Сравнительная эффективность Моликсана и Глутоксима на модели токсического поражения печени противотуберкулезными препаратами
- Авторы: Бугаев П.А.1, Башарин В.А.1, Антушевич А.Е.1
-
Учреждения:
- ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ
- Выпуск: Том 17, № 2 (2019)
- Страницы: 49-54
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья получена: 08.08.2019
- Статья одобрена: 08.08.2019
- Статья опубликована: 09.08.2019
- URL: https://journals.eco-vector.com/RCF/article/view/15616
- DOI: https://doi.org/10.17816/RCF17249-54
- ID: 15616
Цитировать
Полный текст
Аннотация
В связи с высокой частотой развития поражений печени, обусловленных противотуберкулезными средствами, показана возможность использования для гепатопротекции соединений на основе окисленного глутатиона. Цель исследования заключалась в проведении сравнительной оценки гепатозащитных свойств моликсана и глутоксима при поражениях печени противотуберкулезными препаратами. Для достижения поставленной цели было необходимо выполнить следующие задачи: на модели токсического поражения печени, вызванного противотуберкулезными препаратами (изониазид, рифампицин, пиразинамид), изучить эффективность глутоксима и моликсана по биохимическим и морфологическим показателям; на основании полученных данных определить наиболее эффективную схему их применения.
Материалы и методы. Исследование выполнено на 90 белых беспородных крысах-самцах. Противотуберкулезные препараты (ПП) вводили животным ежедневно в течение 14 дней в следующих дозах: изониазид — 50 мг/кг внутрибрюшинно, рифампицин — 250 мг/кг и пиразинамид — 45 мг/кг внутрижелудочно. Глутоксим и моликсан вводили ежедневно в течение 14 дней в дозах: 20 и 40 мг/кг —глутоксим, 30 мг/кг — моликсан внутрибрюшинно за 2 ч до введения ПП. Животные были разделены на пять групп по 18 особей в каждой: 1-я группа — интактные животные, 2-я — контрольная ПП, 3-я — ПП + глутоксим 20 мг/кг, 4-я — ПП + глутоксим 40 мг/кг, 5-я — ПП + моликсан 30 мг/кг. На 15-й день определяли биохимические показатели крови, проводили забор печени для морфогистологического исследования и определения уровня перекисного окисления липидов в ее гомогенатах по концентрации диеновых конъюгатов и малонового диальдегида.
Результаты и выводы. В результате экспериментального исследования установлено, что более выраженное гепатозащитное действие оказывал моликсан.
Ключевые слова
Полный текст
ВВЕДЕНИЕ
Согласно данным литературы применение изониазида в терапевтических дозах приводит к развитию у 20 % пациентов острого гепатоцеллюлярного некроза [8]. При этом клинические признаки гепатита отмечаются в 0,1 % случаев, повышение в крови активности трансаминаз наблюдается у 10–20 % пациентов [4]. Стоит отметить, что частота и тяжесть токсических поражений печени возрастает при комбинации изониазида с рифампицином вследствие индукции рифампицином цитохрома Р450 [8]. По данным зарубежных клинических исследований, из 3900 больных туберкулезом пациентов, получавших в качестве лечения комбинацию изониазида с рифампицином, у 150 (3,8 %) развивались лекарственно индуцированные поражения печени [10]. В настоящее время отсутствуют точные данные по возникновению фатальных поражений печени. Однако американские специалисты приводят данные о 8 погибших из 174 человек с лекарственным гепатитом в клиническом исследовании US Public Health Service Surveillance Study, которое включало 13 838 человек [8].
Таким образом, проблема токсических поражений печени при использовании противотуберкулезных средств является актуальной. Для профилактики токсических гепатопатий используют препараты, которые показали свою активность как в экспериментах, так и в клинических исследованиях. В настоящее время все больший интерес вызывают пептидные препараты на основе окисленного глутатиона, такие как моликсан и глутоксим, которые продемонстрировали свою эффективность при различных патологиях, в том числе при лечении хронических вирусных гепатитов В и С, острых крайне тяжелых отравлениях этанолом [1, 3, 9].
