный воспалительный ответ организма зачастую связан с развитием синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС) [6].  В литературе имеются данные, указывающие на наличие нарушений в системе гемостаза при парвовирусной инфекции у собак, в частности гиперкоагуляции [7,8]. Гемостазиологические параметры крови относительно постоянны у здоровых животных, поэтому их измерение у больных может информировать врача об ответе пациента на лечение или позволит использовать эти показатели как индикаторы прогноза [9-12].

Методика. Исследования выполняли на базе факультета ветеринарной медицины и биотехнологий Вологодской государственной молочно-хозяйственной академии имени Н.В. Верещагина. Контрольную группу животных составляли клинически здоровые собаки в возрасте от 2 до 6 месяцев (n=10). В опытные группы вошли собаки того же возраста, больные парвовирусным энтеритом (n=15). Из них 4 щенка погибли и составили  группу погибших собак, а 11 щенков выжили и составили группу выживших собак. Диагноз ставили с помощью клинического осмотра и выявления антигена парвовируса в фекалиях собак хроматографическим иммунохимическим методом с использованием  одношагового экспресс-теста VetExpert CPV Ag. Собакам опытных групп применяли стандартизированную терапию, включающую введение раствора Рингера-Локка 30-60 мл/кг/сут с целью регидратации, дезинтоксикации и восполнения электролитов, ампициллина 20-40 мг/кг каждые 8 ч внутривенно и цефтриаксона 50 мг/кг каждые 24 ч внутримышечно для профилактики бактериальной инфекции. Рвоту купировали с помощью подкожного введения маропитанта цитрата (Серения) в дозе 1 мг/10 кг каждые 24 ч первые 3-5 дней болезни. После купирования рвоты применяли Энтеросгель по 2-5 г 6 раз в сут перорально и диетический рацион Роял Канин Рекавери.

У животных опытных групп определяли гематологические и гемостатические показатели на 3-й и 5-й день болезни с момента появления клинических признаков. Уровень тромбокрита (PCT) и среднего объема тромбоцита (MPV) определяли с помощью автоматического гематологического анализатора Exigo 17 (Boule Medical A.B., Швеция). Количество тромбоцитов подсчитывали вручную в мазке крови, окрашенной по Романовскому-Гимзе. Адгезивно-агрегационную активность тромбоцитов определяли количественным методом с применением фотоэлектроколориметра КФК-2 по Howard M.A. [13]. Суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) с индукторами агрегации – АДФ (концентрация 0,1 мг/мл), коллагеном (концентрация 20 мг/мл) и ристомицином (концентрация 15 мг/мл). Величину плазменно-коагуляционного гемостаза определяли на коагулометре Thrombostat производства Behnk Elektronik (Германия) с помощью следующих показателей: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ); протромбиновое время (ПВ); тромбиновое время (ТВ); количественный состав фибриногена и растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК, ортофенантролиновый тест) и активность антитромбина (акт. АТIII).

Полученные в ходе исследования результаты обработаны с помощью программного пакета Statistica 6.1. Значения полученных результатов представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней. Результаты исследования со значением вероятности допущения альфа-ошибки, равные либо менее 5% (р≤0,05), расценивали как статистически значимые. Сравнение независимых выборок проводили с помощью критерия Манна-Уитни, зависимых – с помощью критерия Вилкоксона.

Результаты и обсуждение. Количество тромбоцитов на 3-й день болезни составило 350,12±16,68 х109/л у выживших и 285,97±14,84х109/л у погибших собак, что уже имеет существенные различия (р=0,0017), к 5-му дню в группе погибших собак отмечена тромбоцитопения (227±15,64х109/л, р=0,043), которая обусловила значительные отличия от результатов группы выживших собак (р=0,0015), где количество тромбоцитов слегка увеличилось и составило 366,65±14,6х109/л, и от параметров контрольной группы (р=0,0001). Тромбокрит в группе выживших собак на 3-й день болезни составил 0,41±0,03%, на 5-й день – 0,36±0,05%, что не отличалось от результатов контрольной группы (рис. 1). Средний объем тромбоцитов на 3-й день болезни у выживших животных составил 6,6±1,5 fl, к 5-му дню этот показатель достоверно увеличился до 9,2±2 fl (р=0,0031). В группе погибших собак тромбокрит на 3-й день болезни составил 0,53±0,02%, что достоверно (р=0,0018) отличалось от результатов контрольной группы. На 5-й день заболевания уровень тромбокрита уменьшился до 0,21±0,03% (р=0,0012), что существенно отличалось от результатов как контрольной группы (р=0,015), так и группы выживших собак (р=0,015). На 3-й день болезни у погибших животных средний объем тромбоцита увеличился до 8,5±1,7 fl (р=0,03),  к 5-му дню достоверно снизился до 5,5±1,2 fl (р=0,023).

