РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ПЕПТИДНОГО АНТАГОНИСТА К РЕЦЕПТОРУ ОРЕКСИНОВ



Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Цель исследования: синтез гена, кодирующего сконструированный ранее искусственный белок анторекс - антагонист рецептора орексина ОхR1, изучение его экспрессии в клетках Escherichia coli и разработка метода очистки данного белка из лизатов бактериальных клеток. Использовались методы химико-ферментативного синтеза ДНК, генетической инженерии, селекции и хроматографической очистки белков. Результаты: синтезирован ген, кодирующий белок анторекс, последовательно получены содержащая данный ген плазмидная ДНК рЕТ-antorex и штамм бактерий Escherichia coli BL21(pЕT-аntorex) - стабильный продуцент рекомбинантного белка анторекс, разработаны методы культивирования штамма-продуцента и хроматографической очистки белка анторекс с помощью обратнофазной и ионообменной хроматографии. Произведено культивирование полученного штамма-продуцента в ферментере объемом 10 литров. Наработана опытная партия белка анторекс массой 480 мг с чистотой 97,5%. Заключение: разработанные методы продукции искусственного белка анторекс в бактериальных клетках и его очистки позволяют нарабатывать данный белок для проведения доклинических и клинических испытаний.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

И В Духовлинов

Институт экспериментальной медицины

Н А Климов

Институт экспериментальной медицины

Е А Федорова

Институт экспериментальной медицины

Ю В Жеребцова

Институт экспериментальной медицины

Е А Черняева

Институт экспериментальной медицины

А И Орлов

Институт экспериментальной медицины

Список литературы

  1. Sakurai Т. Reverse pharmacology of orexin: from an orphan GPCR to integrative physiology // Regulatory peptides. 2005. Vol. 126, No 1. Р. 3-10.
  2. DiLeone R.J., Georgescu D., Nestler E.J. Lateral hypothalamic neuropeptides in reward and drug addiction // Life Sci. 2003. Vol. 73, No 6. P. 759-768.
  3. Paneda C., Winsky-Sommerer R., Boutrel B., de Lecea L. The corticotropin-releasing factor hypocretin connection: implications in stress response and addiction // Drug News Perspect. 2005. Vol. 18, No 4. P. 250-255.
  4. Harris G.C., Wimmer M., Aston J.G. A role for lateral hypothalamic orexin neurons in reward seeking // Nature. 2005. Vol. 437, No 7058. P. 556-559.
  5. Borgland S.L., Taha S.A., Sarti F., Fields H.L., Bonci A. Orexin A in the VTA is critical for the induction of synaptic plasticity and behavioral sensitization to cocaine // Neuron. 2006. Vol. 49, No 4. P. 589-601.
  6. Pasumarthi R.K., Reznikov L.R., Fadel J. Activation of orexin neurons by acute nicotine // Eur. J. Pharmacol. 2006. Vol. 535, No 1-3. P. 172-176.
  7. Narita M., Nagumo Y., Hashimoto S., Narita M., Khotib J., Miyatake M., Sakurai T., Yanagisawa M., Nakamachi T., Shioda S., Suzuki T. Direct involvement of orexinergic systems in the activation of the mesolimbic dopamine pathway and related behaviors induced by morphine // J. of Neurosci. 2006. Vol. 26, No 2. P. 398-405.
  8. Majumder K. Ligation-free gene synthesis by PCR: synthesis and mutagenesis at multiple loci of a chimeric gene encoding OmpA signal peptide and hirudin // Gene. 1992. Vol. 110, No 1. P. 89-94.
  9. Laemmly U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685.
  10. Studier F.W. Stable expression clones and auto-induction for protein production in E. coli // Methods Mol Biol. 2014. Vol. 1091, No 1. P. 17-32.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Духовлинов И.В., Климов Н.А., Федорова Е.А., Жеребцова Ю.В., Черняева Е.А., Орлов А.И., 2017

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 74760 от 29.12.2018 г.