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ
Цель исследования заключалась в проведении сравнительной оценки гепатозащитных свойств моликсана и глутоксима при поражениях печени противотуберкулезными препаратами (ПП). Для достижения поставленной цели решали следующие задачи: на модели токсического поражения печени, вызванного ПП (изониазид, рифампицин, пиразинамид), изучить эффективность глутоксима и моликсана по биохимическим и морфологическим показателям; на основании полученных данных определить наиболее эффективную схему применения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эффективность препаратов моликсан и глутоксим изучали на модели поражения печени изониазидом в комбинации с рифампицином и пиразинамидом. Исследование проводили на 90 белых беспородных крысах-самцах из питомника РАН «Рапполово». Экспериментальных животных содержали в условиях вивария не более 6 особей в одной клетке. Содержание, питание и выведение из эксперимента соответствовали нормативным документам [6].
Противотуберкулезные препараты вводили животным ежедневно в течение 14 дней в следующих дозах: изониазид — 50 мг/кг внутрибрюшинно, рифампицин — 250 мг/кг и пиразинамид — 45 мг/кг внутрижелудочно [2]. Глутоксим (20 и 40 мг/кг) и моликсан (30 мг/кг) вводили ежедневно в течение 14 дней внутрибрюшинно за 2 ч до введения ПП. Животные были разделены на пять групп по 18 особей в каждой: 1-я группа — интактные животные, 2-я — контрольная ПП, 3-я — ПП + глутоксим 20 мг/кг, 4-я — ПП + глутоксим 40 мг/кг, 5-я — ПП + моликсан 30 мг/кг.
На 15-й день эксперимента у животных из хвостовой вены забирали кровь, после чего подвергали их эвтаназии, выполняли патологоанатомическое вскрытие и извлекали печень для определения печеночного коэффициента, проведения морфогистологических и биохимических (определение уровня перекисного окисления липидов — ПОЛ) исследований. Активность ПОЛ в гомогенатах печени оценивали по концентрации диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА). Концентрацию ДК определяли по методике И.Д. Стальной [7]. Содержание МДА в печени крыс определяли по методу M. Uchiyama [11].
Статистическую обработку экспериментальных данных осуществляли при помощи программ Excel for Windows, Statistica 10 с расчетом среднего значения и ошибки среднего. Значимыми считали различия при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
При введении ПП в указанных дозах в течение 14 суток гибель животных не была зарегистрирована. У животных 2-й (контрольной) группы, получавших только ПП, отмечались выраженные гепатотоксические реакции, которые проявлялись в значимом повышении относительной массы печени (печеночного коэффициента) до 3,75 ± 0,07 % по сравнению с 2,86 ± 0,1 % в интактной группе (рис. 1), значимом повышении (в 8,4 раза) концентрации общего билирубина в сыворотке крови в контрольной группе по сравнению с интактной (табл. 1). У животных контрольной группы наблюдалось повышение активности процессов перекисного окисления липидов в печени: содержание ДК и МДА в гомогенатах печени крыс контрольной группы значимо превышало аналогичные показатели интактной группы: ДК — в 1,77 раза, а МДА — в 1,89 раза (рис. 2).
Рис. 1. Относительная масса печени (печеночный коэффициент) на 15-й день эксперимента у крыс, получавших комплекс противотуберкулезных препаратов (ПП), с лечением и без лечения, %, M ± mx. *р ≤ 0,05 в сравнении с интактной группой; # в сравнении с контрольной группой (t-критерий Стьюдента); n = 18 в каждой группе
Рис. 2. Влияние глутоксима и моликсана на содержание диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА) в гомогенатах печени крыс, получавших комплекс противотуберкулезных препаратов, 15-й день эксперимента, M ± mx. *р ≤ 0,05 в сравнении с интактной группой; # в сравнении с контрольной группой; ^в сравнении с 3-й группой (t-критерий Стьюдента); n = 18 в каждой группе
В результате морфогистологического исследования печени у крыс контрольной группы были выявлены полиморфные патологические изменения в паренхиме: балочное строение частично сохранено лишь в некоторых образцах, отсутствует в обширных участках с выраженными дегенеративными (вплоть до некробиотических) изменениями гепатоцитов в виде расширения, базофилии и комковатости цитоплазмы, литических изменений ядер. Описанные изменения имели как очаговый, так и более распространенный характер, отмечались в центролобулярных и перипортальных отделах печеночной дольки (рис. 3).