 

Рис. 1. Морфологические параметры тромбоцитов у погибших и выживших собак: а) – средний объем тромбоцитов, fl, б) – тромбокрит, %.

 

Функциональная активность тромбоцитов у животных исследуемых групп представлена в табл. 1. На 3-й день болезни агрегационные способности тромбоцитов были выше в группе погибших собак, на что указывает разница в СИАТ с АДФ (р=0,005) и ристомицином (р=0,002) и ИДТ с АДФ (р=0,01) и ристомицином (р=0,02).

На 5-й день в группе погибших собак существенно уменьшились агрегационные свойства тромбоцитов, что выражалось в снижении СИАТ с АДФ (р=0,004), коллагеном (р=0,003) и ристомицином (р=0,004), при этом в группе выживших собак эти параметры незначительно повышались.

В показателях плазменно-коагуляционного гемостаза (табл. 2) на 3-й день болезни в группе погибших собак наблюдали увеличение ПВ (р=0,005) и АЧТВ (р=0,002), уменьшение ТВ (р=0,005), повышение количества фибриногена (р=0,01) и РФМК (р=0,005) и снижение активности антитромбина (р=0,005) относительно группы выживших животных.

 

Табл. 1. Показатели тромбоцитарного гемостаза

Показатель

 

Контроль

(n=10)

Выжившие (n=11)

Погибшие (n=4)

3-й день

5-й день

3-й день

5-й день

Агрегация с АДФ

СИАТ, %

92,96 ±10,23

77,46±6,8

86,15±7,34

131,67±9,28

31,67±12,03

СА, мин

0,01 ± 0,002

0,02±0,006

0,01±0,003

0,01±0,005

0,02±0,005

ИДТ, %

5,31 ±1,19

7,94±1,02

4,97±1,49

1,03±1,03

-1,1±1,1

Агрегация с коллагеном

СИАТ, %

114,01 ± 12,05

95,07±7,83

102,48±6,34

138,87±20,00

15,53±4,26

СА, мин

0,01 ± 0,003

0,0126±0,003

0,02±0,003

0,02±0,005

0,0162±0,001

ИДТ, %

7,15 ± 1,52

4,92±1,06

4,74±0,96

1,7±0,90

1,73±0,59

Агрегация с ристомицином

СИАТ, %

110,69 ±12,36

81,81±4,95

95,04±10,00

127,77±14,71

14,8±5,60

СА, мин

0,010 ±0,002

0,015±0,003

0,022±0,008

0,008±0,002

0,014±0,007

ИДТ, %

5,75 ±1,26

5,03±0,87

4,08±1,19

0,08±0,08

-1,67±1,79

 

На 5-й день болезни в группе погибших собак выявили  увеличение ПВ (р=0,005), ТВ (р=0,043) и АЧТВ (р=0,005), высокое содержание РФМК (р=0, 002) и низкую активность антитромбина (р=0,005), при этом относительно первоначальных значений достоверно увеличились ПВ, ТВ и АЧТВ, а также РФМК, уменьшилось количество фибриногена и активность антитромбина.

 

Табл. 2. Показатели плазменного гемостаза

Показатель

Контроль

(n=10)

Выжившие (n=11)

Погибшие (n=4)

3-й день

5-й день

3-й день

5-й день

ПВ, с

8,87± 0,75

11,41±0,34

11,75±0,17

14,17±0,24

18,5±2,9

ТВ, с

9,86 ± 0,21

11,97±0,35

11,84±0,25

9,07±0,58

15,3±2,08

Фибриноген, г/л

2,92 ± 0,30

3,31±0,25

3,15±0,19

5,20±0,49

2,73±0,89

АЧТВ, с

12,29±0,94

13,84±0,42

13,10±0,22

18,03±1,54

26,37±1,50

РФМК, мг/100 мл

4,35 ± 0,28

5,82±0,65

5,02±0,42

12,97±1,15

17,30±1,17

Акт. АТIII, %

146,65 ± 4,30

122,39±2,71

125,71±2,54

105,3±3,16

88,63±14,93

 

Для формирования наглядной картины гемостазиологических изменений у погибших и выживших собак провели анализ полученных результатов в динамике, для чего использовали относительные величины, при этом за 100% принимали значение показателей гемостаза у контрольной группы собак. Параметры сосудисто-тромбоцитарного гемостаза (рис. 2) в группе выживших собак на 3-й день болезни были незначительно ниже, а ИДТ с АДФ выше на 49%,чем в контрольной группе, но к 5-му дню болезни различий не наблюдали. В группе погибших собак на 3-й день заболевания агрегационная способность тромбоцитов повышалась на 41% с АДФ, на 21% с коллагеном и на 15% с ристомицином относительно результатов контрольной группы. При этом существенно снижались индексы дезагрегации: на 81% с АДФ, на 77% с коллагеном и на 98,7% с ристомицином.

