Prognostic usefulness of changes in hemostatic parameters of dogs with parvoviral enteritis

Full Text

Парвовирусная инфекция плотоядных вызывается ДНК-содержащим вирусом, широко распространена и приводит к тяжелому, угрожающему жизни состоянию [1, 2]. Основное патогенететическое проявление парвовирусной инфекции собак – индуцированная деструкция быстро делящихся клеток, включая клетки эпителия крипт кишечника, тимуса, лимфоузлов и клеток-предшественников костного мозга. Возникающая септицемия и эндотоксемия вызывают системный воспалительный процесс и гиперкоагуляцию, что приводит к мультиорганной дисфункции и смерти [3-5]. Системный воспалительный ответ организма зачастую связан с развитием синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС) [6].  В литературе имеются данные, указывающие на наличие нарушений в системе гемостаза при парвовирусной инфекции у собак, в частности гиперкоагуляции [7, 8]. Гемостазиологические параметры крови относительно постоянны у здоровых животных, поэтому их измерение у больных может информировать врача об ответе пациента на лечение или позволит использовать эти показатели как индикаторы прогноза [9-12].

Методика. Исследования выполняли на базе факультета ветеринарной медицины и биотехнологий Вологодской государственной молочно-хозяйственной академии имени Н.В. Верещагина. Контрольную группу животных составляли клинически здоровые собаки в возрасте от 2 до 6 месяцев (n=10). В опытные группы вошли собаки того же возраста, больные парвовирусным энтеритом (n=15). Из них 4 щенка погибли и составили  группу погибших собак, а 11 щенков выжили и составили группу выживших собак. Диагноз ставили с помощью клинического осмотра и выявления антигена парвовируса в фекалиях собак хроматографическим иммунохимическим методом с использованием  одношагового экспресс-теста VetExpert CPV Ag. Собакам опытных групп применяли стандартизированную терапию, включающую введение раствора Рингера-Локка 30-60 мл/кг/сут с целью регидратации, дезинтоксикации и восполнения электролитов, ампициллина 20-40 мг/кг каждые 8 ч внутривенно и цефтриаксона 50 мг/кг каждые 24 ч внутримышечно для профилактики бактериальной инфекции. Рвоту купировали с помощью подкожного введения маропитанта цитрата (Серения) в дозе 1 мг/10 кг каждые 24 ч первые 3-5 дней болезни. После купирования рвоты применяли Энтеросгель по 2-5 г 6 раз в сут перорально и диетический рацион Роял Канин Рекавери.

У животных опытных групп определяли гематологические и гемостатические показатели на 3-й и 5-й день болезни с момента появления клинических признаков. Уровень тромбокрита (PCT) и среднего объема тромбоцита (MPV) определяли с помощью автоматического гематологического анализатора Exigo 17 (Boule Medical A.B., Швеция). Количество тромбоцитов подсчитывали вручную в мазке крови, окрашенной по Романовскому-Гимзе. Адгезивно-агрегационную активность тромбоцитов определяли количественным методом с применением фотоэлектроколориметра КФК-2 по Howard M.A. [13]. Суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) с индукторами агрегации – АДФ (концентрация 0,1 мг/мл), коллагеном (концентрация 20 мг/мл) и ристомицином (концентрация 15 мг/мл). Величину плазменно-коагуляционного гемостаза определяли на коагулометре Thrombostat производства Behnk Elektronik (Германия) с помощью следующих показателей: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ); протромбиновое время (ПВ); тромбиновое время (ТВ); количественный состав фибриногена и растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК, ортофенантролиновый тест) и активность антитромбина (акт. АТIII).

Полученные в ходе исследования результаты обработаны с помощью программного пакета Statistica 6.1. Значения полученных результатов представлены в виде средней величины и стандартной ошибки средней. Результаты исследования со значением вероятности допущения альфа-ошибки, равные либо менее 5% (р≤0,05), расценивали как статистически значимые. Сравнение независимых выборок проводили с помощью критерия Манна-Уитни, зависимых – с помощью критерия Вилкоксона.