Рис. 3. Печень крысы после ежедневного введения комплекса противотуберкулезных препаратов, контроль, 15-й день эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×250. 1 — нарушение балочного строения, обширные поля дегенеративно измененных гепатоцитов; 2 — литически измененные ядра гепатоцитов; 3 — гепатоциты с расширением, базофилией и комковатостью цитоплазмы
Использование глутоксима в качестве средства коррекции возникающих при применении комплекса ПП токсических поражений печени приводило к значительному снижению их выраженности. При этом наилучший эффект отмечался при применении глутоксима в дозе 40 мг/кг. Положительное влияние препарата подтверждается статистически значимым снижением печеночного коэффициента по сравнению с контрольной группой (см. рис. 1), достоверным снижением (в 1,73 раза) концентрации общего билирубина в сыворотке крови в 4-й группе, по сравнению с контрольной группой (см. табл. 1). Кроме того, у крыс, получавших глутоксим в дозе 40 мг/кг, наблюдалось значимое, по сравнению с контрольной группой, снижение концентрации в гомогенатах печени продуктов окислительной деградации липидов: ДК — в 1,47 раза, МДА — в 1,82 раза (см. рис. 2). Следует отметить, что концентрация ДК и МДА в 4-й группе статистически не отличалась от показателей в интактной группе, что свидетельствует о полной нормализации перекисного окисления липидов, нарушенного в результате воздействия ПП.
Таблица 1. Влияние глутоксима и моликсана на биохимические показатели крови крыс, получавших комплекс противотуберкулезных препаратов, 15-й день эксперимента, M ± mx
Показатель | Группа | ||||
1-я, интактные животные | 2-я, контроль ПП | 3-я, ПП + глутоксим 20 мг/кг | 4-я, ПП + глутоксим 40 мг/кг | 5-я, ПП + моликсан 30 мг/кг | |
АЛТ, ЕД/л | 62,10 ± 10,36 | 40,63 ± 4,96 | 47,42 ± 2,08 | 37,40 ± 1,84 | 36,22 ± 2,03 |
АСТ, ЕД/л | 226,60 ± 25,73 | 165,87 ± 7,54 | 190,80 ± 16,17 | 142,48 ± 9,81 * | 141,88 ± 9,31 |
Общий белок, г/л | 63,65 ± 2,82 | 57,58 ± 1,60 | 63,63 ± 1,56 | 60,47 ± 2,09 | 60,10 ± 1,76 |
Общий билирубин, мкмоль/л | 1,50 ± 0,33 | 12,52 ± 1,56 * | 10,98 ± 0,56 * | 7,25 ± 0,53 *#^ | 3,07 ± 0,60 #^× |
ЛДГ, ЕД/л | 442,3 ± 31,3 | 448,0 ± 41,0 | 486,8 ± 64,6 | 349,0 ± 44,3 | 349,7 ± 46,7 |
Щелочная фосфатаза, ЕД/л | 171,8 ± 29,6 | 122,7 ± 21,1 | 118,8 ± 25,8 | 114,8 ± 24,0 | 116,3 ± 25,2 |
Примечание: *р ≤ 0,05 в сравнении с интактной группой; # в сравнении с контрольной группой; ^ в сравнении с 3-й группой; × в сравнении с 4-й группой (t-критерий Стьюдента); n = 18 в каждой группе. ПП — противотуберкулезный препарат. |
На гистологических препаратах печени крыс 4-й группы патологические изменения в паренхиме печени, по сравнению с контрольной группой, выражены существенно меньше: балочное строение было сохранено, некробиотические изменения не выявлены, наблюдались только фокальные дистрофические изменения гепатоцитов, преимущественно в центролобулярных отделах. Кроме того, глутоксим улучшал гемодинамику печени: в гистологических препаратах интактной группы и группы, получавшей глутоксим, зарегистрировано выраженное полнокровие центральных вен, в то время как в контрольной группе центральные вены преимущественно были малокровны (рис. 4).
