Разработка иммуноферментного анализа для оценки иммуногенности при производстве инактивированной цельновирионной коронавирусной вакцины

Обоснование. Оценка специфической активности (иммуногенности) методом реакции нейтрализации живого вируса SARS-CoV-2 II группы патогенности сыворотками иммунизированных животных — один из основных анализов при выпускающем контроле инактивированной вакцины против коронавирусной инфекции. Но при этом необходимо соблюдать определенные ограничения для лаборатории — наличие зоны биологической безопасности. Разработка аналога реакции нейтрализации на основе иммуноферментного анализа позволяет контролировать вакцину в более короткие сроки в условиях, не требующих высокого класса биологической безопасности.

Цель исследования — разработка платформы на основе иммуноферментного анализа, способной достоверно оценить появление нейтрализующих антител при иммунизации животных вакцинным препаратом против коронавирусной инфекции.

Материалы и методы. В клетках Escherichia coli осуществляли гетерологическую экспрессию гена рекомбинантного рецепторсвязывающего домена, слитого с С-концевой гексагистидиновой последовательностью, после чего целевой продукт выделяли и очищали на металл-аффинном сорбенте WorkBeads NiMAC (Bio-Works). Полученный белок в иммуноферментной тест-системе служил антигеном для сорбции. Сыворотки мышей, иммунизированных вакцинным препаратом, проверяли на нейтрализующую активность против вируса SARS-CoV-2, кроме того, оценивали взаимодействие молекул в разработанном иммуноферментном анализе.

Результаты. В иммуноферментном анализе сыворотки с высоким нейтрализующим титром показали высокую степень сцепления с рекомбинантным рецепторсвязывающим доменом, слитым с С-концевой гексагистидиновой последовательностью, тогда как сыворотки не иммунизированных животных или с титром в реакции нейтрализации меньше чем 1 : 8 не детектировались. Коэффициенты корреляции Спирмена и Пирсона титров вируснейтрализующих антител и значений оптической плотности раствора в иммуноферментном анализе составили 0,759 и 0,76 соответственно. Разработанная платформа может применяться как полуколичественный метод оценки иммуногенности вакцинного препарата против коронавирусной инфекции.

Заключение. Разработанная нами платформа позволяет достоверно оценивать иммуногенность инактивированной коронавирусной вакцины в условиях, не требующих высокого класса биологической безопасности.