 

Рис. 2. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз у погибших и выживших собак (показатели контрольной группы приняты за 100%): а) – на 3-й день болезни, б) – на 5-й день болезни.

 

На 5-й день болезни в группе погибших собак по сравнению с показателями контрольной группы резко снизились все величины агрегации тромбоцитов – СИАТ с АДФ на 66%,  СИАТ с коллагеном и ристомицином на 87%. При этом дезагрегация под действием АДФ и ристомицина отсутствовала полностью, а дезагрегация с коллагеном уменьшилась на 87%.

На 3-й день болезни в группе выживших собак показатели плазменно-коагуляционного гемостаза (рис. 3) незначительно отличались от контрольной группы, за исключением увеличения ПВ на 28% и концентрации РФМК на 33%, тогда как в группе погибших собак изменения были более выражены – ПВ увеличилось на 59%, АЧТ – на 46%, фибриноген – на 78% и РФМК – на 198%, а также снизилась активность антитромбина на 29%.

 

Рис. 3. Плазменно-коагуляционный гемостаз у погибших и выживших собак (показатели контрольной группы приняты за 100%) :а) – на 3-й день болезни, б) – на 5-й день болезни.

 

К 5-му дню болезни коагуляционные показатели в группе выживших собак практически не отличались от контрольной группы, сохранилось только увеличенное на 32% ПВ. В группе погибших собак отмечены серьезные изменения – увеличение ПВ на 108%, ТВ – на 55%, АЧТВ – на 114%, РФМК – на 297%, вместе с понижением активности антитромбина на 40%.

Таким образом,  изменения в параметрах крови при парвовирусной инфекции возникают у всех заболевших собак, но у некоторых животных эти изменения выражены сильнее, что к 5-му дню болезни приводит к летальному исходу. В группе выживших собак присутствуют гемостазиологические отклонения, но к 5-му дню заболевания они достигают уровня, присущего здоровым животным, за счет компенсаторных процессов. В группе погибших собак уже на 3-й день болезни присутствует тромбоцитопения вместе с повышением тромбоцитарной функции и устойчивости образованных агрегатов, количество фибриногена и РФМК увеличиваются вместе с понижением активности антитромбина. К 5-му дню болезни у этих животных не происходит улучшения – усугубляются морфологические изменения клеточного состава крови, снижается тромбоцитарная функция, достоверно увеличиваются ПВ, ТВ и АЧТВ, РФМК, уменьшаются уровень фибриногена и активность антитромбина, что свидетельствует о наличии лабораторных признаков синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания. Этот синдром с преобладанием сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза служит закономерным итогом генерализованного поражения стенок сосудов при первичном воздействии на тромбоциты различных инфекционных агентов. При этом обнажаются субэндотелиальные структуры, которые активируют тромбоциты и внутреннюю систему свертывания крови через контактный фактор XII (фактор Хагемана) [14]. Повреждение вирусами и их токсинами эндотелия и других слоев сосудистой стенки, клеток крови при парвовирусном энтерите ведет к активации свертывающей системы и ухудшению тканевого кровотока, что способствует развитию осложнений и увеличивает вероятность неблагоприятного исхода.

На 3-й день болезни в качестве маркеров неблагоприятного прогноза можно выделить понижение количества тромбоцитов до 285,97±14,84х109/л, увеличение среднего объема тромбоцита до 8,5±1,7 fl, тромбокрита – до 0,53±0,02%, СИАТ с АДФ – до 131,67±9,28% и ристомицином – до 127,77±14,71%; снижение дезагрегации с АДФ до 1,03±1,03% и ристомицином до 0,08±0,08%, увеличение количества фибриногена до 5,2±0,49 г/л и РФМК до 12,97±1,15 мг/100мл вместе с понижением активности антитромбина до 105,3±3,16%. На 5-й день болезни с риском летального исхода связаны такие параметры, как прогрессирующее снижение количества тромбоцитов до 227±15,64 х109/л вместе с уменьшением среднего объема тромбоцита до 5,5±1,2 fl и тромбокрита до 0,21±0,03%, уменьшение СИАТ с АДФ до 31,67±12,03%, с коллагеном – до 15,53±4,26% и ристомицином – до 14,8±5,6%, а также дезагрегации на 81% с АДФ, на 77% – с коллагеном и на 98,7% – с ристомицином, увеличение ПВ с 14,17±0,24 до 18,5±2,9 с, ТВ – с 9,07±0,58 до 15,3±2,08 с, АЧТВ – с 18,03±1,54 с до 26,37±1,57 с,  РФМК – до 17,3±1,17 мг/100 мл, уменьшение фибриногена до 2,73±0,89 г/л и активности антитромбина до 88,63±14,93%.