Рис. 4. Печень крысы после ежедневного введения комплекса противотуберкулезных препаратов и лечения глутоксимом в дозе 40 мг/кг, 15-й день эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×250. 1 — фокальные дистрофические изменения гепатоцитов; 2 — неизмененные печеночные балки; 3 — неизмененные гепатоциты в перипортальных отделах печеночной дольки
Применение глутоксима в дозе 20 мг/кг также оказывало защитное действие на печень крыс, получавших ПП, но оно было менее выраженным: концентрация общего билирубина в 3-й группе была выше, чем в 4-й, и значимо не отличалась от аналогичного показателя контрольной группы (см. табл. 1). Глутоксим в дозе 20 мг/кг способствовал снижению интенсивности ПОЛ в гепатоцитах, о чем свидетельствует достоверное снижение содержания ДК и МДА в гомогенатах печени по сравнению с контрольной группой, при этом концентрация МДА в печени крыс 3-й группы была значимо выше показателя интактной группы, группы, получавшей препарат в дозе 40 мг/кг, и группы, получавшей моликсан в дозе 30 мг/кг (см. рис. 2).
При морфогистологическом исследовании была зафиксирована тенденция к нормализации структуры печени, но эффект был менее выраженным, чем при использовании глутоксима в дозе 40 мг/кг, то есть наблюдался дозозависимый эффект. На гистологических срезах печени животных, получавших глутоксим в дозе 20 мг/кг, структура и балочное строение паренхимы было сохранно во всех образцах. Некровоспалительных изменений в перипортальных отделах печеночных долек выявлено не было, однако в ряде препаратов в центролобулярных отделах отмечались дистрофические изменения мелких групп гепатоцитов, вплоть до дегенеративных, с формированием зернистости цитоплазмы и кариолизиса, при этом данные изменения носили менее выраженный характер, чем в контрольной группе.
Моликсан в дозе 30 мг/кг для коррекции нарушений со стороны печени при интоксикации ПП оказался еще более эффективным по сравнению с глутоксимом. Как видно из табл. 1, при биохимическом исследовании крови концентрация общего билирубина в сыворотке крови животных, получавших моликсан, достоверно отличалась от таковой в контрольной группе, а также в группах, получавших глутоксим.
Введение моликсана в дозе 30 мг/кг сопровождалось достоверным снижением концентрации ДК и МДА по сравнению с контрольной группой (см. рис. 2). Содержание ДК в печени крыс 5-й группы было в 1,55 раза ниже, чем у крыс контрольной группы. Концентрация МДА в гомогенатах печени при применении моликсана была статистически значимо ниже показателя не только в контрольной группе, но и в группе, получавшей глутоксим в дозе 20 мг/кг.
Морфогистологическое исследование срезов печени крыс, получавших моликсан, также свидетельствовало о наличии выраженной тенденции к нормализации структуры печеночной ткани по сравнению с контрольной группой. При этом наилучшая гистологическая картина отмечалась при использовании моликсана в дозе 30 мг/кг. Во всех препаратах структура ткани печени и балочное строение паренхимы были сохранены, в 50 % образцов наблюдались незначительные изменения мелких групп гепатоцитов в виде базофильной зернистости цитоплазмы, встречающиеся преимущественно в центролобулярных отделах печеночных долек, в перипортальных отделах некровоспалительные изменения отсутствовали. В половине образцов патологических изменений паренхимы печени по сравнению с интактной группой зарегистрировано не было (рис. 5).
Рис. 5. Печень крысы после ежедневного введения комплекса противотуберкулезных препаратов и лечения моликсаном в дозе 30 мг/кг (слева) и интактной крысы (справа), 15-й день эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×250. Слева: 1 — центральная вена; 2 — неизмененные печеночные балки. Справа: 1 — неизмененные печеночные балки
Таким образом, использование глутоксима и моликсана в качестве гепатопротекторов при поражениях печени ПП оказалось эффективным, при этом уровень гепатозащитной активности глутоксима носил дозозависимый характер.
Механизм токсического поражения печени изониазидом обусловлен повреждающим действием N-ацетилконъюгата (N-ацетилизониазида), образующегося в процессе метаболизма препарата под влиянием N-ацетилтрансферазы 2 (NAT2). Существует две гипотезы возникновения токсической гепатопатии при комбинированном применении изониазида с рифампицином. Согласно первой теории изониазид в процессе метаболизма превращается в ацетилгидразин с последующим образованием свободных радикалов, при этом процесс не индуцируется рифампицином, согласно второй — происходит прямой гидролиз изониазида до изоникотиновой кислоты и гидразина под воздействием рифампицина [8]. Кроме того, полученные нами данные о резком повышении (в 8,4 раза) концентрации общего билирубина у крыс, получавших ПП, вероятнее всего, обусловлены развитием у животных синдрома внутрипеченочного холестаза вследствие повреждения гепатоцитов и желчных капилляров, о чем свидетельствует нарушенное балочное строение паренхимы печени отравленных животных на гистологических срезах.
Эффективность моликсана и глутоксима, являющихся дисульфидами глутатиона, объясняется, по-видимому, их участием в тиол-дисульфидном обмене гепатоцитов. Известно, что в ходе окислительного стресса в цитозоле оксиленный глутатион обеспечивает процесс S-глутатионилирования белков, таким образом защищая белковые молекулы от других необратимых форм окисления [5]. Более высокая эффективность моликсана при этом, по всей видимости, связана с присутствием в его составе инозина, что способствует улучшению микроциркуляции в паренхиме печени, восстановлению активности аэробных процессов в гепатоцитах и улучшению их энергообеспечения.
Выраженные улучшения по сравнению с контрольной группой отмечены у всех животных, получавших как глутоксим, так и моликсан, что свидетельствует об эффективности данных препаратов при поражениях печени противотуберкулезными средствами.
ВЫВОДЫ
В результате экспериментального исследования показано выраженное гепатозащитное действие моликсана и глутоксима. При этом наилучший эффект отмечен при применении моликсана, а эффективность глутоксима носила дозозависимый характер.
Гепатопротекторные свойства моликсана могут стать основанием для проведения дальнейших клинических исследований по возможному применению препарата в комплексной терапии туберкулеза.
Об авторах
Пётр Андреевич Бугаев
ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ
Автор, ответственный за переписку.
Email: petr-bugaev@mail.ru
начальник отделения клиники военно-полевой терапии
Россия, 194044, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6ЖВадим Александрович Башарин
ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ
Email: basharin1@mail.ru
д-р мед. наук, профессор, начальник кафедры военной токсикологии и медицинской защиты
Россия, 194044, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6ЖАлександр Евгеньевич Антушевич
ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ
Email: a.antushevich@mail.ru
д-р мед. наук, профессор, старший научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории военной терапии научно-исследовательского центра
Россия, 194044, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6ЖСписок литературы
- Антушевич А.Е., Бузанов Д.В., Антонов В.Г., и др. Оценка эффективности применения инозина глицил-цистеинил-глутамата динатрия при острых тяжелых отравлениях этанолом // Вестник Российской военно-медицинской академии. – 2017. – № 2. – С. 7–12. [Antushevich AE, Buzanov DV, Antonov VG, et al. Evaluation of effectiveness of inosine glycyl-cysteinyl-glutamate disodium in acute severe poisoning with ethanol. Vestnik Rossiiskoi voenno-medicinskoi akademii. 2017;(2):7-12. (In Russ.)]
- Васильева С.Н. Экспериментальное обоснование использования глутоксима в качестве средства сопровождения этиотропной терапии генерализованного туберкулеза: Автореф. дис. … канд. мед. наук. – СПб., 2004. – 24 с. [Vasil’eva SN. Ehksperimental’noe obosnovanie ispol’zovaniya glutoksima v kachestve sredstva soprovozhdeniya ehtiotropnoi terapii generalizovannogo tuberkuleza. [dissertation abstract] Saint Petersburg; 2004. 24 р. (In Russ.)].Доступно по: https://search.rsl.ru/ru/record/01003242496. Ссылка активна на 16.12.2018.
- Гребенюк А.Н., Рейнюк В.Л., Антушевич А.Е., и др. Эффективность гепатопротектора с пептидным компонентом моликсана при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом // Токсикологический вестник. – 2014. – № 4. – С. 18–24. [Grebenyuk AN, Reiniuk VL, Antushevich AE, et al. Effectiveness of hepatoprotector with peptide component molixan in treatment of heaviest acute intoxications by. Toxicological Review. 2014;(4):18-24. (In Russ.)]
- Иванова Д.А. Нежелательные побочные реакции при лечении больных туберкулезом // Туберкулез и болезни легких. – 2011. – № 36. – С. 60–69. [Ivanova DA. Nezhelatel’nye pobochnye reakcii pri lechenii bol’nyh tuberkulyozom. Tuberculosis and lung diseases. 2011;(36):60-69. (In Russ.)]
- Наумова А.А. Влияние глутоксима и моликсана на внутриклеточную концентрацию Са2+ в макрофагах: роль каскада метаболизма арахидоновой кислоты и актинового цитоскелета: Автореф. дис. … канд. биол. наук. – СПб., 2017. – 23 с. [Naumova AA. Vliyanie glutoksima i moliksana na vnutrikletochnuyu koncentraciyu Ca2+ v makrofagah: rol’ kaskada metabolizma arahidonovoi kisloty i aktinovogo citoskeleta [dissertation]. Saint Petersburg; 2017. 23 р. (In Russ.)]
- Приказ Минздрава СССР от 12.08.1977. № 755 «О мерах по дальнейшему совершенствованию форм работы с использованием экспериментальных животных». – М., 1977. [Order USSR Ministry No. 755 “O merakh po dal’nejshemu sovershenstvovaniyu form raboty s ispol’zovaniem eksperimental’nykh zhivotnykh”. Moscow; 1977. (In Russ.)]. Доступно по: http://primatologia.ru/images/NII/GLP/3_2_prikaz_minzdrawa_o_merah_zhiwotnyh.pdf. Ссылка активна на 12.04.2019.
- Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных жирных кислот // Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. – М.: Медицина, 1977. – С. 63–64. [Stal’naya ID. Metod opredeleniya dienovoi kon’yugacii nenasyshchennyh zhirnyh kislot. In: Sovremennye metody v biohimii. Ed by V.N. Orekhovich. Moscow: Medicina; 1977. Р. 63–64. (In Russ.)]
- Суханов Д.С., Оковитый С.В. Гепатотропные средства в терапии поражений печени противотуберкулезными препаратами. – СПб.: Тактик-Студио, 2012. – 60 с. [Suhanov DS, Okovityj SV. Gepatotropnye sredstva v terapii porazhenii pecheni protivotuberkulyoznymi preparatami. Saint Petersburg: Taktik-Studio; 2012. 60 р. (In Russ.)]
- Халютин Д.А., Игнатенко Т.Т., Кузнецова А.К., Чайкина М.А. Оценка эффективности моликсана при острой интоксикации метанолом по критерию выживаемости / Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 55-летию ФГУП «НИИ ГПЭЧ» ФМБА России «Медико-биологические проблемы обеспечения химической безопасности РФ»: тез. докл. – СПб., 2017. – С. 267–268. [Halyutin DA, Ignatenko TT, Kuznecova AK, Chajkina MA. Ocenka ehffektivnosti moliksana pri ostroi intoksikacii metanolom po kriteriyu vyzhivaemosti. Vserossiiskaya nauchno-prakticheskaya konferenciya, posvyashchyonnaya 55-letiyu NII GPEHCH FMBA Rossii “Mediko-biologicheskie problemy obespecheniya himicheskoi bezopasnosti RF”: tez. dokl. Saint Petersburg; 2017. Р. 267–268. (In Russ.)]
- Gaude GS, Chaudhury A, Hattiholi J. Drug-induced hepatitis and the risk factors for liver injury in pulmonary tuberculosis patients. J Family Med Prim Care. 2015;4(2):238-243. https://doi.org/10.4103/2249-4863.154661.
- Michara M, Uchiyama M. Determination of malonaldehyde precursor in tissues by thiobarbituric acid test. Anal Biochem. 1978;86(1):271-278. https://doi.org/10.1016/0003-2697(78)90342-1.
![](/img/style/loading.gif)