Результаты и обсуждение. Количество тромбоцитов на 3-й день болезни составило 350,12±16,68 х10⁹/л у выживших и 285,97±14,84х10⁹/л у погибших собак, что уже имеет существенные различия (р=0,0017), к 5-му дню в группе погибших собак отмечена тромбоцитопения (227±15,64х10⁹/л, р=0,043), которая обусловила значительные отличия от результатов группы выживших собак (р=0,0015), где количество тромбоцитов слегка увеличилось и составило 366,65±14,6х10⁹/л, и от параметров контрольной группы (р=0,0001). Тромбокрит в группе выживших собак на 3-й день болезни составил 0,41±0,03%, на 5-й день – 0,36±0,05%, что не отличалось от результатов контрольной группы (рис. 1). Средний объем тромбоцитов на 3-й день болезни у выживших животных составил 6,6±1,5 fl, к 5-му дню этот показатель достоверно увеличился до 9,2±2 fl (р=0,0031). В группе погибших собак тромбокрит на 3-й день болезни составил 0,53±0,02%, что достоверно (р=0,0018) отличалось от результатов контрольной группы. На 5-й день заболевания уровень тромбокрита уменьшился до 0,21±0,03% (р=0,0012), что существенно отличалось от результатов как контрольной группы (р=0,015), так и группы выживших собак (р=0,015). На 3-й день болезни у погибших животных средний объем тромбоцита увеличился до 8,5±1,7 fl (р=0,03),  к 5-му дню достоверно снизился до 5,5±1,2 fl (р=0,023).

 

Рис. 1. Морфологические параметры тромбоцитов у погибших и выживших собак: а) – средний объем тромбоцитов, fl, б) – тромбокрит, %.

 

Функциональная активность тромбоцитов у животных исследуемых групп представлена в табл. 1. На 3-й день болезни агрегационные способности тромбоцитов были выше в группе погибших собак, на что указывает разница в СИАТ с АДФ (р=0,005) и ристомицином (р=0,002) и ИДТ с АДФ (р=0,01) и ристомицином (р=0,02).

На 5-й день в группе погибших собак существенно уменьшились агрегационные свойства тромбоцитов, что выражалось в снижении СИАТ с АДФ (р=0,004), коллагеном (р=0,003) и ристомицином (р=0,004), при этом в группе выживших собак эти параметры незначительно повышались.

В показателях плазменно-коагуляционного гемостаза (табл. 2) на 3-й день болезни в группе погибших собак наблюдали увеличение ПВ (р=0,005) и АЧТВ (р=0,002), уменьшение ТВ (р=0,005), повышение количества фибриногена (р=0,01) и РФМК (р=0,005) и снижение активности антитромбина (р=0,005) относительно группы выживших животных.

 

Табл. 1. Показатели тромбоцитарного гемостаза

Показатель	Контроль (n=10)	Выжившие (n=11)		Погибшие (n=4)
		3-й день	5-й день	3-й день	5-й день
Агрегация с АДФ
СИАТ, %	92,96 ±10,23	77,46±6,8	86,15±7,34	131,67±9,28	31,67±12,03
СА, мин	0,01 ± 0,002	0,02±0,006	0,01±0,003	0,01±0,005	0,02±0,005
ИДТ, %	5,31 ±1,19	7,94±1,02	4,97±1,49	1,03±1,03	-1,1±1,1
Агрегация с коллагеном
СИАТ, %	114,01 ± 12,05	95,07±7,83	102,48±6,34	138,87±20,00	15,53±4,26
СА, мин	0,01 ± 0,003	0,0126±0,003	0,02±0,003	0,02±0,005	0,0162±0,001
ИДТ, %	7,15 ± 1,52	4,92±1,06	4,74±0,96	1,7±0,90	1,73±0,59
Агрегация с ристомицином
СИАТ, %	110,69 ±12,36	81,81±4,95	95,04±10,00	127,77±14,71	14,8±5,60
СА, мин	0,010 ±0,002	0,015±0,003	0,022±0,008	0,008±0,002	0,014±0,007
ИДТ, %	5,75 ±1,26	5,03±0,87	4,08±1,19	0,08±0,08	-1,67±1,79

 

На 5-й день болезни в группе погибших собак выявили  увеличение ПВ (р=0,005), ТВ (р=0,043) и АЧТВ (р=0,005), высокое содержание РФМК (р=0, 002) и низкую активность антитромбина (р=0,005), при этом относительно первоначальных значений достоверно увеличились ПВ, ТВ и АЧТВ, а также РФМК, уменьшилось количество фибриногена и активность антитромбина.

 

Табл. 2. Показатели плазменного гемостаза

Показатель	Контроль (n=10)	Выжившие (n=11)		Погибшие (n=4)
		3-й день	5-й день	3-й день	5-й день
ПВ, с	8,87± 0,75	11,41±0,34	11,75±0,17	14,17±0,24	18,5±2,9
ТВ, с	9,86 ± 0,21	11,97±0,35	11,84±0,25	9,07±0,58	15,3±2,08
Фибриноген, г/л	2,92 ± 0,30	3,31±0,25	3,15±0,19	5,20±0,49	2,73±0,89
АЧТВ, с	12,29±0,94	13,84±0,42	13,10±0,22	18,03±1,54	26,37±1,50
РФМК, мг/100 мл	4,35 ± 0,28	5,82±0,65	5,02±0,42	12,97±1,15	17,30±1,17
Акт. АТIII, %	146,65 ± 4,30	122,39±2,71	125,71±2,54	105,3±3,16	88,63±14,93

 

Для формирования наглядной картины гемостазиологических изменений у погибших и выживших собак провели анализ полученных результатов в динамике, для чего использовали относительные величины, при этом за 100% принимали значение показателей гемостаза у контрольной группы собак. Параметры сосудисто-тромбоцитарного гемостаза (рис. 2) в группе выживших собак на 3-й день болезни были незначительно ниже, а ИДТ с АДФ выше на 49%,чем в контрольной группе, но к 5-му дню болезни различий не наблюдали. В группе погибших собак на 3-й день заболевания агрегационная способность тромбоцитов повышалась на 41% с АДФ, на 21% с коллагеном и на 15% с ристомицином относительно результатов контрольной группы. При этом существенно снижались индексы дезагрегации: на 81% с АДФ, на 77% с коллагеном и на 98,7% с ристомицином.

 

Рис. 2. Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз у погибших и выживших собак (показатели контрольной группы приняты за 100%): а) – на 3-й день болезни, б) – на 5-й день болезни.

 

На 5-й день болезни в группе погибших собак по сравнению с показателями контрольной группы резко снизились все величины агрегации тромбоцитов – СИАТ с АДФ на 66%,  СИАТ с коллагеном и ристомицином на 87%. При этом дезагрегация под действием АДФ и ристомицина отсутствовала полностью, а дезагрегация с коллагеном уменьшилась на 87%.

На 3-й день болезни в группе выживших собак показатели плазменно-коагуляционного гемостаза (рис. 3) незначительно отличались от контрольной группы, за исключением увеличения ПВ на 28% и концентрации РФМК на 33%, тогда как в группе погибших собак изменения были более выражены – ПВ увеличилось на 59%, АЧТ – на 46%, фибриноген – на 78% и РФМК – на 198%, а также снизилась активность антитромбина на 29%.

 

Рис. 3. Плазменно-коагуляционный гемостаз у погибших и выживших собак (показатели контрольной группы приняты за 100%) :а) – на 3-й день болезни, б) – на 5-й день болезни.

 

К 5-му дню болезни коагуляционные показатели в группе выживших собак практически не отличались от контрольной группы, сохранилось только увеличенное на 32% ПВ. В группе погибших собак отмечены серьезные изменения – увеличение ПВ на 108%, ТВ – на 55%, АЧТВ – на 114%, РФМК – на 297%, вместе с понижением активности антитромбина на 40%.

Таким образом,  изменения в параметрах крови при парвовирусной инфекции возникают у всех заболевших собак, но у некоторых животных эти изменения выражены сильнее, что к 5-му дню болезни приводит к летальному исходу. В группе выживших собак присутствуют гемостазиологические отклонения, но к 5-му дню заболевания они достигают уровня, присущего здоровым животным, за счет компенсаторных процессов. В группе погибших собак уже на 3-й день болезни присутствует тромбоцитопения вместе с повышением тромбоцитарной функции и устойчивости образованных агрегатов, количество фибриногена и РФМК увеличиваются вместе с понижением активности антитромбина. К 5-му дню болезни у этих животных не происходит улучшения – усугубляются морфологические изменения клеточного состава крови, снижается тромбоцитарная функция, достоверно увеличиваются ПВ, ТВ и АЧТВ, РФМК, уменьшаются уровень фибриногена и активность антитромбина, что свидетельствует о наличии лабораторных признаков синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания. Этот синдром с преобладанием сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза служит закономерным итогом генерализованного поражения стенок сосудов при первичном воздействии на тромбоциты различных инфекционных агентов. При этом обнажаются субэндотелиальные структуры, которые активируют тромбоциты и внутреннюю систему свертывания крови через контактный фактор XII (фактор Хагемана) [14]. Повреждение вирусами и их токсинами эндотелия и других слоев сосудистой стенки, клеток крови при парвовирусном энтерите ведет к активации свертывающей системы и ухудшению тканевого кровотока, что способствует развитию осложнений и увеличивает вероятность неблагоприятного исхода.

На 3-й день болезни в качестве маркеров неблагоприятного прогноза можно выделить понижение количества тромбоцитов до 285,97±14,84х10⁹/л, увеличение среднего объема тромбоцита до 8,5±1,7 fl, тромбокрита – до 0,53±0,02%, СИАТ с АДФ – до 131,67±9,28% и ристомицином – до 127,77±14,71%; снижение дезагрегации с АДФ до 1,03±1,03% и ристомицином до 0,08±0,08%, увеличение количества фибриногена до 5,2±0,49 г/л и РФМК до 12,97±1,15 мг/100мл вместе с понижением активности антитромбина до 105,3±3,16%. На 5-й день болезни с риском летального исхода связаны такие параметры, как прогрессирующее снижение количества тромбоцитов до 227±15,64 х10⁹/л вместе с уменьшением среднего объема тромбоцита до 5,5±1,2 fl и тромбокрита до 0,21±0,03%, уменьшение СИАТ с АДФ до 31,67±12,03%, с коллагеном – до 15,53±4,26% и ристомицином – до 14,8±5,6%, а также дезагрегации на 81% с АДФ, на 77% – с коллагеном и на 98,7% – с ристомицином, увеличение ПВ с 14,17±0,24 до 18,5±2,9 с, ТВ – с 9,07±0,58 до 15,3±2,08 с, АЧТВ – с 18,03±1,54 с до 26,37±1,57 с,  РФМК – до 17,3±1,17 мг/100 мл, уменьшение фибриногена до 2,73±0,89 г/л и активности антитромбина до 88,63±14,93%.

About the authors

E. S. Baruzdina

Vologda State Dairy Farming Academy named after N.V. Vereshchagin

Author for correspondence.
Email: ENSobol@yandex.ru
Russian Federation, Vologda

E. N. Soboleva

Vologda State Dairy Farming Academy named after N.V. Vereshchagin

Email: ENSobol@yandex.ru

кандидат ветеринарных наук

Russian Federation, Vologda

References

Supplementary files