About the authors

E. S. Baruzdina

Vologda State Dairy Farming Academy named after N.V. Vereshchagin

Author for correspondence.
Email: ENSobol@yandex.ru

Russian Federation, Vologda

E. N. Soboleva

Vologda State Dairy Farming Academy named after N.V. Vereshchagin

Email: ENSobol@yandex.ru

Russian Federation, Vologda

кандидат ветеринарных наук

References

  1. Власов Н.А., Уласов В.И., Черняева И.С., Элизбарашвили Э.И., Вахрамеева В.В., Васильев Д.А. Парвовирусы плотоядных и вызываемые ими болезни. – Ульяновск, 2000. – 35 с.
  2. Houston D.M., Ribble C.S., Head L.L. Risk factors associated with parvovirus enteritis in dogs: 283 cases (1982-1991) // J. Am. Vet. Med. Assoc. – 1996. – 208(4). – Р.542-546.
  3. Сулимов А.А., Уласов В.И. Парвовирусные инфекции плотоядных // Российский Ветеринарный Журнал. Мелкие Домашние Животные – 2008. – №2. – С.40- 45.
  4. Mathios E., Mylonakis, Iris Kalli, Timoleon S. Rallis Canine parvoviral enteritis: an update on the clinical diagnosis, treatment, and prevention // Veterinary Medicine: Research and Reports. – 2016. – P.91-100.
  5. Goddard A., Leisewitz A.L Canine parvovirus // Vet. Clin. North Am. Small Anim. Pract. – 2010. – №40(6). – Р.1041-1053.
  6. Gauthier V. Effects of Tetrastarch Administration on Hemostatic, Laboratory, and Hemodynamic Variables in Healthy Dogs and Dogs with Systemic Inflammation // A Thesis presented to The University of Guelph. - Guelph, Ontario, Canada. – 2013. - 164 рр.
  7. Баруздина Е.С. Возрастные особенности плазменно-коагуляционного гемостаза у собак, больных парвовирусной инфекцией// Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – 2018. – №2 (38). – С.4-10.
  8. Otto C.М., Riеsеr Т.M., Brooks М.B. Еvidеnсе of hipеrсoagulability in dogs with рaгvоviral еntеritis // J. Am. Vеt. Mеd. Assoс. – 2000. – №21(7). – Р. 1500-1504.
  9. Kocaturk M.S., Martinez O., Eralp A., Tvarijonaviciute J., Ceron Z., Yilmaz Prognostic value of serum acute phase proteins in dogs with parvoviral enteritis // J. Small Anim. Pract. – 2010. – №51(9). – Р.478-483.
  10. Goddard A., Leisewitz A.L., Christopher M.M., Duncan N.M., Becker P.J. Prognostic Usefulness of Blood Leukocyte Changes in Canine Parvoviral Enteritis // Journal of Veterinary Internal Medicine. – 2008. – №22(2). – Р.309–316.
  11. Schoeman J.P., Goddard A., Leisewitz A.L. Biomarkers in canine parvovirus enteritis // N.Z. Vet. J. – 2013. – №61(4). – Р.217-222.
  12. Баруздина Е.С., Ошуркова Ю.Л. Особенности функционирования системы гемостаза у здоровых собак в возрасте от двух до шести месяцев // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – 2016. – №3(31). – С.8-12.
  13. Балуда В. П., Баркаган З. С., Гольдберг Е.Д.. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. – Томск, 1980. – 304 с.
  14. Девяткин А. В. Клиническое значение нарушений микроциркуляции и гемореологии при гриппе и других острых респираторных вирусных инфекциях у больных с осложнениями и сопутствующими заболеваниями. – Дисс. … д. мед. наук: 14.00.10. М., 2003. – 272 с.

Supplementary files

Supplementary Files Action
1.
Fig. 1. Morphological parameters of platelets in dead and surviving dogs: a) - average platelet volume, fl, b) - platelet count,%.

Download (150KB) Indexing metadata
2.
Fig. 2. Vascular-platelet hemostasis in dead and surviving dogs (control group indicators are taken as 100%): a) on the 3rd day of illness, b) on the 5th day of illness.

Download (129KB) Indexing metadata
3.
Fig. 3. Plasma-coagulation hemostasis in dead and surviving dogs (indicators of the control group are taken as 100%): a) on the 3rd day of illness, b) on the 5th day of illness.

Download (130KB) Indexing metadata

Statistics

Views

Abstract - 112

PDF (Russian) - 59

Cited-By


PlumX

Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2019 Russian academy of sciences

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies